余物在硅膠上純化得到淺黃色油狀的甲基酰胺3a(351.0mg，76%)。TLC Rf(50%EA/ hex) = 0.13.GC-MS Rt= 12.4min，m/z = 283(M-H20). 1H NMR(O)Cl3, S):7.51(d，J = 2. 3Hz, 1H), 7. 40 (d, J = 8. 5Hz, 1H), 7. 25 (dd, J = 2. 3, 8. 5Hz, 1H), 3. 8 (bs, 1H), 3. 7 (m, 2H) ,3. 5 (s, 1H)，2. 73 (d, J = 4. 8Hz, 3H)，2. 7-2. 4 (m, 2H)，2. 1-1. 5 (m, 5H) · 13C NMR (CDCl3, δ，mu It) : 175. 7 (0)，144. 4 (0)，132. 5 (0)，131. 0 (0)，130. 4 (I)，129. I (I)，126. 8 (I)，63. 9 (2)，61 .3 (0), 50. 0 (I), 37. 9 (2), 27. 8 (2), 26. 7 (3), 22. I (2) 〇
[0196] 使用相似方法，3b也由2b制得。
[0197] 6. I. 3 (2-(3, 4-二氯苯基）-2-((甲氨基）甲基）環戊基）甲醇和（2-(3, 4-二氯 苯基）-2-((甲氨基）甲基）環己基）甲醇
[0199] 4a :向酰胺 3a(110mg，0. 4412mmol)的 THF(1. 3mL)溶液中加入硼烷-THF(1. 3mL) 。兩分鐘后，該溶液在微波中加熱30分鐘（最大溫度=IO(TC)。冷卻后，用幾滴甲醇并隨 后用3N HCl (4mL)小心淬滅該反應，攪拌30分鐘。該溶液用50% MTBE/己烷洗滌，冷卻， 用KOH堿化，并且用MTBE萃取。蒸發后，該化合物通過氨丙基預裝柱過濾得到淺黃色油狀 的胺 4a(315.9mg，收率 95%)。LCMS(Hmin)Rt= 5. 98min，m/z = 288(M+l). 1H NMR(O)Cl3 ,δ ) ： 7. 6 (m, 1H), 7. 4 (m, 2H), 6. 8 (bs, 1H), 3. 7 (m, 2H), 2. 8 (m, 3H), 2. 32 (s, 3H), 2. 1-1. 2 (m, 6H). 13C NMR(O)Cl3, δ ,mult) :147. 3(0)，132. 5(0)，130. 2(1)，130. 1(1)，129. 3(0)，126. 9( I)，63. 7 (2)，58. 3 (2)，52. 9 (0)，47. I (I)，41. 6 (2)，36. 0 (3)，28. 6 (2)，22. I (2)。使用相似的 方法，4b由3b制成。
[0200] 6. 1.4((lR，2S)-2-(3,4-二氯苯基）-2-((甲氨基）甲基）環戊基）甲 醇（5a)，（(lR，2S)-2-(3,4-二氯苯基）-2-((甲氨基）甲基）環己基）甲醇 (6a)，（(lS，2R)-2-(3,4-二氯苯基）-2-((甲氨基）甲基）環戊基）甲醇（5b)和 ((1S，2R)-2-(3, 4-二氯苯基）-2-((甲氨基）甲基）環己基）甲醇
[0202] 化合物 4a 通過手性 HPLC (AD-2:3:95:0. 1 的 MeOH/EtOH/Hex/DEA)分離以提供產 物5a和6a。使用相似的方法，化合物4b分離成化合物5b和6b。
[0203] 6. I. 5 (3aS，6aR) -3a_ (3, 4-二氯苯基）-2-甲基八氫環戊烷并[c]吡咯和 (3aR, 6aS)-3a_(3, 4_二氯苯基）_2_甲基八氫環戊燒并[c]吡略
[0205] 將氨基醇5a(47. 3mg，0. 164mmol)溶于ImL DCM中，并且在二異丙基乙 基胺（86 μ L，3eq)存在下與甲磺酰氯（19 μ L，I. 5eq)反應兩小時。該混合物用 碳酸鉀水溶液淬滅并且用MTBE萃取。蒸發后的粗殘余物通過氨丙基柱提供澄清 油狀的（3aS，6aR) -3a- (3, 4-二氯苯基）-2-甲基八氫環戊烷并[c]吡咯（43. 5mg 2. 3Hz, 1H), 7. 34 (d, J = 8. 5Hz, 1H), 7. 17 (dd, J = 2. 3, 8. 4Hz, 1H), 2. 87 (t, J = 8. 4Hz, I H)，2. 7 (m, 1H)，2. 6 (m, 2H)，2. 3 (m, 1H)，2. 32 (s, 3H)，2. 0-1. 5 (m, 6H) · 13C NMR (CDCl3, δ，mu It) : 150. 4 (0) ,131.9 (0), 129. 9 (I), 128. 2 (I), 125. 7 (I), 70. 4 (2), 64. 6 (2), 58. 3 (0), 50. 2 (I), 42. 0 (3), 41. 0 (2), 33. 6 (2), 25. 8 (2) 〇
[0206] (3aR，6aS)-3a_ (3, 4-二氯苯基）-2-甲基八氫環戊烷并[c]吡咯也采用相似的方 法，并且使用氨基醇6a作為起始化合物。
[0207] 6. 1.6(3aS，6aR)-3a_(3,4-二氯苯基）八氫環戊烷并[c]吡咯和 (3&尺，6 &3)-3&-(3,4-二氯苯基）八氫環戊烷并[0]吡咯
[0209] 將（3&3,6&幻-3&-(3,4-二氯苯基）-2-甲基八氫環戊烷并[(：]吡咯（2〇1^)溶 于1-氯乙基氯甲酸酯（250 μ L)中并加熱到80°C 15小時。該反應冷卻并蒸發。殘余物 溶于甲醇并且在80°C另外加熱3小時。蒸發后，殘余物用DCM稀釋，用K2OV冼滌并且 過濾（氨丙基柱）。（3aS，6aR)-3a_(3,4-二氯苯基）八氫環戊燒并[c]吡略然后通過 色譜法（手性 AD;95:5:0.1 IPA/Hex/DEA)與未反應原料分離。LCMS Rt=7.14min m/ z = 256 (M+1) · 1H NMR (CDCl3, δ ) : 7. 3 (m，2H)，7. 12 (dd，J = 2. 3, 8. 4Hz，1H)，3. 3 (m，1H)，3 ? 00(s，2H)，2. 7(m，2H)，2. 0-1. 9(m，3H)，I. 8-1. 5(m，2H)，I. 5(m，1H). 13C Mffi(O)Cl3, δ，mu It) : 150. 2 (0), 132. I (0), 130. 0 (I), 129. 4 (0), 128. I (I), 125. 7 (I), 62. 2 (2), 60. 0 (0), 56. I (2), 50. 7 (I), 40. 5 (2), 33. 7 (2), 25. 8 (2) 〇
[0210] (3aR，6aS)-3a_(3, 4-二氯苯基）八氫環戊烷并[c]吡咯利用相似的方法，使用 (3aR，6aS)-3a_ (3, 4-二氯苯基）-2_甲基八氫環戊烷并[c]吡咯作為起始化合物。
[0211] 6. I. 7 (3aS, 7aR)-3a~(3, 4~ -氣苯基）_2-甲基八氛-IH-異 Π 引噪和 (3aR, 7aS) -3a- (3, 4- -氣苯基）_2-甲基八氛異吲噪
[
[0213] 氨基醇5b (40mg，0. 1323mmol)溶于DCM(ImL)中并且在環境溫度攪拌。向該溶液 中加入DIPEA(70yL，3eq)和MsCl(15yL，1.5eq)。2小時后，反應用碳酸鉀淬滅并且用 MTBE萃取。分離有機相并蒸發。殘余物溶于DCM中，過濾（氨丙基柱）和蒸發得到澄清 油狀的（3&3,7 &幻-3&-(3,4-二氯苯基）-2-甲基八氫-1!1-異吲哚（28.31^，75%)。^^ Rt= 8. 20min，m/z = 284(M+1). 1H NMR(O)Cl3, δ ):7.43 (d，J = 2.3Hz，1H)，7.37 (d，J = 8. 5Hz, 1H), 7. 19 (dd, J = 2. 3, 8. 5Hz, 1H), 2. 9 (m, 2H), 2. 78 (t, J = 9. 2Hz, 1H), 2. 7-2. 6 (m, 2 H), 2. 42 (s, 3H), 2. 〇-l. 8(m, 2H), I. 8-1. 6 (m, 2H), I. 6-1. 4 (m, 3H), I. 2-1. 0(m, 1H). 13C NMR ( CDCl3, δ，mult) : 146. 9 (0)，132. 2 (0)，130.1 (I)，129. 8 (0)，128. 8 (I)，126. I (I)，69. 8 (2)， 58. 8 (2), 47. 7 (0), 43. 3 (3), 40. 5 (I), 34. 3 (2), 24. 6 (2), 21. 7 (2), 20. 9 (2) 〇
[0214] (3aR, 7aS) _3a_ (3, 4_二氣苯基）-2-甲基八氛-IH-異Π 引噪米用相似的方法制備， 并且使用氨基醇6b作為起始化合物制備。
[0215] 6. I. 8 7a-(3, 4-二氯苯基）八氫-IH-異吲哚-1-酮
[0217] 將二氯苯基內酯2b(580mg，2.049mmol)、鄰苯二酰亞胺鉀（758mg， 2eq)和DMF(4mL)的混合物在150 °C浴熱下攪拌24小時。蒸發得粗品酸。將上 面的粗原料用5M KOH(IOmL)稀釋并在110 °C浴熱24小時。乙酸乙酯萃取，隨后 蒸發得到油狀內酰胺。在硅膠上分離得純的澄清油狀7a-(3,4-二氯苯基）八 氫-IH-異吲哚-1-酮（67. 5mg，12 % )。TLC Rf (50 % EA/hex) = 0· 25. GC-MS Rt = 13.77min,m/z = 283 (M-I). LCMS Rt= 9. 09min. HPLC Rt= 10. 15min. 1H NMR(CDC13/ DMS0-D6, δ ) ： 7. 37 (d, J = 2. 3Hz, 1Η), 7. 25 (d, J = 8. 5Hz, 1Η), 7. 14 (dd, J = 2. 3, 8. 5Ηζ ,1Η), 4. 02 (s, 1Η), 3. 07 (dd, J = 5. 8, 9. 9Hz, 1Η), 2. 83 (dd, J = 3. 6, 9. 9Hz, 1Η), 2 .6 (m, 1Η), I. 9 (m, 1Η), I. 7 (m, 1Η), 1. 6-1. 2 (m, 6Η). 13C NMR (CDCl3/DMS〇-D6, δ , mu It) : 179. 3 (0), 142. 5 (0), 132. 2 (0), 130. 6 (0), 130.1 (1), 128. 8 (1), 126. 2 (1), 51. 6 (0), 44 .2 (2), 40. 3 (1), 32. 6 (2), 26. 9 (2), 22. 7 (2), 22. 6 (2) 〇 [0218] 6. I. 9 3a~ (3, 4- 一氣苯基）八氛_1Η-異吲噪
[0220] 7&-(3,4-二氯苯基）八氫-1!1-異吲哚-1-酮（6511^，0.2287臟〇1)用1'冊(21^)和 硼烷（〇. 7mL，IM THF中，3eq)稀釋，并且在微波中加熱15分鐘（最高溫度=100°C )。冷卻 后，該混合物與6N HCl -起攪拌30分鐘，并且用MTBE洗滌。水層用KOH堿化并用MTBE萃取 。蒸發有機相并過濾（氨丙基柱）得到澄清油狀的3a-(3, 4-二氯苯基）八氫-IH-異吲哚 (15. 5mg，24% )。在有機洗滌液中發現的另一部分通過硅膠過濾得到19mg(26% )副產物。 LCMS Rt= 7. 60min，m/z = 270 (M+1) · 1H NMR (CDCl3, δ ) : 7. 43 (d，J = 2. 3Hz，1H)，7. 37 (d，J =8. 4Hz, 1H), 7. 19 (dd, J = 2. 3, 8. 5Hz, 1H), 3. I (m, 2H), 2. 9 (m, 1H), 2. 6 (m, 2H), 2. 〇-l. 2 (m ,8H) · 13C NMR (CDCl3, δ , mult) : 146. 7 (0)，132. 3 (0)，130.1 (I)，129. 7 (0)，128. 9 (I)，126. 2 (I), 59. 9 (2), 49. 6 (2), 47. 9 (0), 41. 0 (I), 32. 8 (2), 24. 2 (2), 22. 0 (2), 21. 4 (2) 〇
[0221] 外消旋的3a-(3,4-二氯苯基）八氫-IH-異吲哚通過手性HPLC(手性AD-95:5:0.1 的Hex/IPA/DEA)分離以提供異構體（3aS，7aR)-3a-(3,4-二氯苯基）八氫-IH-異吲哚和 (3aR, 7aS) -3a- (3, 4- 一氣苯基）八氛_1H-異吲噪：
[0223] 6. 2單胺再攝取試驗
[0224] 本發明公開的化合物用下文所述重組人轉運蛋白測試它們對5-羥色胺（5-HT)、 去甲腎上腺素（NE)和多巴胺（DA)的攝取功能的抑制作用。化合物一式兩份以10 μΜ開始 測試。顯示攝取抑制率等于或者高于50%的化合物進一步一式兩份測試10個不同的濃度， 以獲得完整的抑制曲線。然后通過抑制曲線的非線性回歸分析確定IC 5。值（抑制對照活性 50 %的濃度）。
[0225] 6. 2. 1人再攝取轉運蛋白的5-羥色胺功能性攝取試驗
[0226] 采用基本上類似于 Gu H 等人，J. Biol. Chem. 1994, 269 (10) : 7124-7130 (納入本發 明作為參考）中所述方法，用ΗΕΚ-293細胞中表達的重組人5-羥色胺轉運蛋白分析人5-羥 色胺再攝取轉運蛋白的抑制作用。在測試前將表達人5-羥色胺轉運蛋白的ΗΕΚ-293細胞 固定。被測化合物和/或載體與細胞一起在pH值7. 1或者pH值7. 4的改良HEPES緩沖液 中18至25°C下預培養20分鐘，然后加入65nM[3H]5-羥色胺另外再培養一段時間（10到 30分鐘）。洗滌具有內化[ 3H]5-羥色胺的細胞，并且采用液體閃爍計數器計數帶進細胞的 氚的量以確定[3H]5-羥色胺的攝取量。在包含10 μΜ氟西汀的對照反應中測定氚的非特 異性結合，并且從測定計數中減去，來校正氚的非特異性結合。相對于非抑制性對照反應， [ 3Η]5-羥色胺的攝取減少50%或更多表明顯著的抑制活性。化合物在10、1、0. 1、0. 01和 0· 001 μ M 篩選。
[0227] 6. 2. 2人再攝取轉運蛋白的去甲腎上腺素功能性攝取試驗
[0228] 采用基本上類似于Galli A等人，J. Exp. Biol. 198:2197-2212(納入本發明作為 參考）中所述方法，用HEK293或者MDCK細胞中表達的重組人去甲腎上腺素轉運蛋白分析 人去甲腎上腺素再攝取轉運蛋白的抑制作用。在測試前將表達人去甲腎上腺素轉運蛋白 的HEK293或者MDCK細胞固定。被測化合物和/或載體與細胞一起在pH值7. 1或者pH值 7. 4的改良HEPES緩沖液中18至25°C下預培養20分鐘，預培養后，加入25nM[3H]去甲腎 上腺素另外再培養一段時間（10到30分鐘）。在洗滌細胞以除去沒有內化的[ 3H]去甲腎 上腺素后，裂解細胞，裂解液中氚的數量采用液體閃爍計數器計數，來確定[3H]去甲腎上腺 素的攝取。氚的非特異性結合在包含10 μ M丙咪嗉（或者10 μ M尼索西汀）的對照反應中 測定，并且從測試計數中扣除以校正氚的非特異性結合。相對于對照反應[3H]去甲腎上腺 素的攝取減少50%或更多表明顯著的抑制活性。化合物在10、1、0. 1、0. 01和0. 001 μΜ進 行篩選。
[0229] 6. 2. 3人再攝取轉運蛋白的多巴胺功能性攝取試驗
[0230] 使用基本上類似于 Pristupa, Ζ. B 等人，Mol. Pharmacol. 45:125-135 (1994)(其納 入本發明作為參考）的方法，用在CHO-Kl或者HEK293細胞中表達的重組人多巴胺轉運蛋 白分析人多巴胺再攝取轉運蛋白的抑制作用。在試驗前將表達重組人多巴胺轉運蛋白的 CHO-Kl或者HEK293細胞固定。待測化合物和/或載體與細胞一起在pH 7. 1或者pH 7. 4 的改良HEPES緩沖液中18至25°C下預培養20分鐘，然后加入50nM[3H]多巴胺再培養一 段時間（10到30分鐘）。洗滌細胞以除去沒有內化的[ 3H]多巴胺后，裂解細胞，裂解液中 氚的數量采用液體閃爍計數器計數，來確定[3H]多巴胺的攝取。氚的非特異性結合在包含 10 μM諾米芬辛的對照反應中測定，并且從測試計數中扣除以校正氚的非特異性結合。相對 于對照反應[3H]多巴胺的攝取減少50%或更多表明顯著的抑制活性。化合物在10、1、0. 1、 0. 01和0. 001 μ M進行篩選。
[0231] 6. 2. 4 結果
[0232] 6. 2. 4. 1 5-羥色胺攝取的抑制作用
[0233] 使用上文第6. 2. 1節所述方法測試本發明提供的某些化合物對5-羥色胺再攝取 的抑制作用。測試的化合物包括：（3&5,6 &幻-3&-(3,4-二氯苯基）八氫環戊烷并[(3]吡 咯；（3aR，6aS)-3a_ (3,