一種鑒定豬宰后24小時背最長肌pH值大小的方法及其專用引物對的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種鑒定豬宰后24小時背最長肌抑值大小的方法及其專用引物對， 屬于生物技術領域。
【背景技術】
[0002] 豬肉抑值的大小不僅對豬肉的口感有重要影響，還與豬肉失水率，肉色等顯著相 關，極大地影響著豬肉的銷售。豬宰后24小時背最長肌的抑值是反映豬肉抑值的標準指 標之一，是豬肉品質育種的育種目標的重要組成部分。但是，由于抑值只能在動物長成之 后才能測定，一方面加大了育種成本，另一方面拉長了世代間隔，遺傳進展緩慢。分子生物 技術的飛速發展和豬遺傳連鎖圖譜的構建，為抑值等數量性狀開展育種更準確、進展更快 速的分子育種提供了研究基礎。且由于豬是人類研究的一種重要的模式動物，找到對豬肉 抑值有影響的基因有可能對人類的研究提供一定的借鑒意義。
【發明內容】
[0003] 本發明的一個目的是提供一種鑒定或輔助鑒定豬宰后24小時背最長肌的抑值大 小的方法。
[0004] 本發明提供的鑒定或輔助鑒定豬宰后24小時背最長肌的抑值大小的方法包括如 下步驟：檢測待測豬的MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核巧酸是A還是G還是A和G，W 確定待測豬的基因型是AA基因型還是GG基因型還是AG基因型，根據所述豬個體的基因型 確定所述豬宰后24小時背最長肌的抑值大小：GG基因型的豬宰后24小時背最長肌的抑 值大于AG基因型的豬個體，AG基因型的豬宰后24小時背最長肌的抑值大于AA基因型的 豬個體； 陽0化]所述GG基因型為MAP2K4基因自5'末端第118位脫氧核糖核巧酸為G的純合體；[0006]所述AG基因型為MAP2K4基因自5'末端第118位脫氧核糖核巧酸為A和G的雜 合體； 陽007] 所述AA基因型為MAP2K4基因自5'末端第118位脫氧核糖核巧酸為A的純合體； 陽00引所述MAP2K4基因如序列表中序列3所示。
[0009] 上述方法中，所述檢測待測豬的MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核巧酸是A還是 G還是A和G為如下1)或2):
[0010] 1)直接測序； W11]。用能夠擴增含有豬MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核巧酸的引物對擴增所述 待測豬的基因組DNA，得到PCR擴增產物，如果PCR擴增產物自5'末端起第118位的堿基均 為A，則所述豬的基因型為AA基因型，如果PCR擴增產物自5'末端起第118位的堿基為A 和G，則所述豬的基因型為AG基因型，如果PCR擴增產物自5'末端起第118位的堿基均為 G，則所述豬的基因型為GG基因型。
[0012] 上述方法中，所述B)包括如下步驟：所述引物對滿足如下條件：W所述豬個體的 基因組DNA為模板進行PCR擴增的產物含有MAP2K4基因的第118位氧核糖核巧酸； 陽01引所述引物對由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列表中序列2所示的單鏈DNA分子組成。
[0014] 本發明的另一個目的是提供一種鑒定或輔助鑒定豬宰后24小時背最長肌的抑值 大小的試劑。
[0015] 本發明提供的鑒定或輔助鑒定豬宰后24小時背最長肌的抑值大小的試劑是檢測 待測豬的MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核巧酸是A還是G還是A和G的物質；
[0016] 所述MAP2K4基因的核巧酸序列如序列表中序列3所示。
[0017] 上述試劑中，所述物質為由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列表中序列 2所示的單鏈DNA分子組成的引物對。
[0018] 本發明還有一個目的是提供一種鑒定或輔助鑒定豬宰后24小時背最長肌的抑值 大小的試劑盒。
[0019] 本發明提供的鑒定或輔助鑒定豬宰后24小時背最長肌的抑值大小的試劑盒包括 上述試劑。
[0020] 上述試劑或上述試劑盒在鑒定或輔助鑒定豬宰后24小時背最長肌的抑值大小中 的應用也屬于本發明的保護范圍。
[0021] 上述試劑或上述試劑盒在制備鑒定或輔助鑒定豬宰后24小時背最長肌的抑值大 小的產品中的應用也屬于本發明的保護范圍。
[0022] 上述方法或上述試劑或上述試劑盒在豬育種中的應用也屬于本發明的保護范圍。
[0023] 上述方法或上述試劑或上述試劑盒在選育宰后24小時背最長肌的抑值大的種豬 中的應用也屬于本發明的保護范圍。
[0024] 本發明的最后一個目的是提供一種選育宰后24小時背最長肌的抑值大的豬的方 法。
[0025] 本發明提供的選育宰后24小時背最長肌的抑值大的豬的方法包括選擇GG基因 型的豬進行育種；
[00%] 所述GG基因型為MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核巧酸均為G的純合體；
[0027] 所述MAP2K4基因的核巧酸序列如序列表中序列3所示。
[0028] 上述方法或上述試劑或上述試劑盒或上述應用中，所述MAP2K4基因的第118位脫 氧核糖核巧酸也為國際豬基因組10. 2版本參考序列12號染色體上第59380629位脫氧核 糖核巧酸。
[0029] 本發明提供了一種鑒定豬宰后24小時背最長肌抑值大小的方法。該方法是檢測 待測豬的MAP2K4基因的第118位脫氧核糖核巧酸是A還是G還是A和G，W確定待測豬的 基因型是AA基因型還是GG基因型還是AG基因型。只需進行PCR反應，測序即可判別個體 的基因型。通過試驗證明：本發明的方法操作簡單、費用低、準確度高，并可實現自動化的直 接檢測對豬進行育種，不僅可對待選豬進行早期篩選，有效地緩解實際生產中的選取優良 種豬時間長的問題，而且降低了育種花費，能有效降低或提高實際生產中的豬的抑值，在 豬的育種工作中將發揮巨大作用。
【附圖說明】
[0030] 圖1為AA基因型個體和GG基因型個體MAP2K4基因g.59380629A〉G多態性位點 附近序列的測序結果。
【具體實施方式】
[0031] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0032] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0033] 下述實施例中的大民雜交豬（Susscro化)，由大白豬和民豬雜交獲得，該豬購自 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所昌平畜禽實驗基地。
[0034] 實施例1、豬宰后24小時背最長肌抑值大小的鑒定方法及應用
[0035] 一、豬MAP2K4基因g.59380629A〉G多態性位點的確定
[0036] (一）W兩頭大民雜交豬為實驗材料，分別提取其耳緣組織的基因組DNA。
[0037](二）引物的設計與合成
[0038] 根據豬MAP2K4基因內的國際豬基因組10. 2版本參考序列信息，設計并合成如下 引物：
[0039]U(上游引物）：5'-GCTGCTTTGCTGTTTGACTA-3'（沈QIDNo. 1);
[0040] D(下游引物）：5,-CAGTTTCTAAGCCCAACATTCT-3'（沈QIDNo. 2)。 柳41](S)PCR擴增
[0042] 分別W步驟（一）得到的大民雜交豬的基因組DM為模板，WU和D為引物進行 PCR擴增，得到PCR擴增產物，分別命名為產物1和產物2。
[0043]PCR擴增體系：基因組DNA200ng，10XPCR擴增緩沖液5μ1，dNTPs終濃度為 lOmM，上、下游引物各50ng，TaqDNA聚合酶0. 75U，Mg2么5mmol/L，用d地2〇補足體系至 50μ1。
[0044]PCR擴增程序：95°C變性5min;然后95°C變性20s，59°C退火30s，72°C延伸30s，共 35個循環；最后72°C延伸lOmin。
[0045](四）測序及序列分析
[0046] 將產物1和產物2進行測序，得到產物1的序列（如SEQIDNo. 3所示）和產物 2的序列（如SEQIDNo. 4所示）。SEQIDNo. 3和SEQIDNo. 4只存在一個堿基的差異， 均為SEQIDNo. 3和SEQIDNo. 4中自5'末端起第118位，該處的堿基為A或G，該位點 附近的序列如圖1所示（其中箭頭所示為該多態性位點），該位點位于G