[0031] 更進一步地,所述藥物或試劑中半胱胺濃度為10-200mM,LIF濃度為102-2X103 IU/mL,Y27632 濃度為 1-20mM。
[0032] 所述創傷性皮膚缺損包括由燒傷、刀傷、槍傷或其他原因等造成的皮膚缺損;所述 皮膚潰瘍包括病理性潰瘍和生理性潰瘍。
[0033] 本發明提供了一種化妝品或者化妝品輔助添加劑,包含上述技術方案中任一所述 的組合物。
[0034] 進一步地,化妝品或者化妝品輔助添加劑中半胱胺濃度為50-500mM,LIF濃度為 50-5X103IU/mL,Y27632 濃度為 0.5-50mM。
[0035] 進一步地,所述化妝品為面膜,所述面膜包括用于涂抹于面部的涂抹物,所述組合 物應用于所述涂抹物的制備。
[0036] 進一步地,所述化妝品為面膜,所述面膜包括由蠶絲或棉制成的貼敷物,以及用于 浸潤所述貼敷物的基液,所述組合物應用于所述基液的制備。
[0037] 進一步地,所述化妝品為爽膚水、面霜或洗面乳。
[0038] 本發明提供的組合物對初級卵母細胞祖細胞進行了體外成熟的處理,高效地誘導 了處于GV期的祖細胞定向地完成減數分裂的過程,促使減數分裂中期II,即成熟的次級卵 母細胞比例的顯著增加。山羊為多胎動物,其初級卵母細胞是目前最難進行體外成熟的一 群祖細胞,其體外成熟的效率極低,由此導致體外受精胚胎的發育比例極低,經試驗證明, 我們采用半胱胺和LIF兩個因子的組合處理,獲得了 49. 4%的卵子體外成熟率,相較于對 照組的卵母細胞成熟率31. 2%提升了 58% ;采用三個因子的組合處理,獲得了高達63. 2%的 卵子體外成熟率,相較于對照組的卵母細胞成熟率提升了 102.6%。山羊的IVF受精卵向胚 胎發育的過程中,采用單一的半胱胺處理,極體的排放率為71. 3%,卵子分裂率為44. 6%,相 對于對照組分別提升了 28. 7%,52. 7% ;采用半胱胺和LIF兩個因子的組合處理,極體的排放 率為82. 5%,卵子的分裂率為53. 3%,胚胎發育到桑椹和囊胚的比率為8. 1%,相對于對照組 分別提升了 48. 9%,82. 5%,58. 8% ;采用三個因子組合處理,極體的排放率為84. 9%,卵子的 分裂率為69. 8%,胚胎發育到桑椹和囊胚的比率為14. 5%,相對于對照組分別提升了 53. 2%, 139. 0%,184. 3%。奶牛為單胎動物,經試驗證明,在其IVM和IVF的實驗中,半胱胺+LIF和半 胱胺+LIF+Y27632同樣協同性的促進體外成熟的卵母細胞經過IVF后發育成囊胚比例大 幅增加,從9. 6%顯著的提高到36. 0~39.1%。這些實驗結果表明本發明提供的組合物能夠 提高卵母細胞的體外成熟率,并提高受精卵向胚胎發育過程中卵子的分裂率、胚胎發育到 桑椹和囊胚的比率,進而大幅提升胚胎發育的比例。同時,經試驗證明,三個因子改變皮膚 細胞在體外培養條件下的生長模式,能夠有效抑制皮膚成體干細胞向成纖維細胞分化,保 證皮膚成體干細胞的自我更新與生長;在體內的條件下,可促進皮膚干細胞的增殖與再生, 而皮膚成體干細胞的再生保證了其向皮膚基底膜細胞與其他皮膚部位細胞類型的分化。這 種成體干細胞再生的特性可以促進自體皮膚成體干細胞和由自體皮膚成體干細胞所構造 的人造皮膚在臨床方面的應用。這對燒傷、創傷性皮膚的缺損,以及皮膚潰瘍的病人的康復 具有重要的意義。此外,經試驗證明,添加本發明上述組合物的化妝品能夠起到延遲皮膚衰 老、消除皺紋以及恢復皮膚的光亮與緊致的作用。
【附圖說明】
[0039] 圖1A為在含有半胱胺、小分子Y27632和LIF培養液中生長的山羊卵母細胞的顯 微圖像。
[0040] 圖1B為圖1A中山羊卵母細胞經透明質酸酶處理后變為光亮卵子的顯微圖像,在 透明帶與卵子的卵周隙之間排放第一極體。
[0041] 圖1C為圖1B中卵子經體外受精,卵子出現雌雄兩個原核的顯微圖像。
[0042] 圖1D為圖1C中卵子在體外培養下分裂成8細胞的顯微圖像。
[0043] 圖1E為圖1D中分裂細胞經過7. 5天培養發育成囊胚的顯微圖像。
[0044] 圖1F為圖1E中囊胚在熒光染色的條件下,顯為305正常的細胞核的顯微圖像。
[0045] 圖 1A、圖 1B、圖 1D、圖 1E和圖IFBar=150mm;圖 1CBar=70mm〇
[0046] 圖2A為在含有半胱胺、小分子Y27632和LIF培養液中生長的牛卵母細胞的顯微 圖像。
[0047] 圖2B為圖2A中牛卵母細胞培養22-24小時出現卵丘細胞的膨大的顯微圖像。
[0048] 圖2C為圖2B中牛卵母細胞經過體外受精,卵子在體外培養條件下44小時,分裂 成8細胞的顯微圖像。
[0049] 圖2D為圖2C中卵子在體外培養第七天發育成大量的囊胚的顯微圖像。
[0050] 圖 2A、2B、2C和 2DBar=160mm〇
[0051] 圖3為山羊卵母細胞在不同濃度的三個細胞因子作用下,見極體或成熟的次級卵 母細胞的比率分布圖。
[0052] 圖4為奶牛卵母細胞在不同濃度的三個細胞因子作用下,經IVF后,胚胎的囊胚發 育比率分布圖。
[0053] 圖5為在添加半胱胺、小分子Y27632和LIF的培養液中生長的兔皮膚組織的顯微 圖像。
[0054] 圖6為在添加半胱胺,小分子Y27632和LIF培養液中皮膚細胞的生長曲線圖。
[0055] 圖7A為在未添加半胱胺,小分子Y27632和LIF的對照組中皮膚成體干細胞的免 疫熒光檢測圖。
[0056] 圖7B為在添加半胱胺,小分子Y27632和LIF的處理組中皮膚成體干細胞的免疫 熒光檢測圖。
[0057] 圖8A為添加半胱胺,小分子Y27632和LIF的處理組中胚胎干細胞特定標記物 Nanog的免疫熒光檢測圖。
[0058] 圖8B為添加半胱胺,小分子Y27632和LIF的處理組中胚胎干細胞特定標記物 〇ct-4的免疫熒光檢測圖。
[0059] 圖8C為添加半胱胺,小分子Y27632和LIF的處理組中胚胎干細胞特定標記物 Klf-4的免疫熒光檢測圖。
[0060] 圖8D為添加半胱胺,小分子Y27632和LIF的處理組中胚胎干細胞特定標記物 SoX2的免疫熒光檢測圖。
[0061] 圖9A為兔面膜貼敷實驗中含有半胱胺,小分子Y27632和LIF的PBS處理組的皮 膚組織切片圖。
[0062] 圖9B為兔面膜貼敷實驗中未含有半胱胺,小分子Y27632和LIF的PBS對照組的 皮膚組織切片圖。
[0063] 圖10A為兔面膜貼敷實驗中未含有半胱胺,小分子Y27632和LIF的PBS對照組的 皮膚組織切片中皮膚成體干細胞特定標記物的免疫熒光檢測結果圖。
[0064] 圖10B為兔面膜貼敷實驗中含有半胱胺,小分子Y27632和LIF的PBS處理組的皮 膚組織切片中皮膚成體干細胞特定標記物的免疫熒光檢測結果圖。
【具體實施方式】
[0065] 實施例1 本實施例提供了一種用于卵母細胞以及皮膚干細胞培養的組合物,標號為LN01,其由 半胱胺和LIF構成,半胱胺與LIF的配比為lOOmmol:103IU。
[0066] 本實施例提供了一種用于卵母細胞以及皮膚干細胞培養的組合物,標號為LN011, 其由半胱胺和LIF構成,半胱胺與LIF的配比為lmmol:1000IU。
[0067] 本實施例提供了一種用于卵母細胞以及皮膚干細胞培養的組合物,標號為LN012, 其由半胱胺和LIF構成,半胱胺與LIF的配比為50. 5mmol:505IU。
[0068] 本實施例提供了一種用于卵母細胞以及皮膚干細胞培養的組合物,標號為LN014, 其由半胱胺和LIF構成,半胱胺與LIF的配比為lOOmmol:10IU。
[0069] 實施例2 本實施例提供了一種用于卵母細胞以及皮膚干細胞培養的組合物,標號為LN02,其由 半胱胺、1正和¥27632構成,半胱胺、1正和¥27632配比為100臟〇1:1031110臟〇1。
[0070] 本實施例提供了一種用于卵母細胞以及皮膚干細胞培養的組合物,標號為LN021, 其由半胱胺、LIF和Y27632構成,半胱胺、LIF和Y27632配比為lmmol: 10IU:10mmol。[0071] 本實施例提供了一種用于卵母細胞以及皮膚干細胞培養的組合物,標號為LN022, 其由半胱胺、LIF和Y27632構成,半胱胺、LIF和Y27632配比為50. 5mmol: 100IU: 0.lmmol〇
[0072] 本實施例提供了一種用于卵母細胞以及皮膚干細胞培養的組合物,標號為LN023, 其由半胱胺、LIF和Y27632構成,半胱胺、LIF和Y27632配比為lOOmmol: 505IU:5mmol。
[0073] 本實施例提供了一種用于卵母細胞以及皮膚干細胞培養的組合物,標號為LN024, 其由半胱胺、LIF和Y27632構成,半胱胺、LIF和Y27632配比為lmmol: 1000