用于治療癌癥的抗adam28抗體的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及抗人ADAM28抗體及其藥物用途。
【背景技術】
[0002] ADAM蛋白（解聯蛋白和金屬蛋白酶）是參與跨膜蛋白的胞外結構域脫落、細胞粘 附和浸潤的多功能蛋白（非專利文獻1，2)。人基因組含有25種ADAM，其包括四種假基因 和21種ADAM，所述21種ADAM由表現出蛋白水解活性的13種蛋白水解性ADAM和八種非 蛋白水解性ADAM構成（非專利文獻1，3)。蛋白水解性ADAM共享基質金屬蛋白酶（MMP) 的金屬蛋白酶結構域，且典型的蛋白水解性ADAM蛋白包含肽原、金屬蛋白酶、解聯蛋白樣 (disintegrin-like)、富含半胱氨酸、表皮生長因子樣、跨膜和細胞質結構域（非專利文 獻 3-9 )。許多蛋白水解性 ADAM，包括 ADAM8、ADAM9、ADAM12、ADAM15、ADAM17、ADAM19 和 ADAM28,在人癌癥中過表達，且與腫瘤生長和進展相關（非專利文獻5，9)。本發明人的先 前研宄已經表明，ADAM28 (也稱為ADAM金屬肽酶結構域28)(其具有兩種替代亞型，包括原 型膜錨定形式（ADAM28m)和短分泌形式（ADAM28)(非專利文獻5，10，11))在人非小細胞 肺癌和乳腺癌中大量表達（非專利文獻12，13)。通過原位雜交和免疫組織化學，本發明人 已經表明，ADAM28主要在癌組織中含有的癌細胞中表達，并且ADAM28的mRNA表達水平與乳 腺癌的細胞增殖（非專利文獻13)且與非小細胞肺癌中的癌細胞增殖和浸潤（非專利文獻 12)相關。在平行研宄中，本發明人顯示，非小細胞肺癌患者中的血清ADAM27水平基本上隨 著腫瘤、淋巴結轉移和癌癥復發的進展而增加（非專利文獻14)。這些數據暗示，ADAM28參 與特別是人癌癥中的細胞增殖和轉移。本發明人已經表明，ADAM28通過選擇性消化IGF-I/ IGFBP-3復合物的IGF-結合蛋白-3 (IGFBP-3)經由胰島素樣生長因子-I (IGF-I)的增強 的生物利用度而有助于癌細胞增殖（非專利文獻13)，并且通過消化乳腺癌中的結締組織 生長因子有助于血管生成（非專利文獻15)。
[0003] 噬菌體展示方法是已經通過在功能肽或蛋白和編碼其的DNA之間以噬菌體顆粒 的形式形成--對應而實現體外高速選擇的展示技術之一。這種噬菌體展示方法已經被 應用于抗體選擇，并且通過該方法獲得的許多抗體已經被開發作為藥物（非專利文獻16)。 此外，也已經建立了通過組合人人工抗體文庫和噬菌體展示方法而獲得特異性抗體的方 法，而此類方法已經由多個公司實施，如MorphoSys的HuCAL (人組合抗體文庫（Human Combinatorial Antibody Library))所證明。
[0004] [文獻列表]
[非專利文獻] 非專利文獻 I: Mol Aspects Med 2008; 29 (5): 258-289 非專利文獻 2: Semin Cell Dev Biol. 2009; 20 (2): 138-145 非專利文獻 3: Pathol Int. 2010; 60 (7): 477-496 非專利文獻 4: Genes Dev. 2003; 17 (1): 7-30 非專利文獻 5: Cancer Sci. 2007; 98 (5): 621-628 非專利文獻 6: Nat Rev Mol Cell Biol. 2005; 6 (1): 32-43 非專利文獻 7: Kelley's Textbook of Rheumatology. 8th ed. Philadelphia, PA: Elsevier Saunders; 2009: 115-134 非專利文獻 8: Curr Opin Cell Biol. 2003; 15 (5): 598-606 非專利文獻 9: Nat Rev Cancer. 2008; 8 (12): 929-941 非專利文獻 10: JBiol Chem. 1999; 274 (41): 29251-29259 非專利文獻 11: CurrPharmDes. 2009; 15 (20): 2349-2358 非專利文獻 12: Int J Cancer. 2006; 118 (2): 263-273 非專利文獻 13: Cancer Res. 2006; 66 (20): 9913-9920 非專利文獻 14: Int J Cancer. 2010; 127 (8): 1844-1856 非專利文獻 15: Biochem Biophys Res Commun. 2010; 402 (4): 651-657 非專利文獻 16: Rothe, C. etal. J. Mol. Biol. 2008; 376:1182-1200。
[0005] 發明概述 本發明待解決的問題 本發明的一個目標是提供可用于預防或治療癌癥或抑制癌癥轉移的抗人ADAM28抗 體。
[0006] 解決問題的方法 為了解決上述問題，本發明人已經制備結合人ADAM28的多種抗ADAM28抗體。作為結 果，他們已經發現，一些制備的抗人ADAM28抗體抑制ADAM28的酶活性，并且顯示對癌細胞 增殖的優異的抑制作用，和在體內模型中對癌轉移的抑制作用。基于上述發現，他們已經進 行了進一步研宄，并且完成了本發明。
[0007] 因此，本發明涉及以下內容。
[0008] [1]特異性結合人ADAM28且具有抑制人ADAM28的酶活性的活性的抗體。
[0009] [2] [1]的抗體，其在包含SEQ ID NO: 21、22或23顯示的氨基酸序列的表位處結 合人 ADAM28。
[0010] [3] [1]的抗體，其包含輕鏈可變區和重鏈可變區，其中 (1) 所述輕鏈可變區含有包含SEQ ID NO: 5中顯示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 6中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 7中顯示的氨基酸序列的⑶R3,并 且 所述重鏈可變區含有包含SEQ ID NO: 8中顯示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 9中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 10中顯示的氨基酸序列的⑶R3 ; (2) 所述輕鏈可變區含有包含SEQ ID NO: 5中顯示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 6中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 7中顯示的氨基酸序列的⑶R3,并 且 所述重鏈可變區含有包含SEQ ID NO: 8中顯示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 9中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 10中顯示的氨基酸序列的⑶R3， 并且在選自SEQ ID NO: 5、6和7中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取代、 缺失、插入和/或添加1至3個氨基酸，和/或 在選自SEQ ID NO: 8、9和10中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取代、缺 失、插入和/或添加1至3個氨基酸； (3) 所述輕鏈可變區含有包含SEQ ID NO: 11中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 12中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 13中顯示的氨基酸序列的 CDR3,并且 所述重鏈可變區含有包含SEQ ID NO: 14中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16中顯示的氨基酸序列的⑶R3; 或 (4) 所述輕鏈可變區含有包含SEQ ID NO: 11中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 12中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 13中顯示的氨基酸序列的 CDR3,并且 所述重鏈可變區含有包含SEQ ID NO: 14中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16中顯示的氨基酸序列的⑶R3， 并且在選自SEQ ID NO: 11、12和13中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取 代、缺失、插入和/或添加1至3個氨基酸，和/或 在選自SEQ ID NO: 14、15和16中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取代、 缺失、插入和/或添加1至3個氨基酸； (5) 所述輕鏈可變區含有包含SEQ ID NO: 24中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 25中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 26中顯示的氨基酸序列的 CDR3,并且 所述重鏈可變區含有包含SEQ ID NO: 27中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 28中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 29中顯示的氨基酸序列的⑶R3; 或 (6) 所述輕鏈可變區含有包含SEQ ID NO: 24中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 25中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 26中顯示的氨基酸序列的 CDR3,并且 所述重鏈可變區含有包含SEQ ID NO: 27中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 28中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 29中顯示的氨基酸序列的⑶R3， 并且在選自SEQ ID NO: 24、25和26中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取 代、缺失、插入和/或添加1至3個氨基酸，和/或 在選自SEQ ID NO: 27、28和29中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取代、 缺失、插入和/或添加1至3個氨基酸。
[0011] [4] [3]的抗體，其中 (1'）所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 17中顯示的氨基酸序列，并且所述重鏈可變區 包含SEQ ID NO: 18中顯示的氨基酸序列； (3'）所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 19中顯示的氨基酸序列，并且所述重鏈可變區 包含SEQ ID NO: 20中顯示的氨基酸序列；或 (5'）所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 30中顯示的氨基酸序列，并且所述重鏈可變區 包含SEQ ID NO: 31中顯示的氨基酸序列。
[0012] [5]藥物組合物，其包含[1] - [4]中任一項的抗體。
[0013] [6]用于預防或治療癌癥的藥劑，其包含[1] - [4]中任一項的抗體。
[0014] [7]癌轉移抑制劑，其包含[1] - [4]中任一項的抗體。
[0015] [8]預防或治療哺乳動物中的癌癥的方法，其包括將有效量的[1] - [4]中任一 項的抗體施用于所述哺乳動物。
[0016] [9] [8]的方法，其中所述哺乳動物是人。
[0017] [10]抑制哺乳動物中的癌轉移的方法，其包括將有效量的[1] - [4]中任一項的 抗體施用于所述哺乳動物。
[0018] [11] [10]的方法，其中所述哺乳動物是人。
[0019] [12] [1] - [4]中任一項的抗體，其用于預防或治療癌癥。
[0020] [13] [1] - [4]中任一項的抗體，其用于抑制癌轉移。
[0021] [14] [1] - [4]中任一項的抗體用于產生用于預防或治療癌癥的藥劑的用途。
[0022] [15] [1] - [4]中任一項的抗體用于產生癌轉移抑制劑的用途。
[0023] [16]多核苷酸，其編碼[1] - [4]中任一項的抗體。
[0024] [17]載體，其包含[16]的多核苷酸。
[0025] [18]轉化體，其包含[17]的載體。
[0026] 發明效果 根據本發明，提供了可用于預防或治療癌癥或抑制癌癥轉移的抗人ADAM28抗體。
[0027] 附圖簡述 圖1顯示抗人ADAM28抗體的酶活性抑制作用。
[0028] 圖2顯示抗人ADAM28抗體的體外癌細胞增殖抑制作用。
[0029] 圖3顯示抗人ADAM28抗體的體內癌細胞增殖抑制作用。
[0030] 圖4顯示抗人ADAM28抗體的體內癌細胞轉移抑制作用。
[0031] 圖5顯示抗人ADAM28抗體的體內癌細胞轉移抑制作用。
[0032] 實施方案的描述 本發明提供了具有對人ADAM28特異性結合活性和抑制人ADAM28的酶活性的活性的抗 體。
[0033] ADAM28是已知蛋白，并且其氨基酸序列和其cDNA序列也是已知的。ADAM28包括兩 種原型膜錨定形式（ADAM28m)和短分泌形式（ADAM28S)，這兩者都涵蓋在本發明的ADAM28 中。人ADAM28m的代表性氨基酸序列顯示于SEQ ID NO: 2,人ADAM28m的代表性cDNA序列 顯示于SEQ ID NO: 1，人ADAM28s的代表性氨基酸序列顯示于SEQ ID NO: 4,且人ADAM28s 的代表性cDNA序列顯示于SEQ ID NO: 3。
[0034] 本發明的抗體具有對人ADAM28的特異性結合活性。
[0035] "人ADAM28"意指ADAM28的氨基酸序列或核酸序列具有與人中天然表達的ADAM28 的氨基酸序列或核苷酸序列相同或基本上相同的氨基酸序列或核酸序列。"基本上相同"意 指目標氨基酸序列或核酸序列與