of the root stem cell niche. Plant Cell22, 3692-3709. "中公開過，公眾可從中國科學院植物研究所獲得。
[0046]帶有PLTlprQ:CFP、PLT2prQ:CFP、PLTlprQ:PLTl:YFP、PLT2prQ:PLT2:YFP標簽的轉基 因擬南芥均在文獻"5^〇11161:，11，&11(13(3116代8，13.(2009).]\161]^)6^〇;1^1:116 60陽11丨81:〇116 acetyltransferase complex regulate PLETHORA-mediated root stem cell niche maintenance and transit amplifying cell proliferation in Arabidopsis. Plant Cell 21，1070-1079. "中公開過，公眾可從中國科學院植物研究所獲得。
[0047] 帶有生長素標記DR5rev:GFP的轉基因擬南芥在文獻"Benkova, E.，Michniew icz,Μ., Sauer,Μ., Teichmann,Τ., Seifertova, D. , Jurgens, G. , and Friml, J. (2003). Local, efflux-dependent auxin gradients as a common module for plant organ formation. Cell 115, 591-602. "中公開過，公眾可從中國科學院植物研究所獲得。
[0048]帶有PINlpro :PIN1 :GFP的轉基因擬南芥在文獻"Benkova, E.，Michniewic ζ,Μ., Sauer,Μ., Teichmann,Τ., Seifertova, D. , Jurgens, G. , and Friml, J. (2003). Local, efflux-dependent auxin gradients as a common module for plant organ formation. Cell 115, 591-602. "中公開過，公眾可從中國科學院植物研究所獲得。
[0049]帶有PIN2pro: PIN2: GFP、PIN3pro: PIN3: GFP、PIN7pro: PIN7: GFP的轉基因擬南芥 均在文獻"Blilou, I.，Xu, J.，Wildwater, M.，Willemsen, V.，Paponov, I.，Friml, J.，Heidst ra, R. , Aida, M. , Palme,K., and Scheres, B. (2005). The PIN auxin efflux facilitator network controls growth and patterning in Arabidopsis roots. Nature433, 39-44.，' 中公開過，公眾可從中國科學院植物研究所獲得。
[0050]帶有PIMpro:PIN4:GFP的轉基因擬南芥在文獻"Friml, J.，Benkova, E.，B1 i 1〇 u, I. , ffisniewska, J. , Hamann, T. , Ljung,K., Woody, S. , Sandberg, G. , Scheres, B. , Jurgen s, G. , and Palme,K.(2002). AtPIN4mediates sink-driven auxin gradients and root patterning in Arabidopsis. Celll08, 661-673. "中公開過，公眾可從中國科學院植物研 究所獲得。
[0051] 實施例1、擬南介中SSR基因組序列的犾得
[0052] -、引物的設計和合成
[0053]正向引物：5, -CGCCTGCAGACGGTTGCTGGTGGTACAC-3' (SEQ ID No. 1)
[0054] (下劃線所示序列為PstI酶切識別位點）
[0055]反向引物：5, -GCCGGTACCGCTTGCATGATTGGTCTCATCGGTAC-3' (SEQ ID No. 2)
[0056] (下劃線所示序列為ΚρηΙ酶切識別位點）
[0057] 二、提取擬南芥Col-Ο生態型（Arabidopsis thaliana L.)的基因組DNA，以其為 模板，以SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2所示的DNA分子為引物，進行PCR擴增，得到PCR擴 增產物（如SEQ ID No. 3所示），SSR基因組序列如SEQ ID No. 3中自5'末端起第10位至 第4378位核苷酸所示。
[0058] 三、用PstI和ΚρηΙ雙酶切SEQ ID No. 3所示的DNA分子，得到基因片段；PstI和 ΚρηΙ雙酶切pCAMBIA1300,得到載體大片段；將基因片段與載體大片段連接，得到重組質 粒，將其命名為pCAMBIA1300-FLssrl，將pCAMBIA1300-FLssrl送測序，結果正確。
[0059] 實施例2、SSR基因的cDNA基因克隆
[0060] 一、引物的設計和合成
[0061]正向引物：5'-CACCATGATTCGCG CAGCTGCCA-3'（SEQ ID No. 4)
[0062]反向引物：5'-TTA GAG TAC ACG AGT GGT GCG AGC-3'（SEQ ID No. 5)
[0063] 二、提取擬南芥Col-Ο生態型（ArabidopsisthalianaL.)的RNA，通過反轉錄得 到cDNA，以cDNA為模板，以SEQIDNo. 4和SEQIDNo. 5所示的DNA分子為引物，進行PCR 擴增，得到PCR擴增產物（如SEQIDNo. 6所示），SSR基因的cDNA序列如SEQIDNo. 6中 自5'末端起第5位至第1267位核苷酸所示，SSR蛋白序列如SEQIDNo. 7所示。
[0064]三、用Gateway克隆入門試劑盒（pENTR? /TEV/D-Τ0Ρ0?CloningKit)和 Gateway克隆表達試劑盒（Gateway*1LRClonase?IIEnzymemix)將SEQIDNo. 6 所 示的DNA分子與載體pMDC32大片段連接，得到重組質粒，將其命名為pMDC32-ssr1，將 pMDC32-ssrl送測序，結果正確。
[0065] 實施例3、SSR基因啟動子序列的獲得 [0066] 一、引物的設計和合成
[0067]if向引物：5' -GCCAAGCTTACGGTTGCTGGTGGTACAC-3'(SEQIDNo. 8)
[0068](下劃線所示序列為Hindlll酶切識別位點）
[0069]反向引物：5, -CGCCTGCAGAATCGCTCAATATCTTCTTTTTTCTTGTCTTGCTC-3'(SEQID No. 9)
[0070](下劃線所示序列為PstI酶切識別位點）
[0071] 二、提取擬南芥Col-Ο生態型（ArabidopsisthalianaL.)的基因組DNA，以其為 模板，以SEQIDNo. 8和SEQIDNo. 9所示的DNA分子為引物，進行PCR擴增，得到PCR擴 增產物（如SEQIDNo. 10所示），SSR基因的啟動子序列如SEQIDNo. 10中自5'末端起 第10位至第1857位核苷酸所示。
[0072] 三、用Hindlll和PstI雙酶切PCR擴增產物，得到基因片段；Hindlll和PstI雙 酶切PCAMBIA1391，得到載體大片段；將基因片段與載體大片段連接，得到重組質粒，將其 命名為pCAMBIA1391-p，將pCAMBIA1391-p送測序，結果正確。
[0073] 實施例4、SSR基因對植物根的影響
[0074] 一、SSR基因部分缺失突變體ssrl-Ι的獲得
[0075]根據文獻 "Zhang,M.，Henquet,M.，Chen,Z.，Zhang,H.，Zhang,Y.，Ren,X.，vander Krol,S. ,Gonneau,M. ,Bosch,D. ,andGong,Z. (2009).LEW3,encodingaputativealpha -1, 2-mannosyltransferase(ALG11)inN-linkedglycoprotein,playsvitalrolesin cell-wallbiosynthesisandtheabioticstressresponseinArabidopsisthaliana. PlantJ60, 983-999. "中公開的甲基磺酸乙酯誘變法構建擬南芥突變體庫，篩選得到根 短表型突變體ssrl-Ι，通過遺傳學分析，確定突變體ssrl-Ι是單基因突變的突變體，并 且突變基因與根短表型連鎖。進一步按照文獻"Zhang，M.，Henquet，M.，Chen，Z.，Zhang ,Η. ,Zhang,Y. ,Ren,X.,vanderKrol,S. ,Gonneau,M. ,Bosch,D. ,andGong,Z. (2009). LEW3,encodingaputativealpha-1,2-mannosyltransferase(ALG11)inN-linked glycoprotein,playsvitalrolesincell-wallbiosynthesisandtheabioticstress responseinArabidopsisthaliana.PlantJ60, 983-999·，'中公開的SSLP圖位克隆方法， 克隆得到突變基因，實驗證明，突變體ssrl-1中SSR基因在第一個外顯子處缺失了 36個核 苷酸，突變體ssrl-Ι中SSR基因缺失部分片段與擬南芥Col-Ο生態型中的SSR基因缺失部 分片段的PCR擴增結果如圖1所示。
[0076] 二、將ssrl-1、ssrl-2(該突變體是將T-DNA插入在SSR基因的5'端非編碼 區-13bp處，導致基因SSR無表達，僅在SSR基因處發生突變）、擬南芥Col-Ο生態型 (Arabidopsisthaliana，Columbiaecotype)(以下簡稱為Col)和擬南芥Ws-0 生態型 (Arabidopsisthaliana，Wassilewskijaecotype)(以下簡稱為Ws)在MS固體培養基上 培養，根的形態分別如圖2A中ssrl-1、圖2C中ssrl-2、圖2A中Col和圖2C中Ws所示。
[0077] 結果表明，與野生型擬南芥相比，SSR基因敲除后突變體ssrl-Ι和ssrl-2表現出 根短的表型。
[0078] 三、將實施例1得到的pCAMBIA1300-FLssrl轉化入C58農桿菌中，采用農桿菌 侵染的方法將pCAMBIA1300-FLssrl質粒分別轉入ssrl-1、ssrl-2,將轉染后的植株在含 600ug/L潮霉素的MS培養基上篩選，得到具有潮霉素抗性的陽性SSR基因回補植株，分別命 名為ssrl-l:SSR和ssrl-2 :SSR。