)化合物 (結構式5 )，但得到的往往是一個磷酸二氫根配體的Pt (IV)化合物(結構式3 )、二個磷酸二 氫根配體的Pt(IV)化合物和磷酸的混合物，無法分離。
[0037
[0038]結構式5.本發明合成的雙磷酸根的Pt (IV)抗癌化合物。
[0039] 本發明的Pt(IV)化合物具有較好的水溶性，采用常規的方法測得室溫下分別大于 25mg/ml(PPtl)，100mg/ml(PPt2)，明顯高于順鉬（lmg/ml)、卡鉬（17mg/ml)和奧沙利鉬 (8mg/ml)。水溶液穩定性采用核磁共振譜的方法測定:取2mg樣品，溶于0.5ml D2O中，室溫 放置，不同時間點采用BrukerAM-500測定31P匪R，比較各個時間點測得的 31P匪R與起始 的31P WR，結果表明：兩個化合物在3天內31P NMR無明顯變化，說明它們的水溶性具有很好 的穩定性，穩定時間至少3天，滿足作為藥物使用的要求。
[0040] 本發明的Pt(IV)化合物體外具有很高的抗癌活性，以PPtl為例。PPtl體外對人肝 癌細胞株SMMC-7721、人非小細胞肺癌細胞株A549、人卵巢癌細胞株SK-0V-3、人結腸癌細胞 株SW480的生長均有明顯的抑制作用，抗癌活性明顯大于水溶性Pt(II)抗癌藥物-卡鉑，而 且整體抗癌活性與順鉑相當。同時，可以預測本發明的Pt(IV)化合物在體內對癌細胞有較 好的選擇性，對骨癌和骨轉移癌具有靶向作用，顯示出良好的臨床應用前景。
【具體實施方式】
[0041 ] (1)本發明的Pt (IV)抗癌化合物PPt 1的合成方法
[0042] 稱取8 · 40g( 28mmol)順鉑，加入250ml的水，攪拌，加熱至60°C，逐滴加入30wt % H2〇2420ml，在60°C下繼續攪拌反應4小時，冷卻至室溫，析出淺黃色的產物，過濾，冰水洗滌， 烘干，在水中重結晶，得到淺亮黃色晶體狀的ci s，trans，ci s- [Pt (IV) (NH3) 2(OH) 2C12 ] 5.8g，產率約62 %。
[0043] 準確稱取2.0618(6.17111111〇1)(^8，杜&118，(^8-[?七（1￥)(順3)2(0102(：12]，加入85% 的磷酸溶液〇 . 678克（5.88mmol，相當于化學計量的95 % )，攪拌混合后，在60°C下再加入 50ml水攪拌反應20小時并減壓濃縮至近干后，加入100ml的水攪拌溶解，冷卻至室溫，過濾 出去未反應的cis，trans，ci S-[Pt(IV)(NH3)2(OH)2Cl2]，濾液冷凍干燥，得到淺黃色的晶狀 粉末cis，trans，cis-[Pt(IV)(NH 3)2(OH)(H2P04)Cl2]2·36克，產率93%。樣品送結構分析，
[0044] 結構參數：
[0045] 1)元素分析測定值:N 6.71%，H 2.19%，Pt 47.0%
[0046] 計算值:N 6.76%，H 2.17%，Pt 47.2%
[0047] 2)紅外光譜IR(KBr，cm-〇 :3443(s，v〇-η)，3265,3176(s，vn-η)，1632，1564[m，Sa (NH3) ], 1321 (m, vp=〇), 1040,1009(m, vp-o),558,537,521 (w, vpt-N, vpt-o)
[0048] 3)核磁共振譜3中匪1?(〇2〇4口111):52.91(!12?〇4一）
[0049] 以上測定數據符合結構式3所示的PPtl的組成和結構式。
[0050] (2)本發明的Pt (IV)抗癌化合物PPt-2的合成方法
[00511稱取6.0g(15mm0l)奧沙利鉑于600mL蒸餾水中，稍加熱至完成溶解為止，緩慢滴加 入30wt %H20221.5ml，攪拌反應5小時后，析出白色沉淀，過濾、冰水洗滌、在60°C下烘干，最 后在沸水中重結晶提純，得到白色晶狀的(^8，廿 &如，(^8-[?七（1￥)(11?，21?-環已二胺）（0!02 (C204)]5.73g，產率 88%。
[0052] 準確稱取 2.4068(5.58111111〇1)的(^8，杜&118，(^8-[?七（1￥)(11?，21?-環已二胺）（0!1)2 (C 204)]，加入85%磷酸溶液0.637g(5.53mmol，相當于化學計量的99% )，攪拌混合后，在60 °〇下再加入30ml水攪拌反應20小時并減壓濃縮至近干后，加入50ml的水攪拌溶解，冷卻至 室溫，過濾出去不溶物，濾液冷凍干燥，得到白色的晶狀粉末c i s，trans，cis-[Pt(IV)(lR， 2R-環已二胺)2(OH) (H2P04) (C204) ]2.75克，產率97%。樣品送結構分析.
[0053] 結構參數：
[0054] 1)元素分析測定值:C 18.5%，N 5.44%，H 3.36%，Pt 38.0%
[0055] 計算值：C 18.8%，N 5.48%，H 3.32%，Pt 38.2%
[0056] 2)紅外光譜IR(KBr，cm-4 :3434(s，v〇-h)，3201，3092(m，VN-h)，2940,2865(w，vc-h) 1721(vs,Vas(coo-)), 1372(s,va(co〇-)), 1021,981 (m,vp-〇) ,573,509(w,vpt-N,vpt-o)
[0057] 3)核磁共振譜31P NMR(D2〇，ppm):S2.92(H2P〇4-)
[0058] 13C NMR(D20，ppm) :δ165(Ο)0-)，61(C-1，C-2)，30(C-3，C-6)，23(C-4，C-5)
[0059] 以上測定數據符合結構式3所示的PPt-2的組成和結構式。
[0060]
[00611 (3)本發明的Pt (IV)抗癌化合物的抗癌活性
[0062] 以 PPt-Ι 為例
[0063] 用不含血清的培養液將受試的化合物和對照藥品順鉑、卡鉑配成所需濃度，應用 SRB法(磺酰羅丹明B蛋白染色法)檢測各個化合物對人肝癌細胞株SMMC-7721、人非小細胞 肺癌細胞株A549、人卵巢癌細胞株SK-0V-3、人結腸癌細胞株SW480的增殖生長的抑制作用。 [0064] SRB法:接種對數生長期細胞于96孔培養板，加入不同濃度的藥物，每個濃度設3個 復孔，同時設相應濃度的溶媒對照。癌細胞在37°C、5% C02條件下培養72小時。細胞用SRB室 溫中染色，最后加入Tris溶液溶解，酶標儀(BioTek)51 Onm波長下測定0D值，以下列公式計 算細胞生長抑制率，根據各濃度抑制率，根據非線性回歸方法計算半數抑制濃度IC5Q。抑制 率=(0D 修糧 l-〇D 值j激jl) /0D 值*]鯫 X 1 〇〇 %
[0065] 表1.本發明的Pt(IV)化合物對癌細胞牛長的半數抑制濃度IC5〇(t = 72h，n = 3)
[0066]
[0067] 如表1結果所示，PPtl體外對人肝癌細胞株SMMC-7721、人非小細胞肺癌細胞株 A549、人卵巢癌細胞株SK-0V-3、人結腸癌細胞株SW480的生長均有明顯的抑制作用，抗癌活 性明顯大于水溶性Pt(II)抗癌藥物-卡鉑，而且整體抗癌活性與順鉑相當，而目前體外抗癌 活性能與順鉑媲美的Pt(IV)化合物未見報道，說明磷酸的軸向配位可以提高Pt(IV)化合物 抗癌作用。因此，PPtl作為順鉑的前藥、具有水溶性高、穩定、抗癌活性顯著的優點，顯示出 良好的臨床應用前景。
【主權項】
1. 以磷酸二氫根為軸向配體的鉑（IV)化合物，其特征在于:結構如下的Pt(IV)化合物， 其中，2A為氨/胺配體，包括2NH 3、IR，2R-環已二胺、1，2-雙(氨甲基）環丁烷、NH3/環戊胺或 NH3/環己胺;2X為目前已上市鉑（II)類抗癌藥物的離去基團，包括2C1'草酸根、I，1-環丁烷 二羧酸根或丙二羧酸根，該化合物還可以含有1個或2個結晶水，2. 如權利要求1所述的Pt (IV)化合物，其特征在于:包含如下結構的兩種化合物：3. 權利要求1和2的所述的Pt(IV)化合物在制備抗惡性腫瘤藥物中的應用。4. 權利要求1和2的所述的Pt (I V)化合物在制備抗肺癌、肝癌、胃癌、卵巢癌、乳腺癌或 骨轉移癌藥物中的應用。
【專利摘要】本發明涉及一類以磷酸二氫根為軸向配體的鉑(IV)抗癌化合物，化學結構如下。其中，載體基團2A為氨/胺配體，包括2NH3、1R,2R-環已二胺、1,2-雙(氨甲基)環丁烷、NH3/環戊胺、NH3/環己胺；離去基團2X為目前已上市鉑(II)類抗癌藥物的離去基團，包括2Cl-、草酸根、1,1-環丁烷二羧酸根、丙二羧酸根。磷酸的鍵合不但有助于化合物向癌細胞核運轉、提高對癌細胞的選擇性，而且還能介導化合物靶向骨癌，顯示出很強的抗癌作用。同時，該化合物水溶性好、穩定，非常適應作為抗癌藥物的用途,其結構式如下。
【IPC分類】A61P35/00, A61P35/04, C07F15/00
【公開號】CN105481902
【申請號】CN201510881017
【發明人】劉偉平, 樓麗廣, 侯樹謙, 高安麗, 謝成英, 全海天, 姜婧
【申請人】昆明貴金屬研究所, 中國科學院上海藥物研究所
【公開日】2016年4月13日
【申請日】2015年12月3日