改善（用黑色箭 頭標示）。給出每天的逐點95%置信帶。
[0087] 圖35.當在疾病早期給予時rHIgM12改善S化小鼠的水平和垂直兩種活動。在 45化i將5只S化小鼠3組放置在AccuScan活動監測箱中。在8天時間內收集基線測量。 在治療后，在8周內連接監測小鼠。組圖A、C、E和G相當于水平活動，B、D、F和H相當于垂 直活動。A、B)水平和垂直活動的原始未濾過記錄；C、D)作為每天的箱化ins)提供的平均 夜間活動；E、巧高斯濾波佑B = 2天）；和G、H)標準化Z值的6階多項式擬合顯示rHIgM12 治療組中水平和垂直兩種活動皆改善。對照IgM治療組和鹽水治療組顯示整個研究中運動 活動水平相似。給出每天的逐點95%置信帶。
[008引圖36.通過使用預測模型值在45化i進行3種治療的比較。在治療之前和之后每 天進行統計分析。A、C)與對照IgM治療和鹽水治療小鼠相比，治療后第13天（P = 0. 015) 和第9天（P = 0. 036)，rHIgM12治療小鼠的水平夜間活動分別顯著偏離。B、D)治療后第 14天（P = 0. 019)和第6天（P = 0. 037)，rHIgM12治療小鼠的垂直（直立）活動分別偏 離/改善。黑色箭頭表示開始顯著改善的日期。給出每天的逐點95%置信帶。
[0089] 圖37.正常未感染S化小鼠具有不受任何治療影響的高度可變的自發活動。將5 只未感染S化小鼠3組放入AccuScan活動監測箱。在8天時間內收集基線測量。在治療 后，在8周內連接監測小鼠。任何治療都不引起水平（A、C、E和G)或垂直炬、D、F和H)活 動改變。給出每天的逐點95%置信帶。
[0090] 圖38.單劑量的人抗體延長SOD1G86R突變型轉基因小鼠的存活。在55日齡時，小 鼠用單劑量的rHIgM12或PBS治療。一些小鼠則未治療。跟蹤小鼠直到溯死，然后處死用于 病理學。一些小鼠死于疾病。所有小鼠在死亡前都有極度的體重減輕。使用Kaplan-Meir 曲線繪制存活率，使用非參數Mantel-Cox檢驗確定統計顯著性。與PBS治療或未治療小鼠 相比，用rHIgM12治療的小鼠中存活率提高，P = 0. 008。所有分析和治療W不知情方式進 行，使得做出處死小鼠決定的研究人員不了解治療組。在該分析中研究了共45只小鼠。同 窩野生型S0D+/+小鼠具有正常的存活率且無體重減輕（數據未顯示）。
[0091] 圖39表示在50日齡時給予單次200 y g劑量的rHIgM12的小鼠與給予PBS的對 照小鼠中，G86R S0D1小鼠的體重減輕隨時間而變化。給予rHIgM12的小鼠顯示在單次抗 體注射后，在60天時間內較少體重減輕。
[0092] 圖40. S0D1G86R突變型轉基因小鼠中單劑量的人抗體減少脊髓軸突變性。在55日 齡時，小鼠用單次250 y g劑量的rHIgM12或PBS治療。一些小鼠則未治療。在位于胸正中 水平的脊髓中，統計變性軸突特有的髓磯脂螺環（whorl)的數目。與PBS治療（P = 0.003， T檢驗）和未治療小鼠相比，用rHIgM12治療的S0D1突變型小鼠的變性軸突數減少。注意， 與S0D1+/+突變體小鼠相比，野生型SOD-/-小鼠脊髓中的變性軸突數最少。在處死時，小 鼠用了；1〇1111口固定液（4%甲醒，0.1%戊二醒（肖111313拘1(161巧(16))灌注，將脊髓切成11111]1塊。 將骨髓塊包埋在Araldite塑料中，來自T6水平的1微米切片用對苯二胺染色W顯現髓磯 脂環繞（wrapping)。顯示野生型SOD-/-(右上）和S0D1+/+突變型（右下）的脊髓切片。
[0093] 圖41.單劑量的人抗體保護S0D1G86R突變型轉基因小鼠脊髓中的前角和后角神 經元兩者。在55日齡時，小鼠用rHIgM12或PBS治療。一些小鼠則未治療。在胸中正水平 處脊髓的石蠟切片中，統計用特異性標記神經元的抗NeuN抗體染色的前角和后角細胞數 目。rHIgM12治療小鼠中前角和后角細胞的數目比用PBS治療的小鼠或未治療小鼠顯著較 多（P = 0. 0025和P = 0. 018,通過T檢驗）。用rHgM12治療的SOD突變體小鼠的前角和 后角細胞的數目與野生型SOD-/-小鼠中觀察到的數目類似。
[0094] 圖42.重組人抗體rHIgM12與各物種的神經元結合。
[0095] 小鼠皮質神經元（A、B、C、D)、小鼠海馬神經元巧、巧和人皮質神經元佑、H)用 rHIgM12(A、C、E和G)活染，相同細胞用抗神經絲抗體炬、D)或0微管蛋白（F、G)共標記。 rHIgM12用帶巧光標簽的第二抗體檢測。
[00M] 發巧詳巧
[0097] 按照本發明，可采用技術人員所掌握的常規分子生物學、微生物學和重組DNA技 術。該類技術在文獻中有完整解釋。參見例如Sambrook等，"Molecular Cloning ;A Laboratory Manual"(1989) ；"Current Protocols in Molecular Biology"第 I-III 卷[Ausubel，R.M.主編（1994)] Cell Biology ;A L油oratory Hanclbook"第 I-III 卷 [J. E. Celis 主編（1994)) ] ; " Current Protocols in Immunology "第 I-III 卷[Coligan， J.E.主編（1994)] Oligonucleotide Synthesis" (M.J. Gait 主編.1984) Nucleic Acid Hybridization" [B. D. Hames 和 S. J. Higgins 主編（1985) ] ；"Transcription And Translation" [B.D.Hames 和 S.J. Higgins 主編（1984)] Animal Cell Qilture" [R. I. Rreshn巧主編（1986) ] ; " Immobilized Cells And Enzymes" [1化 Press, (1986)]; B.化rbal， " A Practical Guide To Molecular Cloning" (1984)。
[009引因此，下列術語如果在本文中出現，則將具有如下給出的定義。
[0099] A.術語
[0100] 術語"特異性結合成員"描述了彼此具有結合特異性的一對分子的成員。特異性 結合對的成員可W是天然來源的或者完全或部分合成產生的。該分子對的一個成員在其表 面上具有區域或腔，或其表面上具有組分，與分子對的另一個成員的特定空間和極性組構 特異性結合，因此與分子對的另一個成員的特定空間和極性組構互補。因此該對的成員具 有彼此特異性結合的性質。特異性結合對的類型的實例為抗原-抗體、生物素-抗生物素 蛋白、激素-激素受體、受體-配體、酶-底物。本申請設及抗原-抗體型反應。
[0101] 術語"抗體"描述了不管是天然的還是部分或完全合成產生的免疫球蛋白。該術 語還涵蓋具有結合結構域的任何多膚或蛋白質，所述結合結構域是抗體結合結構域或與抗 體結合結構域同源。該術語還考慮CDR移植抗體。"抗體"是任何免疫球蛋白，包括結合特 定表位的抗體及其片段。該術語包括多克隆、單克隆和嵌合抗體，最后提及的更詳細描述于 美國專利號4, 816, 397和4, 816, 567。該術語"抗體"包括野生型免疫球蛋白（Ig)分子，一 般包含4條全長多膚鏈，2條重（H)鏈和2條輕（L)鏈，或其等同的Ig同源物（例如只包 含重鏈的駱駝（camelid)納米抗體）；包括其保持Ig分子的基本表位結合特征的全長功能 性突變體、變體或衍生物，并且包括雙重特異性抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體和雙重 可變結構域抗體；免疫球蛋白分子可為任何類別（例如IgG、I班、IgM、I曲、IgA和I巧）或 亞類（例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)。還包括在術語"抗體"含義內的有任何 "抗體片段"。
[0102] "抗體片段"意指包含至少一個不是全長的多膚鏈的分子，包括（i)F油片段，其是 由可變輕鏈（VL)、可變重鏈（VH)、恒定輕鏈（CL)和恒定重鏈l(CHl)結構域組成的單價片 段；（ii)F(油'）2片段，其是包含在較鏈區通過二硫橋連接的2個F油片段的二價片段； (iii)Fab(Fd)片段的重鏈部分，其由VH和CH1結構域組成；（iv)可變片段（Fv)片段，其 由抗體單臂的化和VH結構域組成，（V)結構域抗體（dAb)片段，其包含單一可變結構域 (Ward, E.S.等，化加"6 341,544-546(1989)) ;(vi)駱駝抗體；（vii)分離的互補決定區 (CDR) ;(viii)其中VH結構域和化結構域通過膚接頭連接的單鏈Fv片段，所述接頭允許兩 個結構域締合形成抗原結合部位炬ird等，Science, 242,423-426,1988 ;Huston等，PNAS USA, 85, 5879-5883,1988) ;(ix)雙鏈抗體，其是二價雙特異性抗體，其中VH和化結構域 在單一多膚鏈上表達，但是使用太短的接頭使得在相同鏈上的兩個結構域之間無法配對， 從而迫使結構域與另一條鏈的互補性結構域配對，并產生兩個抗原結合部位（W094/13804 ; P.Holliger 等 Proc.化 tl. Acad. Sci.USA 90 6444-6448,(1993));和（X)線性抗體，其包含 串聯Fv區段對（VH-CH1-VH-CH1)，它與互補性輕鏈多膚一起形成抗原結合區對；（xi)多價 抗體片段（scFv二聚體、S聚體和/或四聚體（Power和Hudson, J Immunol. Methods 242 ; 193-204 9(2000)) 及（xii)單獨或W任何組合的重鏈和/或輕鏈的其它非全長部分或 其突變體、變體或衍生物。
[0103] 因為抗體可W多種方式修飾，因此術語"抗體"應解釋為涵蓋任何特異性結合成員 或具備具有所需特異性的結合結構域的物質。因此，該術語涵蓋抗體片段、衍生物、抗體的 功能性等同物和同源物，包括包含不論是天然還是完全或部分合成的免疫球蛋白結合結構 域的任何多膚。因此包括包含與另一多膚融合的免疫球蛋白結合結構域或等同物的嵌合分 子。嵌合抗體的克隆和表達描述于EP-A-0120694和EP-A-0125023和美國專利號4, 816, 397 和 4, 816, 567。
[0104] "抗體結合部位"是由輕鏈或重鏈和特異性結合抗原的輕鏈可變區和超變區構成 的抗體分子的結構部分。
[01化]本文所用的呈其不同語法形式的短語"抗體分子"考慮完整免疫球蛋白分子和免 疫球蛋白分子的免疫活性部分兩者。
[0106] 示例性的抗體分子是完整的免疫球蛋白分子、基本完整的免疫球蛋白分子和含 有抗原互補位的免疫球蛋白分子的那些部分，包括本領域已知的那些部分，如F油、F油'、 F (油'）2和F(v)，所述部分優選用于本文所述治療方法。
[0107] 抗體還可W是雙特異性的，其中抗體的一個結合結構域是本發明的特異性結合成 員，另一個結合結構域具有不同的特異性，例如募集效應子功能等。本發明的雙特異性抗 體包括其中抗體的一個結合結構域是本發明的特異性結合成員（包括其片段），另一個結 合結構域是截然不同的抗體或其片段，包括截然不同的抗癌或抗腫瘤特異性抗體的結合結 構域。另一個結合結構域可W是識別或祀向特定細胞類型的抗體，如神經或神經膠質細胞 特異性抗體。在本發明的雙特異性抗體中，本發明抗體的一個結合結構域可與識別特定細 胞受體和/或w特定方式調節細胞的其它結合結構域或分子結合，所述其它結合結構域或 分子例如免疫調節劑（例如白介素）、生長調節劑或細胞因子（例如腫瘤壞死因子（TNF)， 特別是2002年2月13日提交的U. S. S. N. 60/355, 838所示TNF雙特異性形式，該文獻W其 整體結合到本文中）或毒素（例如藍麻毒蛋白）或抗有絲分裂劑或抗調亡劑或因子。因 此，本發明的抗FAP抗體可用來使作用劑、標記、其它分子或化合物或抗體導向或祀向間質 部位，特別是傷口愈合、炎癥、癌癥或腫瘤的區域。
[0108] 呈其不同語法形式的短語"單克隆抗體"是指只具有一種能夠與特定抗原進行免 疫反應的抗體結合部位