enBankAAAession Number為NC_010454. 3的自5'末端起第13739位，因此將該位點命名為g. 59380629A〉G。
[0047] 在國際豬基因組10. 2版本參考序列12號染色體上第59380629個核巧酸位點的 堿基（或步驟（Ξ)得到的PCR擴增產(chǎn)物自5'末端起第118位的堿基）均為A的個體，該 個體為純合型個體，將該個體的基因型命名為純合AA基因型，國際豬基因組10. 2版本參考 序列12號染色體上第59380629個核巧酸位點的堿基（或步驟（Ξ)得到的PCR擴增產(chǎn)物 自5'末端起第118位的堿基）均為G的個體，該個體為純合型個體，將該個體的基因型命 名為純合GG基因型，國際豬基因組10. 2版本參考序列12號染色體上第59380629個核巧 酸位點的堿基（或步驟（Ξ)得到的PCR擴增產(chǎn)物自5'末端起第118位的堿基）為A和 G的個體，該個體為雜合型個體，將該個體的基因型命名為雜合AG基因型。 W48] 二、豬MAP2K4基因g. 59380629A〉G多態(tài)性位點與豬宰后24小時背最長肌抑值性 狀的相關(guān)性分析
[0049] 為確定g. 59380629A〉G多態(tài)性位點與豬宰后24小時背最長肌抑值性狀是否相 關(guān)，W591頭大民雜交豬為實驗材料，進行如下試驗：
[0050] (一）提取每頭豬的耳緣組織的基因組DNA，分別按照步驟一中（Ξ)的方法進行 PCR擴增，得到各PCR擴增產(chǎn)物，按照步驟一中（四）的方法確定每頭豬的基因型是純合AA 基因型、雜合AG基因型還是純合GG基因型。
[0051] (二）測定并記錄每頭豬的抑值大小。 陽0巧 （Ξ)根據(jù)豬的基因型W及豬抑值大小得到如下結(jié)論：純合GG基因型的豬宰后 24小時背最長肌抑值大于雜合AG基因型的豬個體，雜合AG基因型的豬宰后24小時背最 長肌抑值大于純合AA基因型的豬個體。
[0053](四）對g. 59380629A〉G位點與豬宰后24小時背最長肌pH值性狀W最小二乘法 開展關(guān)聯(lián)分析。所用模型如下：Y=S+P+B+G+e。其中Y為性狀測定值，S為性別效應(yīng)，P為 胎次效應(yīng)，B為屠宰批次效應(yīng)，G為基因型效應(yīng)，e為殘差效應(yīng)。
[0054] 結(jié)果如表1所示：從表1可W看出，在豬宰后24小時背最長肌抑值性狀中，純合 GG基因型的豬宰后24小時背最長肌抑值大于雜合AG基因型的豬個體，雜合AG基因型的 豬宰后24小時背最長肌抑值大于純合AA基因型的豬個體，純合GG基因型的豬宰后24小 時背最長肌抑值比純合AA基因型的豬個體高約0. 29 (P<0. 05)。說明本發(fā)明用MAP2K4基 因國際豬基因組10. 2版本參考序列12號染色體上第59380629位核巧酸（序列表中序列 3所示的MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核酸）的多態(tài)性鑒定豬宰后24小時背最長肌抑 值的方法與豬宰后24小時背最長肌抑值的實際測定結(jié)果一致。 陽化5] 在實際的豬育種中，為獲得更高抑值性狀的豬，最好選擇GG基因型的豬進行育 種。
[0056] 表1、豬的基因型與豬抑值的相關(guān)性分析
[0057]
[0058] 注：同列上標(biāo)不同字母表示差異顯著（P<0. 05)
[0059] 綜合所述，可W按照如下方法鑒定或輔助鑒定豬宰后24小時背最長肌的抑值大 小： W60] 檢測待測豬的MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核巧酸是A還是G還是A和G，W 確定待測豬的基因型是AA基因型還是GG基因型還是AG基因型，根據(jù)豬個體的基因型確定 豬宰后24小時背最長肌的抑值大?。篏G基因型的豬宰后24小時背最長肌的抑值大于AG 基因型的豬個體，AG基因型的豬宰后24小時背最長肌的抑值大于AA基因型的豬個體；
[0061] GG基因型為MAP2K4基因自5'末端第118位脫氧核糖核巧酸均為G的純合體；
[0062] AG基因型為MAP2K4基因自5'末端第118位脫氧核糖核巧酸為A和G的雜合體；
[0063] AA基因型為MAP2K4基因自5'末端第118位脫氧核糖核巧酸均為A的純合體；
[0064] MAP2K4基因如序列表中序列3所示。
【主權(quán)項】
1. 一種鑒定或輔助鑒定豬宰后24小時背最長肌的pH值大小的方法，包括如下步驟： 檢測待測豬的MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核苷酸是A還是G還是A和G，以確定待測 豬的基因型是AA基因型還是GG基因型還是AG基因型，根據(jù)所述豬個體的基因型確定所述 豬宰后24小時背最長肌的pH值大?。篏G基因型的豬宰后24小時背最長肌的pH值大于AG 基因型的豬個體，AG基因型的豬宰后24小時背最長肌的pH值大于AA基因型的豬個體； 所述GG基因型為MAP2K4基因自5'末端第118位脫氧核糖核苷酸為G的純合體； 所述AG基因型為MAP2K4基因自5'末端第118位脫氧核糖核苷酸為A和G的雜合體； 所述AA基因型為MAP2K4基因自5'末端第118位脫氧核糖核苷酸為A的純合體。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述檢測待測豬的MAP2K4基因的第118 位脫氧核糖核苷酸是A還是G還是A和G為如下1)或2): 1) 直接測序； 2) 用能夠擴增含有豬MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核苷酸的引物對擴增所述待測 豬的基因組DNA，得到PCR擴增產(chǎn)物，如果PCR擴增產(chǎn)物自5'末端起第118位的堿基均為 A，則所述豬的基因型為AA基因型，如果PCR擴增產(chǎn)物自5'末端起第118位的堿基為A和 G，則所述豬的基因型為AG基因型，如果PCR擴增產(chǎn)物自5'末端起第118位的堿基均為G， 則所述豬的基因型為GG基因型。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述B)包括如下步驟：所述引物對 滿足如下條件：以所述豬個體的基因組DNA為模板進行PCR擴增的產(chǎn)物含有MAP2K4基因的 第118位氧核糖核苷酸； 所述引物對由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列表中序列2所示的單鏈DNA分子組成。4. 一種鑒定或輔助鑒定豬宰后24小時背最長肌的pH值大小的試劑，是檢測待測豬的 MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核苷酸是A還是G還是A和G的物質(zhì)。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑，其特征在于：所述物質(zhì)為由序列表中序列1所示的單 鏈DNA分子和序列表中序列2所示的單鏈DNA分子組成的引物對。6. -種鑒定或輔助鑒定豬宰后24小時背最長肌的pH值大小的試劑盒，包括權(quán)利要求 4或5所述的試劑。7. 權(quán)利要求4或5所述的試劑或權(quán)利要求6所述的試劑盒在鑒定或輔助鑒定豬宰后 24小時背最長肌的pH值大小中的應(yīng)用； 或權(quán)利要求4或5所述的試劑或權(quán)利要求6所述的試劑盒在制備鑒定或輔助鑒定豬宰 后24小時背最長肌的pH值大小的產(chǎn)品中的應(yīng)用。8. 權(quán)利要求1-3中任一所述的方法或權(quán)利要求4或5所述的試劑或權(quán)利要求6所述的 試劑盒在豬育種中的應(yīng)用。9. 權(quán)利要求1-3中任一所述的方法或權(quán)利要求4或5所述的試劑或權(quán)利要求6所述的 試劑盒在選育宰后24小時背最長肌的pH值大的種豬中的應(yīng)用。10. -種選育宰后24小時背最長肌的pH值大的豬的方法，包括選擇GG基因型的豬進 行育種； 所述GG基因型為MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核苷酸均為G的純合體。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鑒定豬宰后24小時背最長肌pH值大小的方法及其專用引物對。本發(fā)明提供的鑒定豬宰后24小時背最長肌pH值大小的方法是檢測待測豬的MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核苷酸是A還是G還是A和G，以確定待測豬的基因型是AA基因型還是GG基因型還是AG基因型。通過試驗證明：本發(fā)明的方法操作簡單、費用低、準(zhǔn)確度高，并可實現(xiàn)自動化的直接檢測對豬進行育種，不僅可對待選豬進行早期篩選，有效地緩解實際生產(chǎn)中的選取優(yōu)良種豬時間長的問題，而且降低了育種花費，能有效降低或提高實際生產(chǎn)中的豬的pH值，在豬的育種工作中將發(fā)揮巨大作用。
【IPC分類】C12Q1/68, C12N15/11
【公開號】CN105256045
【申請?zhí)枴緾N201510741101
【發(fā)明人】王立賢, 王立剛, 張龍超, 顏華, 劉欣
【申請人】中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年11月4日