產品保質期長。
[0037] 本發明直接投放于觀賞魚養殖水體進行水質改良，有效解決換水帶來的環境污染 問題；本發明實現了水質穩定，延長換水周期甚至可不換水；同時，產品保質周期長達1年， 便于日常采購和使用。
【具體實施方式】
[0038] 實施例1
[0039]1、凝結芽孢桿菌的篩選
[0040] 從江蘇無錫馬山某奶牛養殖場附近的土壤樣品稱取2g，加入98ml無菌生理鹽水， 80°C熱處理lOmin后，在37°C搖床上120rpm條件下振蕩20min，吸取上清液lml加入LB培 養基中稀釋涂布進行菌株分離。通過對菌株進行形態學觀察、生理生化實驗、16SrDNA分析 等手段有效而準確的確定菌種的屬種。
[0041] 最終得到編號為ZS-007的菌種，鑒定為凝結芽孢桿菌（Bacilluscoagulans)。
[0042] ZS-007于2015年5月3日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCM 2015273〇
[0043] 2、30m3發酵罐制備
[0044] 菌種活化：將得到的菌種接種至營養瓊脂斜面培養基上，30°C下培養24hr后劃線 轉接于營養瓊脂前子瓶斜面，30°C下培養24hr。營養瓊脂斜面培養基及營養瓊脂前子瓶的 組成均為：蛋白胨l〇g/L，牛肉膏3g/L，氯化鈉5g/L，瓊脂15-20g/L，pH7. 2-7. 4。
[0045] 搖瓶培養：將活化好的菌種接種至搖瓶中，振蕩培養20hr。搖瓶培養基配方：蛋白 胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化鈉5g/L，pH7. 2-7. 4,搖瓶裝液量50mL/500mL三角瓶。培養條 件：搖瓶轉速200r/min，溫度30°C。
[0046] 種子罐擴培：收集20瓶500mL搖瓶種子液用于種子罐接種。種子罐培養基組成： 蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化鈉5g/L，pH7. 2-7. 4。種子罐體積500L，裝液量75%。培 養條件：攪拌轉速200r/min，通氣量0. 8vvm，溫度30°C，培養時間20hr。
[0047] 發酵罐發酵：30m3發酵罐裝液量70%。培養基組成：葡萄糖25g/L，蛋白胨15g/L， 酵母粉l〇g/L，磷酸二氫鉀lg/L，硫酸鎂0. 5g/L，初始pH7. 0。將培養好的種子接入發酵罐 進行發酵。培養條件：攪拌轉速l〇〇r/min，通氣量0. 6vvm，溫度35°C，培養時間40-45hr。
[0048] 發酵液中，活菌數 1. 99X101Qcfu/g，芽孢數 1. 92X101Qcfu/g，芽孢率 96. 5%。
[0049] 3、干菌粉制備
[0050] 離心收集濕菌泥，采用噴霧干燥工藝得到干菌粉。操作條件為：進風溫度210°C， 出風溫度l〇〇°C。干菌粉中活菌數8. 32X10ncfu/g。
[0051] 實施例2
[0052] 本復合芽孢桿菌微生物凈水劑中各微生物含量如表1 :
[0053] 表 1
[0054]
[0055] 其中，枯草芽孢桿菌CCTCCN0:2011443、地衣芽孢桿菌CCTCCN0:2012457購買于 中國典型培養物保藏中心；凝結芽孢桿菌CCTCCN0:M2015273為實施例1所制備。短小芽 孢桿菌、巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、側孢芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌為市售產品。
[0056] 應用時，產品直接投放于觀賞魚缸內，用量0. 2g/m3水體，每10天使用一次。同時 進行對照試驗，在另外一個同規格、觀賞魚數量和大小一致的魚缸中，使用不含有凝結芽 孢桿菌CCTCCN0:M2015273的產品。兩個缸均正常喂食。
[0057] 不含有凝結芽孢桿菌CCTCCN0:M2015273的芽孢桿菌微生物凈水劑，魚缸在前1 個月內可不換水，水質較為干凈；從第二個月開始，魚缸底部有排泄物沉淀出現，水質逐漸 變渾濁。不到第三個月，魚出現浮頭現象，不得不換水。
[0058] 含有凝結芽孢桿菌CCTCCN0:M2015273的芽孢桿菌微生物凈水劑，魚缸4個月內 未換水，水質干凈，底部未見餌料、排泄物沉淀，魚未出現死亡現象。期間，主要水質指標變 化情況如表2所示，污染因子指標下降，水質穩定。
[0059] 表 2
[0060]
[0061] 實施例3
[0062] 按實施例1中的復合芽孢桿菌微生物凈水劑室溫下放置1年后再使用，產品直接 投放于觀賞魚缸內，用量〇. 2g/m3水體，每10天使用一次。
[0063] 正常喂食，魚缸4個月內未換水，水質干凈，底部未見餌料、排泄物沉淀，魚未出現 死亡現象。
[0064] 實施例4
[0065] 復合芽孢桿菌微生物凈水劑中各微生物含量如表3 :
[0066] 表 3
[0067]
[0068]
[0069] 應用時，產品直接投放于觀賞魚缸內，用量0.lg/m3水體，每10天使用一次。正常 喂食，魚缸一年內未換水，水質常年保持清亮，底部干凈，魚未出現死亡現象。
[0070] 實施例5
[0071 ] 復合芽孢桿菌微生物凈水劑中各微生物含量如表4 :
[0072] 表 4
[0073]
口II_〇? U八丄U (JJ_ u/ g_
[0074] 應用時，產品直接投放于觀賞魚缸內，用量0.lg/m3水體，每10天使用一次。正常 喂食，魚缸一年內未換水，水質常年保持清亮，底部干凈，魚未出現死亡現象。
[0075] 對于本領域技術人員來說，可以根據上述說明加以改進或變換，這些改進或變換 都屬于本發明所附權利要求的保護范圍。
【主權項】
1. 一種應用于觀賞魚的復合芽孢桿菌微生物凈水劑，其特征在于由以下菌種組成：所述凝結芽孢桿菌為凝結芽孢桿菌（Bacilluscoagulans)ZS-007,保藏于中國典型培 養物保藏中心，保藏編號為CCTCCN0:M2015273。2. -種權利要求1所述的應用于觀賞魚的復合芽孢桿菌微生物凈水劑的應用，其特征 在于將復合芽孢桿菌微生物凈水劑直接投入水體，用量〇. 1-0. 5g/m3水體，每8~12天使 用一次。
【專利摘要】本發明提供了一種應用于觀賞魚的復合芽孢桿菌微生物凈水劑，由以下菌種組成：枯草芽孢桿菌CCTCC？NO:M2011443、地衣芽孢桿菌CCTCC？NO:M2012457、凝結芽孢桿菌CCTCC？NO:M2015273、短小芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、側孢芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌；所述凝結芽孢桿菌為凝結芽孢桿菌(Bacillus？coagulans)ZS-007，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC？NO:M2015273。本發明可降解觀賞魚養殖水體中的底部殘餌和排泄物，實現凈化水體，節省換水人工并減少換水帶來的環境污染問題；產品保質期1年，利于日常采購和使用。CCTCC NO:M201527320150503
【IPC分類】C02F3/34, C12R1/085, C12R1/125, C12R1/11, C12N1/20, C12R1/10, C12R1/07
【公開號】CN105132307
【申請號】CN201510436128
【發明人】張梁, 石孔泉
【申請人】江南大學, 江蘇大有生物科技發展有限公司
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年7月22日