同菌株16SrRNA基因序列進行同源性比較，比 較結果顯示所篩選出的SCL87菌株與唾液乳桿菌成員相似度最高，說明其為唾液乳桿菌。 [0041]LactobacillussalivariusSCL87 菌株的 16SrRNA序列如下：1221bp
[0042] GCCCGGTAGCGGCGGCTATAATGCAAGTCGAACGAAACTTTCTTACACCGAATGCTTGCATTCACCGTA AGAAGTTGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTAAAAGAAGGGGATAACACTTGGAAACAGGTG CTAATACCGTATATCTCTAAGGATCGCATGATCCTTAGATGAAAGATGGTTCTGCTATCGCTTTTAGATGGACCCGC GGCGTATTAACTAGTTGGTGGGGTAACGGCCTACCAAGGTGATGATACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCAC ATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATG GAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTCTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGAGAAGAACACGAGTGAGAGTAAC TGTTCATTCGATGACGGTATCTAACCAGCAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGC AAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGGGAACGCAGGCGGTCTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTTAA CCGGAGTAGTGCATTGGAAACTGGAAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGC GTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGTTCGAAAGCGTGGGT AGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAACGATGAATGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAG TGCCGCAGCTAACGCAATAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGC CCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCTTTGACC ACCTAAGAGATTAGGCTTTTCCCTTCGGGGACAAAGTGAACAGGTGGTTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGA GATGTTGGGTTAAAGTCCCCGCACGAGCGCACCCTTTGTTGTCAGTTGGCAGCATTAAGCGGGCCACCTCTTGGCGA GACTGGCCGGTGACAAACCGGTAGAATGTTGGGTACGACGTTCAAGTCATCATGCGCTTATGAACCTGGGGCTCo
[0043] 三、唾液乳桿菌SCL87的主要特性
[0044] (1)生物學形態特征
[0045] 菌體形態特征：菌體呈桿狀，一般呈單個、成對或短鏈狀存在，如圖2所示。
[0046] 菌落形態特征：在MRS固體培養基（成分（g/L):蛋白胨10. 0,牛肉浸粉8. 0,酵母 浸粉4. 0,葡萄糖20. 0,磷酸氫二鉀2. 0,檸檬酸氫二銨2. 0,乙酸鈉5. 0,硫酸鎂0. 2,硫酸錳 0. 04,瓊脂14. 0,吐溫801. 0，pH值6. 5±0. 2)上能形成乳白色的菌落，菌落圓形，邊緣整齊， 不透明，不形成芽孢。
[0047] (2)生長特征：兼性厭氧生長，生長溫度范圍32~42°C(最適37°C)，生長pH范 圍為pH6~8 (最適pH6. 5)。
[0048] (3)生長曲線
[0049] 復壯唾液乳桿菌，在MRS固體培養基上傳代培養兩次，再將菌株接種于MRS肉湯 (成分（g/L):蛋白胨10. 0,牛肉浸粉8. 0,酵母浸粉4. 0,葡萄糖20. 0,磷酸氫二鉀2. 0,檸 檬酸氫二銨2. 0,乙酸鈉5. 0,硫酸鎂0. 2,硫酸錳0. 04,吐溫801. 0,pH值5. 7±0. 2)，37°C 培養12h左右得到種子液。取種子液10yL分別接種于事先準備好的含等量MRS肉湯的10 個離心管中，于37°C靜置培養。其間每隔2h輪流向每只離心管，漩渦混勻，用分光光度計檢 測菌液的0D值，MRS肉湯調零，取500yL菌液檢測0D_nni值，將實驗結果繪制成SCL87的 生長曲線，如下圖3所示。
[0050] 結果表明，唾液乳桿菌SCL87從第10h到第18h為對數增長期，20h后進入穩定期， 細菌幾乎停止生長，活菌數量和凋亡數量處于一個平衡時。當乳酸菌在動物腸道內達到一 定數量時，在對動物無害的情況下，占有生長優勢的乳酸菌會競爭性的抑制腸道中病原菌 的生長，其代謝產物如有機酸、過氧化氫等也可殺滅腸道病原菌。
[0051 ] 四、唾液乳桿菌SCL87對沙門氏菌的體外抑制作用
[0052] (1)牛津杯試驗
[0053] 采用國內外測定抗生素效價通用方法及各國藥典規定的方法--牛津杯定量擴 散法，來測定唾液乳桿菌的抑菌活力。
[0054] 將唾液乳桿菌SCL87、保加利亞乳桿菌（Lactobacillusbulgaricus)(購于美國 菌種保藏中心，編號ATCC393)、嗜酸乳桿菌（Lactobacillusacidophilus)(購于廣東省 微生物菌種保藏中心，GIM編號：GIM1. 730)和植物乳桿菌（Lactobacillusplantarum) (購于廣東省微生物菌種保藏中心，編號ACCC11095)復壯，在MRS固體培養基上傳代培養 兩次，挑取單菌落接種于MRS肉湯，37°C，靜置培養19~22h，10000r/min離心lOmin，上清 液經0. 22ym無菌微孔濾膜過濾后，4°C保存待用。取100yL1XlOlfu/mL經15h培養的 新鮮鼠傷寒沙門氏菌（Salmonellatyphimurium)(購于廣東省微生物菌種保藏中心，編號 CMCC50115)LB肉湯菌液，放于37°C培養箱10min，待培養基表面水分蒸發完全。用無菌棉簽 蘸取菌液均勻涂于LB(成分（g/L):胰蛋白胨10. 0,酵母浸粉5. 0,氯化鈉10. 0,瓊脂15. 0， pH值7. 0±0. 2)培養基表面，用鑷子夾取牛津杯放置于平皿中，然后每個牛津杯中加入已 制備好的發酵上清液200iiL，200iiLMRS肉湯放于牛津杯作對照。然后將培養基平皿置于 37°C培養15~24h，觀察牛津杯周圍抑菌圈，并測量其直徑。
[0055] 實驗結果如下表1所示，與其它菌株相比，裝有SCL87菌株發酵上清液的牛津杯周 圍出現了明顯的抑菌圈，抑菌圈直徑為13mm左右，對照組MRS肉湯沒有出現抑菌圈，說明該 唾液乳桿菌SCL87發酵上清液對鼠傷寒沙門氏菌的生長具有很好的抑制作用。
[0056] 表1菌株抑菌圈直徑（mm)
[0057]
[0058] (2)競爭性抑制試驗
[0059] 分別將新鮮培養出的鼠傷寒沙門氏菌（Salmonellatyphimurium)和唾液乳桿菌 SCL87劃線接種于MRS固體培養基表面上，將培養基平皿置于37°C培養24h，結果發現，48h 后鼠傷寒沙門氏菌和唾液乳桿菌SCL87都能在MRS培養基生長，且都生長旺盛。與唾液乳 桿菌SCL87菌落不同，MRS培養基上的鼠傷寒沙門氏菌菌落呈微透明狀，濕潤，邊緣整齊，而 菌株SCL87菌落為邊緣整齊的乳白色，從菌落的形態和色澤可以在MRS培養基上肉眼區分 沙門氏菌和唾液乳桿菌，唾液乳桿菌SCL87與鼠傷寒沙門氏菌CMCC50115在MRS固體培養 基上的生長情況如圖4所示。基于以上基礎，可以做如下競爭抑制試驗：
[0060] ①正向競爭試驗
[0061] 將培養出的新鮮唾液乳桿菌SCL87劃線接種于MRS固體培養基上，37°C培養24h， 24h后取出培養皿，將已準備好的新鮮鼠傷寒沙門氏菌100yLIXK^cfu/mL均勻涂布在長 有唾液乳桿菌SCL87的MRS固體培養基上，再將培養皿放入37°C培養箱，48h后觀察MRS固 體培養基上細菌的生長情況。
[0062] 觀察結果發現MRS固體培養基上只長有乳白色的唾液乳桿菌菌落，沒有微透明的 鼠傷寒沙門氏菌菌落，為進一步確定MRS固體培養基上沒有活的鼠傷寒沙門氏菌，用滅菌 的接種環粘取涂過鼠傷寒沙門氏菌的MRS固體培養基表面，然后劃線于SS固體培養基（成 分（g/L):牛肉浸粉5. 0,月示胨5. 0,乳糖10. 0,三號膽鹽8. 5,枸櫞酸鈉8. 5,硫代硫酸鈉 8. 5,枸櫞酸鐵1. 0,中性紅0. 025,煌綠0. 00033,瓊脂17. 0)上，37°C培養24小時，24h后觀 察SS培養基，結果發現SS培養基上沒長任何菌落。
[0063] 以上結果證明唾液乳桿菌SCL87對沙門氏菌有很好的競爭性防御效果，可能的原 因是唾液乳桿菌在MRS固體培養基上分泌的有機酸和過氧化氫創造了一個酸性環境，抑制 了沙門氏菌的生長。
[0064] ②反向競爭試驗
[0065] 將培養出的新鮮鼠傷寒沙門氏菌劃線接種于MRS固體培養基上，37°C培養24h， 24h后取出培養皿，將已準備好的100yL新鮮唾液乳桿菌SCL873X10scfu/ml均勻涂布在 長有鼠傷寒沙門氏菌的MRS固體培養基上，再將培養皿放入37°C培養箱，24h后觀察MRS固 體培養基上細菌的生長情況。
[0066] 觀察結果發現在微透明的鼠傷寒沙門氏菌菌落周圍出