一種應用于觀賞魚的復合芽孢桿菌微生物凈水劑及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及微生物應用技術領域，尤其是涉及一種應用于觀賞魚的、含有凝結芽 孢桿菌復合芽孢桿菌微生物凈水劑及其應用。
【背景技術】
[0002] 隨著生活水平不斷提高，觀賞魚已進入日常生活，給人們帶來歡樂。家庭養魚過程 中，水體經常出現渾濁甚至發綠發黑等現象，嚴重時直接導致觀賞魚死亡。引起這種現象的 原因在于未被食用的餌料和觀賞魚排泄物污染了水體。
[0003] 目前，人們通常采用定期更換新鮮水或者使用含有光合細菌（PSB)的微生物凈水 劑產品來保持水體干凈。
[0004] 定期更換新鮮水固然能維持觀賞魚養殖水質，但替換出的臟水會被排入下水道或 者進入環境，形成新的污染源。
[0005]PSB是一類光能厭氧性微生物，能以污水中的有機物為營養進行光合作用，從而凈 化水質。農林生介紹了一種以光合菌群為主的復合微生物凈水劑在觀賞魚養殖中的有益效 果（復合微生物凈水劑對觀賞魚水族箱養殖水質的影響試驗，廣西農業科學，2008年第39 卷第6期KPSB有一個缺點，即保質期不長，出廠后短期內必須用完，否則微生物大量死亡。 因此，在使用含有光合細菌（PSB)的微生物凈水劑產品時，經常會發現產品前期有效，但過 了兩三個月以后效果減弱甚至沒有效果。
【發明內容】
[0006]針對現有技術存在的上述問題，本申請人提供了一種應用于觀賞魚的、含有凝結 芽孢桿菌的復合芽孢桿菌微生物凈水劑及其應用。本發明可降解觀賞魚養殖水體中的底部 殘餌和排泄物，實現凈化水體，節省換水人工并減少換水帶來的環境污染問題；產品保質期 1年，利于日常采購和使用。
[0007]本發明的技術方案如下：
[0008]本發明提供了一種應用于觀賞魚的復合芽孢桿菌微生物凈水劑，由以下菌種組 成：
[0009] 名稱 含量 枯vi'丨朵孢桿崗CCT'CCNO: M2011443 1.0XI07-3.0X 109cfu/g 地衣朵孢桿崗CCT'CCNO: M2012457 1.0XI07-1.5X1〇9cfu/g 凝結朵孢桿崗CCTCCNO:M2015273 0.5XI〇7-l.〇X109cfu/g 短小穿孢樸尚 0.1X丨〇' -().5X1 ()9cfu/g 1=L大穿孢樸尚 0.4X ! 〇' -1.〇X1 ()9cfu/g 解淀粉朵孢桿崗 0.5XI〇7-l.〇X109cfu/g 側孢穿孢樸尚 1.()X! 〇' -1.〇X1 ()9cfu/g 鱗d」孢樸尚 0.5X丨 〇' -1.〇X1 ()9cfu/g 介計 5.0X !〇7-l.〇Xl()iGcfu/g;
[0010] 所述凝結芽孢桿菌為凝結芽孢桿菌（Bacilluscoagulans)ZS-007,保藏于中國典 型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCN0:M2015273。
[0011] 本發明還提供了一種應用于觀賞魚的復合芽孢桿菌微生物凈水劑的應用，將復合 芽孢桿菌微生物凈水劑直接投入水體，用量0. 1-0. 5g/m3水體，每8~12天使用一次。
[0012] 1、凝結芽孢桿菌的篩選
[0013] 從江蘇無錫馬山某奶牛養殖場附近的土壤樣品稱取2g，加入98ml無菌生理鹽水， 80°C熱處理10min后，在37°C搖床上120rpm條件下振蕩20min，吸取上清液lml加入LB培 養基中稀釋涂布進行菌株分離。通過對菌株進行形態學觀察、生理生化實驗、16SrDNA分析 等手段有效而準確的確定菌種的屬種。
[0014] 最終得到編號為ZS-007的菌種，鑒定為凝結芽孢桿菌（Bacilluscoagulans)。
[0015]ZS-007于2015年5月3日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCM 2015273。保藏單位地址為中國.武漢.武漢大學。
[0016] 2、凝結芽孢桿菌高密度發酵
[0017](1)菌種活化
[0018] 將凝結芽孢桿菌菌種接種至營養瓊脂斜面培養基上，25-37°C下培養24-48hr;然 后劃線轉接于營養瓊脂茄子瓶斜面，25-37°C下培養24-48hr。
[0019] 營養瓊脂斜面培養基及營養瓊脂茄子瓶的組成均為：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L， 氯化鈉 5g/L，瓊脂 15-20g/L，pH7. 2-7. 4。
[0020] (2)搖瓶培養
[0021] 將活化好的菌種接種至搖瓶中，振蕩培養18_30hr。
[0022] 搖瓶培養基配方：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化鈉5g/L，pH7. 2-7. 4。250mL搖 瓶裝液量為20mL，500mL搖瓶裝液量為50mL。
[0023] 培養條件：搖瓶轉速200r/min，溫度25-37 °C。
[0024] (3)種子罐擴培
[0025] 擴培菌種以用于后期發酵。種子罐培養基組成：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化 鈉 5g/L，pH7. 2-7. 4。種子罐體積 10-1000L，裝液量 50-80%。
[0026] 培養條件：攪拌轉速180-250r/min，通氣量0. 5-1.Ovvm，溫度25-37°C，培養時間 18-30hr〇
[0027] (4)發酵罐發酵
[0028] 以0. 1% -10 %的接種量將種子液接入發酵罐，發酵培養基組成：葡萄糖25g/L， 蛋白胨15g/L，酵母粉10g/L，磷酸二氫鉀lg/L，硫酸鎂0. 5g/L，初始pH7. 0。發酵罐體積 1-50m3,裝液量 50-80%。
[0029] 培養條件：攪拌轉速100-200r/min，通氣量0? 5-0. 8vvm，溫度25-37°C，培養時間 16-48hr〇
[0030] 取發酵液鏡檢時，當90%以上的菌體都形成芽孢時，即到發酵終點，得到最終發酵 液。
[0031] 采用平板涂布法測定最終發酵液活菌數和芽孢數，并計算芽孢率。其中，芽孢率 為芽孢數與活菌數的比值。所用培養基為營養瓊脂培養基：蛋白胨l〇g/L，牛肉膏3g/L， 氯化鈉5g/L，瓊脂15-20g/L，pH7. 2-7. 4。測定最終發酵液活菌數時，梯度稀釋后測定；測 定芽孢數時，取最終發酵液于80°C熱處理lOmin，梯度稀釋后測定。最終發酵液中活菌數 UXlC^cfu/mL以上、芽孢數ljXK^cfu/mL以上、芽孢率90. 8%以上。
[0032]3、凝結芽孢桿菌干菌粉制備
[0033] 最終發酵液離心后收集濕菌泥，采用噴霧干燥工藝得到干菌粉。操作條件為：進風 溫度210°C，出風溫度100°C。干菌粉中活菌數8. 0X10ncfu/g以上。
[0034] 本發明的實現方式：將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌、短小芽孢桿 菌、巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、側孢芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌進行復配得到復合芽孢 桿菌微生物凈水劑產品。該復合芽孢桿菌微生物凈水劑產品直投式使用，用量0.l-o. 5g產 品/m3水體，每8-12天使用一次。產品保質期1年。
[0035] 本發明有益的技術效果在于：
[0036] 本發明的作用原理：（1)多種芽孢桿菌發揮協同作用，多余餌料和觀賞魚排泄物 用作微生物繁殖所需的營養物質而被大量消耗；（2)微生物代謝產生很多酶類，有效去除 水體中的氨氮、亞硝酸鹽等不利因素；（3)形成的微生物菌體聚合物可充當觀賞魚餌料，直 接被吞食；(4)微生物以芽孢狀態存在，抗逆性強，