與該參考序列相同性。換言之，為獲得 與參考氨基酸序列具有至少85%、較佳地90%、甚至更佳地95%序列相同性之給定多肽序 列，該參考序列中至多15%、較佳地至多10%、甚至更佳地至多5%的氨基酸殘基可能缺失 或經另一氨基酸取代，或該參考序列中氨基酸殘基總數之至多15%、較佳地至多10%、甚 至更佳地至多5%數量之氨基酸可能插入該參考序列中。參考序列之該等改變可發生在參 考氨基酸序列之氨基或羧基末端位置或在那些末端位置之間之任何位置，其系單獨散布在 參考序列殘基中之各殘基之間或散布于參考序列內之一或多個鄰接基團中。較佳地，不相 同之殘基位置系因保守氨基酸取代而不同。然而，當確定序列相同性時，保守取代并不作為 匹配包括在內。
[0087] 本文所用"序列同源性"涉及確定兩個序列之相關性之方法。為確定序列同源性， 將兩個或更多個序列進行最佳比對，并視需要引入空位。然而，與"序列相同性"相比，當 確定序列同源性時保守氨基酸取代亦作為匹配計數。換言之，為獲得與參考序列具有95% 序列同源性之多肽，參考序列中85%、較佳地90%、甚至更佳地95%氨基酸殘基必須匹配 或包含經另一氨基酸之保守取代，或參考序列中總氨基酸殘基（不包括保守取代）之至多 15%、較佳地至多10%、甚至更佳地至多5%數量之氨基酸可能插入參考序列中。較佳地， 同源性序列包含至少50個、甚至更佳100個、甚至更佳250個、甚至更佳500個編碼同源性 氨基酸之核苷酸之片段。
[0088] "保守取代"系指一氨基酸殘基經另一具有相似特性或性質（包括大小、疏水性 等）之氨基酸殘基取代，以使得整體功能性不發生顯著變化。其亦可意指達成保守氨基酸 取代之核苷酸取代。
[0089] B.裁劑分子
[0090] 可與本發明之PPV5B蛋白或肽綴合或共價連接之載劑分子較佳系上文所述 之那些。用于動物用途之較佳載劑系牛血清白蛋白及鑰孔血藍蛋白（Keyhole Limpet Hemocyanin)。較佳地，載劑蛋白自身系免疫原。
[0091] 可通過任一業內已知習用方法將本發明之PPV5B蛋白或肽共價偶合至載 劑。盡管使用對稱連接體（例如己二酸二酰肼，如Schneerson等人，J. Experimental Medicine, 152, 361-376(1980)所述）或異雙官能連接體（例如3-(2-吡啶基二硫基） 丙酸 N-瑭泊酰亞胺醋，如 Fattom 等人，Infection and Immunity, 56, 2292-2298(19) 所述）系在本發明范圍內，但較佳避免使用任一連接體，取而代之，將本發明之 PPV5B肽直接偶合至載劑分子。該偶合可藉助還原胺化來達成，如Landi等人， J. Immunology, 127, 1011-1019(1981)所述。
[0092] 免疫原性組合物之大小（如由平均分子量定義）系可變的且取決于所選PPV5B蛋 白或肽及PPV5B蛋白或肽與載劑之偶合方法。因此，其可小至1，000道爾頓（103)或大于IO6道爾頓。在還原胺化偶合方法情況下，PPV5B蛋白或肽之分子量通常系在5, 000至500, 000 范圍內或更大；例如，對于SEQ ID N0:4之衣殼蛋白，預計分子量為約101，000道爾頓，預計 其形成由60個單體蛋白質組成之類病毒粒子（VLP)。
[0093] 特異性結合本發明之PPV5B蛋白或肽之載劑分子（即肽、其衍生物及類 似物、及肽模擬物）可通過業內已知各種方法來制造，包括但不限于固相合成或通 過溶液法（Nakanishi 等人，1993, Gene 137:51-56 ;Merrifield，1963, J. Am. Chem. Soc. 15:2149-2154 ;Neurath, Η·等人編輯，The Proteins，第 II 卷，第 3 版，第 105 頁至第 237頁，Academic Press, New York, Ν·Υ· (1976)，其以全文引用方式并入本文中）。
[0094] 本發明之PPV5B蛋白或肽或本發明之其抗體或結合部分可通過與醫藥或獸醫載 劑溶解或懸浮于稀釋劑中以可注射劑量施用。該等分子之安全性及功效系如獸醫生物制劑 中心（Center for Veterinary Biologies, CVB)所闡述并規定在細胞培養物或實驗動物中 通過標準程序來測定。該等分子之毒性及治療功效可在細胞培養物或實驗動物中通過標準 醫藥程序來測定，例如測定LD5tl (使群體50%致死之劑量）。
[0095] 本發明疫苗可為多價或單價。多價疫苗系由多種PPV5B蛋白或肽與載劑分子之免 疫綴合物制成。
[0096] 在一方面中，PPV5B蛋白或肽組合物包含有效免疫量之免疫原性綴合物，較佳地與 免疫刺激劑組合；及生理學上可接受之媒劑。在本發明背景下使用之"免疫刺激劑"意欲涵 蓋任一能夠增強免疫系統之活性之化合物或組合物，不論其系與特異性抗原組合對免疫反 應之一或多個要素之活性產生特異性增強作用，或僅獨立對免疫反應之一或多個要素之活 性發揮作用。免疫刺激劑化合物包括但不限于礦物凝膠，例如，氫氧化鋁；表面活性物質，例 如溶血卵磷脂、普流尼克多元醇；聚陰離子；肽；油乳液；明礬及MDP。使用該等材料之方法 為業內已知，且確定給定疫苗刺激物之最佳量完全在技術人員之能力范圍內。在給定制劑 中可使用一種以上免疫刺激劑。亦可將免疫原納入脂質粒中或綴合至多糖及/或其它用于 疫苗制劑中之聚合物。
[0097] 該等組合物視需要可存于可含有一或多種含有該活性成份之單位劑型之包裝或 分配器裝置中。包裝可包含例如金屬或塑料箔，例如泡罩包裝。包裝或分配器裝置可附帶 較佳用于施用哺乳動物、尤其豬之施用說明書。
[0098] C.佐劑
[0099] 為進一步增加由此提供且含有一或多種PPV5B蛋白或肽之免疫原性組合物之免 疫原性，該組合物亦可包含一或多種佐劑。
[0100] 佐劑可通過任一先前所述或業內已知技術純化。較佳純化技術系硅膠 層析，具體而言，"急驟"（快速）層析技術，如W. Clark Still等人，J. Organic Chemistry, 43, 2923-2925 (1978)所述。然而，可使用其它層析方法（包括HPLC)來純化佐 劑。結晶亦可用于純化佐劑。在一些情形下，因自合成直接獲得分析純產物而無需純化。 [0101] 本發明疫苗組合物系根據已知用以制造佐劑化組合物之技術在適當無菌條件下 通過將佐劑與PPV5B蛋白或肽進行物理混合來制備。因綴合物上存在可被靜電吸引至存于 長鏈烷基化合物佐劑上之正電荷之凈負電荷而促進PPV5B蛋白或肽與佐劑復合。
[0102] D.牛理學h可接#之媒劑
[0103] 可使用與用于其它醫藥多肽組合物之技術相似之技術調配本發明疫苗組合物。因 此，佐劑及PPV5B蛋白或肽（較佳綴合至載劑分子及/或與佐劑混合）可以凍干形式儲存且 在施用前在生理學上可接受之媒劑中重構以形成懸浮液。另一選擇為，可將佐劑及綴合物 儲存于媒劑中。較佳媒劑系無菌溶液，具體而言，無菌緩沖溶液，例如磷酸鹽緩沖鹽水。任一 將佐劑及綴合物組合于媒劑中以達成免疫原性組合物改良之免疫效力的方法皆系適當的。
[0104] 本發明疫苗之單一劑量體積可變化，但通常將在習用疫苗之常用范圍內。在上文 所說明綴合物及佐劑之濃度下，單一劑量之體積較佳介于約0.1 ml與約3ml之間，較佳地介 于約0. 2ml與約I. 5ml之間，更佳地約I. 0ml。
[0105] 本發明疫苗組合物可通過任何習用方式施用。
[0106] E.制劑
[0107] 包含偶合至載劑分子之PPV5B蛋白或肽之免疫原性綴合物可用作對抗一或多種 PPV5B血清型之免疫用疫苗。包含該免疫原性綴合物于生理學上可接受之媒劑中之疫苗可 用于免疫動物、較佳地豬以治療或預防PPV5B之感染之方法中。
[0108] 利用免疫原性綴合物經免疫產生之對抗本發明免疫原性綴合物之抗體可用于被 動免疫療法及產生用于治療或預防PPV5B感染之抗獨特型抗體。
[0109] 施用組合物之對象較佳系動物，包括但不限于母牛、馬、綿羊、豬、家禽（例如， 雞）、山羊、貓、犬、倉鼠、小鼠及大鼠；最佳系豬。
[0110] 本發明制劑包含有效免疫量之一或多種免疫原性組合物或對其之抗體及生理學 上可接受之媒劑。疫苗包含有效免疫量之一或多種免疫原性組合物及生理學上可接受之媒 劑。該制劑應適合施用模式。
[0111] 免疫原性組合物視需要亦可含有少量潤濕劑或乳化劑、或pH緩沖劑。免疫原性組 合物可為液體溶液、懸浮液、乳液、錠劑、丸劑、膠囊、持續釋放制劑或粉末。口服制劑可包括 標準載劑，例如醫藥級甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。
[0112] F.有效劑量
[0113] 本文所述化合物可以治療有效劑量施用對象以治療PPV5B相關疾病。劑量將取決 于接受疫苗之宿主以及諸如宿主之體型、體重及年齡等因素。
[0114] 用于制劑中之本發明之免疫原性綴合物或抗體之精確量將取決于施用途徑及對 象性質（例如，物種、年齡、大小、疾病之階段/程度），且應根據醫師之判斷及每一對象之情 況根據標準臨床技術決定。有效免疫量即足以治療或預防對象之PPV5B傳染性疾病之量。 有效劑量亦可自源自動物模型測試系統之劑量-反應曲線外推且可自〇. lmg/kg至20mg/ kg、較佳地lmg/kg至10mg/kg變化。
[0115] 組合物之免疫原性可通過利用任一業內已知免疫分析監測測試對象在用該組合 物免疫后之免疫反應來測定。體液（抗體）反應及/或細胞介導之免疫性之產生可視為免 疫反應之指示。測試對象可包括動物，例如豬、小鼠、倉鼠、犬、貓、兔、母牛、馬、綿羊及家禽 (例如雞、鴨、鵝及火雞）。
[0116] 測試對象之免疫反應可通過諸如以下各種方法來分析：所得免疫血清對該免疫原 性綴合物之反應性，如通過（例如）酶聯免疫吸附分析（ELISA)、免疫印跡、免疫沉淀等已知 技術來分析；或保護經免疫宿主免于感染該病原體及/或減輕經免疫宿主中由感染該病原 體導致之癥狀，如通過任一業內已知用于分析傳染性致病因子之含量之方法（例如，定量 PCR、病毒分離或其它業內已知技術）來測定。該傳染性致病因子之含量亦可通過量測該免 疫球蛋白所針對之抗原之量來測定。該傳染性致病因子之量降低或該傳染性疾病之癥狀改 善指示該組合物有效。
[0117] 可于在體內用于動物之前在體外測試本發明治療劑之預期治療或預防活性。例 如，可用于確定指示是否施用具體治療劑之體外分析包括體外細胞培養分析，其中將來自 細胞系或自患有特定疾病或病癥之對象培養之細胞之適當細胞暴露于或經其它方式施用 治療劑，并觀察該治療劑對細胞之影響。
[0118] 另一選擇為，可通過以下方式來分析該治療劑：使該治療劑接觸易患由該傳染 性致病因子導致之感染但感染該傳染性致病因子之細胞（自對象培養或來自經培養細胞 系），將該等細胞暴露于該傳染性致病因子，且然后確定與該治療劑接觸之細胞之感染率是 否低于未與該治療劑接觸之細胞之感染率。可通過任一業內已知方法來分析傳染性致病因 子對細胞之感染。
[0119] 另外，可通過在療法之前、期間或之后以適宜時間間隔在動物模型對象中量測抗 體所針對之分子之量來評價該治療劑。可鑒定出該分子之量之任何變化或無變化并與該治 療對對象之影響關聯。可通過任一業內已知方法來測定該分子之量。
[0120] 在使用本發明之方法及組合物對動物接種PPV5B后，可使用任一業內已知結合分 析來評估所得抗體與特定分子間之結合。亦可實施該等分析來選擇對特定抗原展示更高親 和性或特異性之抗體。
[0121] G.檢測及診斷方法
[0122] 本發明之抗體或其結合部分（利用天然PPV5B得到）、減毒病毒、蛋白質或肽可用 于檢測樣品中PPV5B之存在。此檢測方法包含以下步驟：提供對抗本發明之天然PPV5B、減 毒病毒、蛋白質或肽而產生之經分離抗體或其結合部分，向該經分離抗體或其結合部分中 添加疑似含有一定量PPV5B病毒之樣品，及檢測包含與PPV5B病毒結合之該經分離抗體或 其結合部分之復合物之存在。
[0123] 本發明之抗體或其結合部分亦可用于檢測樣品中PPV5B蛋白或肽之存在。此檢測 方法包含以下步驟：提供對抗天然PPV5B、減毒病毒、蛋白質或肽而產生之經分離抗體或其 結合部分，向該經分離抗體或其結合部分中添加疑似含有一定量PPV5B蛋白或肽之樣品， 及檢測包含與該PPV5B蛋白或肽結合之該經分離抗體或其結合部分之復合物之存在。
[0124] 結合作為結合對成員之特異性分子之免疫球蛋白、尤其抗體（及其功能性活性片 段）可用作診斷學及預測學，如本文所述。在各實施例中，本發明提供結合對成員之量測 值，并將該等量測值用于臨床應用中。本發明中之免疫球蛋白可用于例如檢測生物樣品中 之抗原，藉此可測試對象之與免疫球蛋白結合之分子之偏離量及/或該等分子之異常形式 之存在。"偏離量"意指在來自身體某一部分或來自未患該疾病之對象之類似樣品中相對于 當前值或代表當前值之標準量增加或減小。本發明抗體亦可作為試劑包括在用于診斷或預 后技術之試劑盒中。
[0125] 在一方面中，與天然PPV5B或減毒病毒、蛋白質或肽免疫特異性結合之本發明抗 體可用于診斷、預測或篩選PPV5B感染。
[0126] 在另一方面中，本發明提供診斷或篩選PPV5B感染或對其之免疫性之存在之方 法，其包含在對象中量測抗體與來源于該對象之樣品之免疫特異性結合之程度，其中該抗 體免疫特異性結合PPV5B蛋白或肽，其中該免疫特異性結合之程度相對于來自不具有該傳 染性致病因子之對象之類似樣品中之該免疫特異性結合之程度增加指示PPV5B之存在。
[0127] 適于檢測PPV5B肽或其拮抗劑之存在之分析之實例包括但不限于ELISA、放射免 疫分析、凝膠擴散沉淀反應分析、免疫擴散分析、凝集分析、熒光免疫分析、蛋白A免疫分析 或免疫電泳分析。
[0128] 用于特定分子之免疫分析將通常包含在以可檢測方式標記之抗體存在下培育樣 品（例如生物流體、組織提取物、剛剛收獲之細胞或經培養細胞之裂解物）及通過業內熟知 多種技術中之任一者檢測該經結合抗體。
[0129] 可根據熟知方法來測定給定抗體之結合活性。熟習此項技術者通過采用常規實驗