相應的實施例。
[0016]本發明的附加方面和優點將在下面的描述中部分給出,部分將從下面的描述中變得明顯,或通過本發明的實踐了解到。
【附圖說明】
[0017]本發明的上述和/或附加的方面和優點從結合下面附圖對實施例的描述中將變得明顯和容易理解,其中:
[0018]圖1顯示夏佛塔苷的化學結構式;
[0019]圖2顯示本發明的一個實施例中的提取分離圖1所示化合物的方法的步驟流程;
[0020]圖3顯示本發明的一個實施例中的提取分離圖1所示化合物的方法的步驟流程;
[0021]圖4顯示本發明的一個實施例中的提取分離圖1所示化合物的系統的結構示意圖;
[0022]圖5顯示本發明的一個實施例中的提取分離圖1所示化合物的方法的流程圖;
[0023]圖6顯示本發明一個實施例中的提取純化產物的ES1-MS質譜圖;
[0024]圖7顯示本發明一個實施例中的提取純化產物的H1-NMR譜圖;以及
[0025]圖8顯示本發明一個實施例中的提取純化產物的C13-NMR譜圖。
【具體實施方式】
[0026]下面詳細描述本發明的實施例,所述實施例的示例在附圖中示出,其中自始至終相同或類似的標號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附圖描述的實施例是示例性的,僅用于解釋本發明,而不能理解為對本發明的限制。
[0027]需要說明的是,術語“第一”、“第二”僅用于描述目的,而不能理解為指示或暗示相對重要性或者隱含指明所指示的技術特征的數量。由此,限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隱含地包括一個或者更多個該特征。進一步地,在本發明的描述中,除非另有說明,“多個”的含義是兩個或兩個以上。
[0028]下面將結合實施例對本發明的方案進行解釋。本領域技術人員將會理解,下面的實施例僅用于說明本發明,而不應視為限定本發明的范圍。實施例中未注明具體技術或條件的,按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者,均為可以通過市購獲得的常規產品。
[0029]實施例1
[0030]圖5顯示本發明方法的一般流程,包括以下:
[0031]1、原料處理:選用豆科植物廣金錢草45000-50000重量份,切成5-10cm小段,飲用水清洗掉泥沙,瀝干,投料。
[0032]2、乙醇提取:80%乙醇回流提取兩次,第一次12倍量2h,第二次10倍量1.5h ;合并兩次醇提液,回收乙醇至無醇味。
[0033]3、減壓濃縮:提取濃縮液加水稀釋至藥材重量的5倍體積;200目濾布過濾;得上柱液;將事先用95%乙醇處理過的凈品樹脂裝柱,純化水替換;將上柱液用泵打入柱中,吸附,控制流速0.5-1倍BV/h,吸附完畢后,靜置2h ;用純化水沖洗,洗脫流速3-4BV/h,洗脫量1BV ;再用60%乙醇洗脫,洗脫流速2-3BV/h,洗脫量5BV ;60%洗脫液合并,打入濃縮罐,回收乙醇至無醇味,至真空干燥箱中50-70°C干燥,得廣金原料藥300-400重量份。
[0034]4、二級色譜分離
[0035](I)將廣金原料藥300-400重量份用AB_8大孔樹脂色譜分離,即色譜分離I,乙醇-水混合溶劑20:80, 30:70, 40:60, 60:40梯度洗脫,每個梯度沖到無顏色即可,合并各流份得20%,30%,40%,60%共四個部位。
[0036](2)色譜I得到的30%部位用ODS反相中壓色譜分離,即色譜分離II,用乙醇-水,條件為10 %等度30min,10-30 %梯度200min洗脫,按照色譜圖出峰順序,分份收集,每100-150體積份收集一份,共收集40-50個流份,高效液相色譜檢識后合并相同流份;色譜分離II得到的30-40流份合并,進一步用ODS反相中壓色譜分離,即色譜分離III,用乙醇-水,條件為15%等度30min,15-25%梯度200min洗脫,按照色譜圖出峰順序,分份收集,每100-150體積份收集一份,共收集35-45個流份,高效液相色譜檢識后合并相同流份。
[0037](3)色譜分離III得到的第30-35流份合并,減壓濃縮回收溶劑,至溶劑中有少量沉淀物析出即可停止濃縮,進一步放置至析出淡黃色沉淀,過濾,以丙酮10ml淋洗,即得到目標提取物,為淡黃色粉末。
[0038]5、結構鑒定
[0039]經電噴霧電離質譜(ES1-MS)和光譜法(H1-NMR和C13-NMR)對得到的淡黃色粉末進行鑒定,結合ES1-MSj1-NMR和C13-NMR信息推斷該化合物的分子式為C26H28O14,確定本發明所述從廣金錢草中提取分離出的淡黃色粉末為夏佛塔苷。經HPLC純度檢驗,純度達到98 %以上,可作為廣金錢草鑒別和含量測定用的化學對照品。
[0040]圖6為對夏佛塔苷進行電噴霧電離質譜的質譜圖,顯示夏佛塔苷中各成分的分子量,主成分的分子量為ES1-MS m/z: 565 [M+H] +。
[0041]圖7 顯示夏佛塔苷的 H1-NMR 譜圖,Hl-NMR(DMSC^eOOHZ)δ:13.82(5-0H),8.10 (2H, d, J = 8.4Hz, H-2 ? , ),6.92 (2H, d, J =8.4Hz, H-3,,5,),6.82 (1H, s, H_3)。
[0042]圖8 顯示夏佛塔苷的 C13-NMR 譜圖,C13-NMR (DMSO,125HZ) δ: 163.9 (C-2),102.3 (C-3),182.3 (C-4), 161.0 (C-5),108.4 (C-6),159.9 (C-7),104.3 (C-8),154.3 (C-9),I03.5 (C-1O), 121.2(C-1,),128.9(C_2,6,),116.0(C_3,5,),161.2(C_4,),74.6 (C_l” ofAra),68.6(C-2,,of Ara),75.0 (C_3,,of Ara),68.8 (C_4,,of Ara),70.5 (C_5,,of Ara),73.6(C-1,,,of Glc),70.8(C-2,,,of Glc),78.6 (C_3,,,of Glc),70.2 (C_4,,,of Glc),81.4 (C-5,,,of Glc),60.8 (C-6,,,of Glc)。其中 Ara 代表阿拉伯糖,Glc 代表葡萄糖。
[0043]實施例2
[0044]選用豆科植物廣金錢草45000-50000重量份,切成5_10cm小段,飲用水清洗掉泥沙,瀝干,投料。80%乙醇回流提取兩次,第一次12倍量2h,第二次10倍量1.5h ;合并兩次醇提液,回收乙醇至無醇味。提取濃縮液加水稀釋至藥材重量的5倍體積;200目濾布過濾;得上柱液;將事先用95%乙醇處理過的凈品樹脂裝柱,純化水替換;將上柱液用泵打入柱中,吸附,控制流速0.5-1倍BV/h,吸附完畢后,靜置2h ;用純化水沖洗,洗脫流速3-4BV/h,洗脫量1BV ;再用60%乙醇洗脫,洗脫流速2-3BV/h,洗脫量5BV ;60%洗脫液合并,打入濃縮罐,回收乙醇至無醇味,至真空干燥箱中50-70°C干燥,得廣金原料藥300-400重量份。
[0045]將廣金原料藥300-400重量份用AB_8大孔樹脂色譜分離,即色譜分離I,乙醇-水混合溶劑25:75,35:65, 45:55, 65:35梯度洗脫,每個梯度沖到無顏色即可,合并各流份得25%,35%,45%,65%,共四個部位;色譜I得到的35%部位用ODS反相中壓色譜分離,即色譜分離II,用乙醇-水,條件為8%等度30min,8-30%梯度200min洗脫,按照色譜圖出峰順序,分份收集,每100-150體積份收集一份,共收集40-50個流份,高效液相色譜檢識后合并相同