一種以羅非魚魚皮、魚鱗制備膠原蛋白粉的方法，包括以下步驟:(1)臭氧水處理:將魚皮、魚鱗經分選除雜、清洗后，分別堆鋪成0.5~lcm厚，將濃度為9毫克/升的臭氧水霧化后，均勻噴灑于魚皮(臭氧水用量為魚皮重量的0.5%)、魚鱗上(臭氧水用量為魚皮重量的
1.2%);采用頻率為30kHz、功率80w/cm2的超聲波對魚皮、魚鱗進行超聲消解，魚皮超聲3小時，魚鱗超聲3h ；
(2)酸處理:將經過堿處理的魚皮、魚鱗經分選除雜、清洗，在70°C條件下，烘干至水分含量< 12wt%，粉碎后過30目篩后；分別制得魚皮粉、魚鱗粉，然后采用酸處理脫鈣；酸處理條件為=HCl濃度0.4 11101/1，料液比1:20，脫鈣時間6 h ;
(3)堿處理:采用堿處理除去魚皮、魚鱗中的非膠原雜蛋白；工藝條件為=NaOH濃度0.15mol/L，料液比1:20，脫雜蛋白時間12h ;在此工藝條件下，得到的魚鱗膠原蛋白純度尚j品質佳;
(4)酶處理:魚皮的酶處理條件為:以0.5mol/L的復合蛋白酶乙酸溶液作為提取劑，酶量4000 U/g,提取溫度37°C，提取時間為6h，固液比為1: 4，所述的復合蛋白酶為胰蛋白酶和堿性蛋白酶按質量比6:1混合而成的，在此條件下得膠原蛋白的提取率在600%以上；魚鱗的酶處理條件為:處理溫度55°C、復合蛋白酶與底物比為3wt%、底物濃度100g/L、酶解處理時間2h，所述的復合蛋白酶為木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶按質量比4:1混合而成的；加入不同的復合酶提取得到酶促溶性膠原蛋白，這樣得到的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結構，更降低了膠原的抗原性，適用于作為醫用生物材料及原料；
(5)脫色:酶解液經離心、過濾、脫色、脫腥處理后，加入至三級膜系統中；
(6)膜處理:經三級膜系統處理后，截留得到不同分子量的膠原蛋白肽產物；
一級膜處理:將脫腥后的酶解液在PH值6、溫度40°C、壓力0.3MPa的條件下，采用500nm的陶瓷膜進行分離，平均通量為120kg/m2.h，進行一級膜處理；
二級膜處理:在pH值7、溫度40°C、壓力1.2MPa的條件下，采用分子量為2500Da的卷式膜分離，進行二級膜處理，截留分子量500~800Da的活性短肽；
三級膜處理:在pH值7、溫度40°C、壓力3.0MPa的條件下，進行三級膜處理，去除90wt%以上的小分子氨基酸；
(7)低溫真空濃縮:不同分子量的膠原蛋白肽產物經過-10°C真空濃縮、噴霧干燥、過篩工序后分別進行包裝制得膠原蛋白粉。
[0012]實施例3
一種以羅非魚魚皮、魚鱗制備膠原蛋白粉的方法，包括以下步驟:(1)臭氧水處理:將魚皮、魚鱗經分選除雜、清洗后，分別堆鋪成0.5~lcm厚，將濃度為11毫克/升的臭氧水霧化后，均勻噴灑于魚皮(臭氧水用量為魚皮重量的0.5%)、魚鱗上(臭氧水用量為魚皮重量的0.8%);采用頻率為20kHz、功率60w/cm2的超聲波對魚皮、魚鱗進行超聲消解，魚皮超聲2小時，魚鱗超聲4h ；
(2)酸處理:將經過堿處理的魚皮、魚鱗經分選除雜、清洗，在80°C條件下，烘干至水分含量< 12wt%，粉碎后過30目篩后；分別制得魚皮粉、魚鱗粉，然后采用酸處理脫鈣；酸處理條件為=HCl濃度0.4 11101/1，料液比1:20，脫鈣時間6 h ;
(3)堿處理:采用堿處理除去魚皮、魚鱗中的非膠原雜蛋白；工藝條件為=NaOH濃度0.15mol/L，料液比1:20，脫雜蛋白時間12h ;在此工藝條件下，得到的魚鱗膠原蛋白純度尚j品質佳;
(4)酶處理:魚皮的酶處理條件為:以0.5mol/L的復合蛋白酶乙酸溶液作為提取劑，酶量4000 U/g，提取溫度37°C，提取時間為6h，固液比為1:4，所述的復合蛋白酶為胰蛋白酶和堿性蛋白酶按質量比5:1混合而成的，；在此條件下得膠原蛋白的提取率在600%以上；魚鱗的酶處理條件為:處理溫度55°C、復合蛋白酶與底物比為3wt%、底物濃度100g/L、酶解處理時間2h，所述的復合蛋白酶為木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶按質量比3:1混合而成的；加入不同的復合酶提取得到酶促溶性膠原蛋白，這樣得到的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結構，更降低了膠原的抗原性，適用于作為醫用生物材料及原料；
(4)脫色:酶解液經離心、過濾、脫色、脫腥處理后，加入至三級膜系統中；
(5)膜處理:經三級膜系統處理后，截留得到不同分子量的膠原蛋白肽產物；
一級膜處理:將脫腥后的酶解液在PH值7、溫度50°C、壓力0.3MPa的條件下，采用
500nm的陶瓷膜進行分離，平均通量為120kg/m2.h，進行一級膜處理；
二級膜處理:在pH值7、溫度37°C、壓力1.3MPa的條件下，采用分子量為2500Da的卷式膜分離，進行二級膜處理，截留分子量500~800Da的活性短肽；
三級膜處理:在pH值7、溫度37°C、壓力2.8MPa的條件下，進行三級膜處理，去除90wt%以上的小分子氨基酸；
(6)低溫真空濃縮:不同分子量的膠原蛋白肽產物經過_5°C真空濃縮、噴霧干燥、過篩工序后分別進行包裝制得膠原蛋白粉。
[0013]以上所述僅為本發明的較佳實施例，凡依本發明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應屬本發明的涵蓋范圍。
【主權項】
1.一種以魚皮、魚鱗制備膠原蛋白粉的方法，其特征在于:包括以下步驟:(I)臭氧水處理:將魚皮、魚鱗經分選除雜、清洗后，分別堆鋪成0.5~lcm厚，將濃度為9-11毫克/升的臭氧水霧化后，均勻噴灑于魚皮、魚鱗上；采用頻率為20~30kHz、功率60~80w/cm2的超聲波對魚皮、魚鱗進行超聲消解，超聲2-4小時； (2 )將臭氧水處理后的魚皮、魚鱗烘干、粉碎后分別制得魚皮粉、魚鱗粉， 然后采用酸處理脫鈣，采用堿處理除去魚皮、魚鱗中的非膠原雜蛋白； (3)魚皮、魚鱗分別進行酶處理:魚皮的酶處理條件為:以0.5mol/L復合蛋白酶乙酸溶液作為提取劑，酶量4000 U/g，提取溫度37°C，提取時間為6h，固液比為1:4 ;魚鱗的酶處理條件為:處理溫度55°C、復合蛋白酶與底物比為3wt%、底物濃度100g/L、酶解處理時間2h ; (4)脫色:酶解液經離心、過濾、脫色、脫腥處理后，加入至三級膜系統中； (5)膜處理:經三級膜系統處理后，截留得到不同分子量的膠原蛋白肽產物； (6)低溫真空濃縮:不同分子量的膠原蛋白肽產物經過低溫真空濃縮、噴霧干燥、過篩工序后分別進行包裝制得膠原蛋白粉。2.根據權利要求1所述的以魚皮、魚鱗制備膠原蛋白粉的方法，其特征在于:步驟(5)中所述的三級膜系統具體為: (1)一級膜處理:將脫腥后的酶解液在PH值6~7、溫度40~50°C、壓力0.2-0.3MPa的條件下，采用500nm的陶瓷膜進行分離，平均通量為120kg/m2.h，進行一級膜處理； (2)二級膜處理:在pH值6~7、溫度35~40°C、壓力1.1-1.3MPa的條件下，采用分子量為2500Da的卷式膜分離，進行二級膜處理，截留分子量500~800Da的活性短肽； (3)三級膜處理:在pH值6~7、溫度35~40°C、壓力2.5-3.0MPa的條件下，進行三級膜處理，去除90wt%以上的小分子氨基酸。3.根據權利要求1所述的以魚皮、魚鱗制得膠原蛋白粉的方法，其特征在于:步驟(I)中對魚皮進行處理時:臭氧水用量為魚皮重量的0.5%，對魚鱗進行處理時:臭氧水用量為魚皮重量的0.8-1.2%。4.根據權利要求1所述的以魚皮、魚鱗制得膠原蛋白粉的方法，其特征在于:步驟(2)所述的烘干、粉碎為在65~80°C條件下，烘干至水分含量彡12wt%，粉碎后過30目篩。5.根據權利要求1所述的以魚皮、魚鱗制備膠原蛋白粉的方法，其特征在于:步驟(2)所述的酸處理條件為:HC1濃度0.411101/1，料液比1:20，脫鈣時間6h ;堿處理條件為=NaOH濃度0.1511101/1，料液比1:20，處理時間12 h。6.根據權利要求1所述的以魚皮、魚鱗制備膠原蛋白粉的方法，其特征在于:步驟(3)中魚皮酶處理時，所述的復合蛋白酶為胰蛋白酶和堿性蛋白酶按質量比5-6:1混合而成的；魚鱗酶處理時，所述的復合蛋白酶為木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶按質量比3-4:1混合而成的。
【專利摘要】本發明屬于動物類膠原蛋白的提取領域，具體涉及一種以魚皮、魚鱗制備膠原蛋白粉的方法。將魚皮、魚鱗經臭氧水處理、酸處理脫鈣、堿處理脫雜蛋白后，采用復合蛋白酶對魚皮、魚鱗分別進行酶解處理，在此條件下，膠原蛋白的提取率高；最后采用三級膜系統進行處理，分別截留得到不同分子量的膠原蛋白肽產物。通過多重膜過濾，可以獲得不同大小分子量的膠原蛋白提取產物，肽的損失幾乎為零，可去除90%以上的小分子氨基酸，提高了短肽的純度，制得了一種純度高的膠原蛋白粉。
【IPC分類】C12P21/06
【公開號】CN105087734
【申請號】CN201510592446
【發明人】楊新, 楊宗銘
【申請人】福建福銘食品有限公司
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2015年9月17日