一種從肉蓯蓉中分級分離多糖的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生化分離技術領域，具體涉及一種從肉蓯蓉中分級分離多糖的方法。
【背景技術】
[0002]肉灰蓉是一種列當科(Orobanchaceae)肉灰蓉屬(CistancheHoffmg.et Link)的多年寄生性植物，專性寄生于梭梭類植物的根部，全球有二十余種。中國境內共有4種I變種，主要分布于內蒙古、寧夏、甘肅、青海以及新疆等地。肉蓯蓉始載于《神農本草經》，歷代藥書對其均有詳盡記載，長久以來被列為上品藥材，又名大蕓、甜大蕓、蓯蓉、甜蓯蓉和地精等，具有溫補腎陽、益精補氣和潤腸通便等功效，在臨床上廣泛用于治療腎陽不足、陽瘺不孕、精血虧虛、筋骨無力、腰膝酸軟和腸燥便秘。我國內蒙古西部為主產區的荒漠肉蓯蓉及管花肉蓯蓉為中藥肉蓯蓉正品。
[0003]肉蓯蓉的化學成分非常復雜，含量最多的為糖類。糖類包括不同聚合度的多糖和低聚糖，以及不同的單糖和雙糖。肉蓯蓉多糖及低聚糖類具有提高免疫力、潤腸通便和治療II型糖尿病等功效。
[0004]CN 104262414 A公開了一種從肉蓯蓉中同時制備苯乙醇苷、甘露醇、低聚糖漿及多糖的方法，包括如下步驟:采用乙醇水溶液提取肉蓯蓉中的單糖、低聚糖及苯乙醇苷，然后大孔吸附樹脂柱分離苯乙醇苷類和糖類，洗脫得到的苯乙醇苷溶液經濃縮干燥成產品，糖類經減壓濃縮，常溫析晶，分離低聚糖類和甘露醇，甘露醇重結晶得高純度甘露醇，離心清液為低聚糖漿。殘渣采用純水提取多糖，醇沉收集多糖。
[0005]CN 101870742 B發明了一種肉蓯蓉多糖的分離提純方法，將肉蓯蓉洗凈烘干后粉碎，分別用石油醚和乙醇浸泡并超聲處理，以脫除脂肪等成分，過濾后殘渣用蒸餾水浸泡并置于冰箱中冷凍，取出后微波處理使之迅速融化，濾液即為肉蓯蓉多糖提取液；讓此提取液常壓通過大孔吸附樹脂柱，減壓濃縮，醇沉，冷凍干燥，再依次用丙酮、無水乙醚和無水乙醇洗滌，即可得到純凈的肉蓯蓉多糖。
[0006]可以看出，在現有技術中，由于肉蓯蓉中大分子量的多糖與小分子量的多糖裹攜在一起沉淀，導致分級分離不徹底，產品分子量不集中，理化性質不一致，生物活性不穩定；另外，肉蓯蓉多糖的醇沉過程要耗費數量驚人的乙醇，而乙醇的貯存和回收耗時耗能，也給肉蓯蓉多糖的產業化帶來不便。
【發明內容】
[0007]本發明的目的在于提供一種從肉蓯蓉中分級分離多糖的方法，其能簡單快速地制備不同分子聚合度的多糖。
[0008]為達到以上目的，本發明采用如下技術方案:
[0009]本發明提供一種從肉蓯蓉中分級分離多糖的方法，包括如下步驟:
[0010](I)取肉蓯蓉肉質莖，粉碎，用乙醇溶液進行預處理，向得到的濾渣中加入純化水，固液分離，得到清液I和濾渣II ;所述清液I中含有可溶性肉蓯蓉多糖；
[0011](2)用微濾膜過濾清液I，得到透過液；
[0012](3)依次采用截留分子量為十萬級的超濾膜、截留分子量為萬級的超濾膜、截留分子量為千級的超濾膜以及截留分子量為百級的納濾膜過濾透過液，得到不同分子量的可溶性多糖產品。
[0013]優選地，步驟(3)為:
[0014](a)用截留分子量為十萬級的超濾膜過濾透過液，得到截留液IV和透過液V ;
[0015](b)用截留分子量為萬級的超濾膜過濾透過液V，得到截留液VI和透過液VII ;
[0016](c)用截留分子量為千級的超濾膜過濾透過液VII，得到截留液VIII和透過液IX；
[0017](d)用截留分子量為百級的納濾膜過濾透過液IX，得到截留液X和透過液XI ;
[0018](e)將截留液IV、截留液V1、截留液VIII和截留液X分別干燥，得到不同分子量的可溶性多糖產品。
[0019]在本發明中，使用不同截留分子量的超濾膜和/或納濾膜過濾，就會得到含有相應截留分子量的多糖成分(例如，用截留分子量為十萬級的超濾膜過濾，截留液中的可溶性多糖產品分子量即為十萬級)。經測定，截留液IV干燥得到的可溶性多糖的平均分子量為150kDa以上，截留液VI干燥得到的可溶性多糖的平均分子量為1kDa左右，截留液VIII干燥得到的可溶性多糖的平均分子量為2kDa左右，截留液X干燥得到的可溶性多糖的平均分子量為200Da左右。
[0020]用乙醇溶液進行預處理，可以除去肉蓯蓉中含有的苯乙醇苷、小分子多糖以及其他醇溶性物質；而經過固液分離后獲得含有豐富可溶性多糖的水提液，這些肉蓯蓉中含有的可溶性多糖用純化水浸出。本發明采用不同截留分子量的膜過濾，依次將可溶性多糖進行分級分離，從而制備得到不同分子量的可溶性多糖產品。
[0021]優選地，所述肉蓯蓉為荒漠肉蓯蓉、管花肉蓯蓉、白花肉蓯蓉或沙蓯蓉的肉質莖中的一種或至少兩種的組合，例如可以是荒漠肉蓯蓉，管花肉蓯蓉，白花肉蓯蓉和沙蓯蓉肉質莖的組合，或荒漠肉蓯蓉、管花肉蓯蓉和沙蓯蓉肉質莖的組合。
[0022]優選地，所述肉蓯蓉粉碎至粒度為20-60目，例如可以是20目、22目、24目、26目、28目、30目、32目、34目、36目、38目、40目、42目、44目、46目、48目、50目、52目、54目、56目、58目或60目，優選為40目。
[0023]優選地，所述乙醇溶液中，乙醇的體積百分比為40-100 %，例如可以是40 %、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 100%，優選為 70-90%。
[0024]優選地，所述乙醇溶液以L為單位，肉灰蓉以kg為單位，二者的液固比為(10-30):1，例如可以是 10:1、12:1、14:1、15:1、16:1、18:1、20:1、22:1、24:1、26:1、28:1 或 30:1，優選為15:1ο
[0025]優選地，所述乙醇溶液預處理的溫度為20-80 °C，例如可以是20 °C、25 V、30 °C、35 °C、40 °C、45 °C、50 °C、55 °C、60 °C、65 °C、70 °C、75 °C 或 80 °C，優選為 50-70 V，更優選為60。。。
[0026]優選地，所述乙醇溶液預處理的時間為30-90min，例如可以是30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min、65min、70min、75min、80min、85min 或 90min，優選為60mino
[0027]優選地，步驟⑴為加熱純化水，然后固液分離，得到清液I和濾渣II。在本發明中，可以將含有濾渣的純化水分為若干份進行分離，以保證過濾的效果，然后將清液合并，最終得到清液I。
[0028]優選地，所述固液分離為三步法，純化水與肉蓯蓉的液固比分步遞減，所述純化水以L為單位，肉蓯蓉以kg為單位，第一步的純化水與肉蓯蓉的液固比為(15-20):1(例如可以是 15:1、15.5:1、16:1、16.5:1、17:1、17.5:1、18:1、18.5:1、19:1、19.5:1 或 20:1)，第二步的純化水與肉蓯蓉的液固比為(8-10):1(例如可以是8:1、8.2:1、8.4:1、8.6:1、8.8:1、9:1、9.2:1、9.4:1、9.6:1、9.8:1或10:1)，第三步的純化水與肉蓯蓉的液固比為5:1。
[0029]優選地，所述純化水的溫度為20-100 °C，例如可以是20°C、25°C、30°C、35°C、40 °C、45 °C、50 °C、55 °C、60 °C、65 °C、70 °C、75 °C、80 °C、85 °C、90 °C、95 V 或 100 V，優選為60-90 °C，更優選為 80 °C。
[0030]優選地，所述三步法中后一步的純化水溫度高于或等于前一步的純化水溫度。
[0031]優選地，所述三步法的每一步中，純化水與肉蓯蓉的混合時間為30-180min，例如可以是 30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min、lOOmin、llOmin、120min、130min、140min、150min、160min、170min 或 180min，優選為 60_120min，更優選為 90min。
[0032]優選地，所述微濾膜為中空纖維微濾膜、螺旋卷式微濾膜或者陶瓷微濾膜。
[0033]優選地，所述微濾膜的孔徑為0.10 μ m-1.00 μ m，例如可以是0.ΙΟμπι,Ο.20 μ m,
0.30 μ m、0.40 μ m、0.50 μ m、0.60 μ m、0.70 μ m、0.80 μ m、0.90 μ m 或 1.00 μ m，優選為
0.22 μπι 或者 0.45 μπι。
[0034]優選地，所述截留分子量為十萬級的超濾膜為螺旋卷式超