TTGGTCATTTAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTT TCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTATTGTATTTGAAAGGGGTTGTAGCTGRCCTCCTCTTGAAAAGGGGGGA GGTATGTGCACACCTCTGTTCATTCATATTCTCTCACACCTGTGCATGCTTTGTAGGTTGGTTTTGAATGGTTGTCT TCTCTGATGGAGACAGCTGTTTTGACCTTCCTATGTTTTTTAAATTGACTCCGTATCAGTTACAGAATGTATGTTG CGTGTAACGCATATTGTATAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACACRGCGAAATGTG ATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCGCTCCTTGGTATTCTGAGG AGCATGCCTGTTTGAGTGTCATGRAATTATCAACCCTTTTGACTTTTTGTTGAATGGGCTTGGATTTGGAGGGTTA AATTGCTGGCTCTTTTTTTTGATTCAGCTCCTCTTGAATGCATTAGCTTGAACCCTTGTGGATTGACCTTATCGGT GTGATAGTCATCTATGCCGTGGTTGTCTGAGGTGGGATCGGCTTCTAATGGTGCAAGTCCCTTCAGGGGGATGATT TTCTAATGACCTTCTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGC菌株GW03 的 LSU(D1-D3)序列：
[0068] SEQIDNO：2
[0069] AGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACTAACAAGGATTCCCCTAGTAACTGCGAGTGAAGCGGGATA AGCTCAAATTTAAAATCTGGTGGGTGTTTGGCCTGCCCGAGTTGTAGTCTGGAGAAGTGCTTTCTGTGCTGAACCGT GTACAAGTCTCTTGGAACAGAGCGTCATAGAGGGTGAGAATCCCGTCTTTGACACGGACTATCAGTGCTTTGTGATG CGCTCTCAATGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCAAAATGGGTGGTAAATTCCATCTAAAGCTAAATATTGGCG AGAGACCGATAGTGAACAAGTACCGTGAGGGAAAGATGAAAAGCACTTTGGAAAGAGAGTTAAACAGTACGTGAAAT TGCTGAAAGGGAAACACTTGAAGTCAGTCGCGTTGAYCGGAGCTCAACCTTGCTTTTTTGGGCTTGGTGCACTTTCT GGTTGACGGGTCAGCATCAATTTTGACTGTTGGAGAAGGGTTGGGGAAATGTGGCACCTTCGGGTGTGTTATAGCCC CCAGTCACATACAATGGTTGGGATTGAGGAACTCAGCACACCTTTATGGTCAGGGTTTTTTTAACCTATGTTATTGT GCTTAGGATGCTGGCGTAATGGCTTTAAATGACCCGTCTTGAAACACGGACCAAGGAGTCTAACATGCCTGCGAGTG TTTGGGTGGCAAACCCGAGTGCGTAATGAAAGTGAAAGTTGGGACCTCTGTTGTGGGAGGGCACCGATGCCCGGACC AGACCTTTTGTGATGGATCCGCGGTAGAGCATGTATGTTGGGACCCGAAAGATGGTGAACTATGCCTGAATAGGGTG AAGCCAGAGGAAACTCTGGTGGAGGCTCGTAGCGATTCTGACGTGCAAATCGATCGTCAAATTTGGGTATAGGGGCG AAAGACTAATCGAACCATCTAGTAGCTGGTTCCTGCCGA
[0070] 2.與已知牛樟芝品種的序列比對分析結果
[0071] 另將GW03與財團法人食品工業發展研究所生物資源保存和研究中心（BCRC)所 保存的公開菌株BCRC35396、BCRC35398、BCRC35716、BCRC36401、BCRC36711、BCRC36795、 BCRC37609、BCRC37616、BCRC37848、BCRC37849、BCRC37850、BCRC37889、BCRC37890、 BCRC37891、BCRC37893、BCRC37894、BCRC37941 計 17 株菌株進行ITS部份序列與LSUD1-D3 部份序列比對。
[0072] 發現ITS序列共有8個核醣體去氧核醣核酸位點具有差異性，其中GW03與上述其 它17株菌株分別有3-5個位點的序列差異，相似度是99. 1% -99. 4%。LSUD1-D3片段部 分基因序列還有10個核醣體去氧核醣核酸位點具有差異性，其中GW03與上述其它17株菌 株分別有1-4個位點的序列差異，相似度是99. 4% -99. 8%。
[0073] 接著將所有菌株rDNA基因序列（ITS和LSUD1-D3)再以Not印ad軟體將此兩段基 因序列串聯起來，并以DAMBE軟體轉檔，使用Mega4軟體做親緣關系分析，以最大簡約數法 (MaximunParsimonyMethod，MP)來構筑演化樹，并以1000次重復抽樣估計法（Bootstrap) 重復來計算親緣關系樹各節點上的支持強度，最后所得的演化樹以綜合樹（consensus tree)表示，獲得如圖1所示的牛樟芝菌株親緣關系樹。
[0074] 由ITS和LSUD1-D3兩段基因片段部分序列分析結果和親緣關系樹顯示GW03與 BCRC所有已公開菌株的序列并不相同。
[0075] GW03牛樟芝菌株已于2013年11月14日寄存于財團法人食品工業發展研究所生 物資源保存和研究中心，寄存編號是BCRC930164 ;并且所述牛樟芝菌株也已根據布達佩斯 條約（BudapestTreaty)于2014年2月24日寄存于德國微生物菌種保藏中心（Deutsche SammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbH(DSMZ),Mascheroderffeglb, D38124,Braunschweig,Germany)，寄存編號是DSM28462。
【主權項】
1. 一種牛樟芝分離株，其包含如SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的ITS序列和如SEQ ID NO :2所示核苷酸序列的LSU D1-D3序列。2. 根據權利要求1所述的牛樟芝分離株，所述牛樟芝分離株是寄存于德國微生物菌種 保藏中心并且寄存編號為DSM28462的菌株，或是與寄存于德國微生物菌種保藏中心并且 寄存編號為DSM28462的菌株具有實質上完全相同特征的突變株。3. -種制備牛樟芝培養產物的方法，其包含將根據權利要求1或2所述的牛樟芝分離 株接種于適合培養基中，和在適當條件下進行培養以獲得所述培養產物。4. 根據權利要求3所述的方法，其中所述培養基是固體培養基或液體培養基。5. 根據權利要求4所述的方法，其中所述培養基是以谷物為基礎的固體培養基或以食 品工業副產物為基礎的固體培養基。6. 根據權利要求5所述的方法，其中所述谷物是米、大麥、蕎麥、高粱、薏仁、小麥、黑 麥、燕麥或其組合。7. 根據權利要求6所述的方法，其中在以米為基礎的固體培養基中培養所制備的牛 樟芝培養產物中，以所述牛樟芝培養產物的總重量計，2, 3-二甲氧基-5-甲基-對-苯醌 (DMB)、4, 7-二甲氧基-5-甲基-1，3-苯并間二氧雜環戊烯（SY-I)和5-甲基-苯并[1，3] 間二氧雜環戊烯-4,7-二醇（1^00)的總產量大于約1，20011^/1^。8. 根據權利要求6所述的方法，其中在以蕎麥為基礎的固體培養基中培養所制備的牛 樟芝培養產物中，以所述牛樟芝培養產物的總重量計，DMB、SY-I和MBDD的總產量大于約 1，500mg/kg。9. 根據權利要求5所述的方法，其中所述食品工業副產物是蔗渣、淀粉、麩皮、米糠、玉 米桿、咖啡渣或其組合。10. -種用于制備DMB、SY-I和/或MBDD的方法，其包含從根據權利要求3到9中任 一權利要求所述的方法所制備的牛樟芝培養產物中分離出DMB、SY-I和/或MBDD。11. 一種牛樟芝培養產物，其是由根據權利要求3到9中任一權利要求所述的方法所制 備。12. -種組合物，其包含有效量的根據權利要求11所述的牛樟芝培養產物。13. 根據權利要求12所述的組合物，其是醫藥組合物或食品組合物。
【專利摘要】本發明涉及一種牛樟芝(Antrodia？cinnamomea)分離株和制備所述分離株培養產物的方法。本發明另提供制備2，3-二甲氧基-5-甲基-對-苯醌(DMB)、4，7-二甲氧基-5-甲基-1，3-苯并間二氧雜環戊烯(SY-1)和/或5-甲基-苯并[1，3]間二氧雜環戊烯-4，7-二醇(MBDD)的方法。DSM 2846220140224
【IPC分類】C12N1/14, A61K36/07, A23L1/28, C12R1/645
【公開號】CN105132288
【申請號】CN201410234975
【發明人】林欣榜, 張家韻, 黃祥鳳, 謝松源, 吳明德, 陳彥霖
【申請人】觀文農業生技有限公司
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2014年5月29日