本發明涉及多肽合成領域，特別涉及一種美拉諾坦Ⅰ的制備方法。
背景技術：
：α-MSH(黑色素細胞刺激激素)是一種能夠使黑色素細胞產生黑色素的激素，主要是在腦垂體中產生，此外亦可在皮膚、胃腸道、性腺等外周部位產生，能控制生物體皮膚和毛發的顏色。現大量研究已證實它的受體分子在性喚起、催化黑色素的合成以及降低食欲中起著重要作用，由此可以治療性功能障礙、刺激皮膚產生黑色素抵抗紫外線灼傷以及肥胖等疾病。2014年12月22日，Clinuvel公司開發的光損傷保護藥Afamelanotide(商品名：Scenesse)獲得歐盟批準上市。Afamelanotide為化學合成的人α-MSH類似物。Afamelanotide中文名為美拉諾坦Ⅰ，分子量1646.85，是一種含13個氨基酸的多肽分子，其結構如下：目前國內外關于美拉諾坦Ⅰ合成工藝的報道均較少：PNAS77(10)：5754-5758中采用Boc法進行固相合成，工藝操作復雜，危險性高，不適宜進行大規模生產；專利CN102816211B公開了一種以Fmoc固相合成法逐一偶聯保護氨基酸制備美拉諾坦Ⅰ的方法，該方法合成過程中容易發生第6位氨基酸His和第7位氨基酸D-Phe消旋化，生成對映異構體雜質，且在后續純化過程中很難除去，導致產品總收率低。綜上所述，目前報道的美拉諾坦Ⅰ合成方法中，Boc固相合成法需要使用高腐蝕性的氫氟酸，生產過程危險系數高；采用Fmoc固相合成法逐一偶聯保護氨基酸進行合成，合成過程容易產生對映異構體雜質，并且該雜質難除去，以致總收率偏低，僅有60％，且純度也僅為83％，不適宜進行工業化生產。技術實現要素：為解決上述美拉諾坦Ⅰ合成過程中存在的問題，本發明提供一種美拉諾坦Ⅰ的制備方法：首先采用液相合成法制備三肽片段：Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH；然后采用Fmoc固相合成法向載體樹脂上依次偶聯保護氨基酸Fmoc-Val-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、三肽片段、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH，然后進行N端乙酰化反應制得拉諾坦Ⅰ肽樹脂，經裂解反應后制得美拉諾坦Ⅰ粗肽，純化精制后得美拉諾坦Ⅰ精肽。為實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：一種美拉諾坦Ⅰ的制備方法，包括如下步驟：(a)液相合成法制備三肽片段：Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH；(b)采用Fmoc固相合成法向載體樹脂上依序偶聯保護氨基酸及步驟(a)中的三肽片段，并進行N端乙酰化，制備美拉諾坦Ⅰ肽樹脂；(c)美拉諾坦Ⅰ肽樹脂經裂解反應制備美拉諾坦Ⅰ粗肽；(d)美拉諾坦Ⅰ粗肽經純化過程制備美拉諾坦Ⅰ精肽。其中步驟(a)中，三肽片段Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH的制備過程包括以下過程：(1)制備Fmoc-His(Trt)-OSu：將Fmoc-His(Trt)-OH和HOSu溶于有機溶劑中，然后向其中滴加DCC的有機溶劑溶液，攪拌反應，TLC監測反應終點。反應結束后抽濾，濃縮反應液，向濃縮液中加入5～6倍體積的石油醚，析出白色固體，抽濾，濾餅以乙酸乙酯重新溶解至濃縮后體積，加入5～6倍體積石油醚，析晶，抽濾，真空干燥濾餅，得Fmoc-His(Trt)-OSu；其中Fmoc-His(Trt)-OH和HOSu的摩爾比為1:1.0～1.2；Fmoc-His(Trt)-OH和DCC的摩爾比為1:1.0～1.2；(2)制備Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH：將H-D-Phe-OH和碳酸鈉溶于水中，加入Fmoc-His(Trt)-OSu的有機溶劑溶液，攪拌反應，TLC監測反應終點，反應結束后，過濾，向濾液中加入飽和檸檬酸水溶液調節溶液pH值至2～3，乙酸乙酯萃取，濃縮后加入5～6倍體積石油醚析晶得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH；其中H-D-Phe-OH和碳酸鈉的摩爾比為1：1～2；H-D-Phe-OH和Fmoc-His(Trt)-OSu的摩爾比為1:1.1～1.5；(3)制備Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu：將Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH和HOSu溶于有機溶劑中，然后向其中滴加DCC的有機溶劑溶液，攪拌反應，TLC監測反應終點；反應結束后抽濾，濃縮反應液，向濃縮液中加入5～6倍體積的石油醚，析出白色固體，抽濾，濾餅以乙酸乙酯重新溶解至濃縮后體積，加入5～6倍體積石油醚，析晶，抽濾，真空干燥濾餅，得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu，其中Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH和HOSu的摩爾比為1:1.0～1.2；Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH和DCC的摩爾比為1:1.0～1.2；(4)制備Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH：將H-Arg(Pbf)-OH和碳酸鈉溶于水中，加入Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu的有機溶劑溶液，攪拌反應，TLC監測反應終點，反應結束后，過濾，向濾液中加入飽和檸檬酸水溶液調節溶液pH值至2～3，乙酸乙酯萃取，濃縮后加入5～6倍體積石油醚析晶得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH；其中H-Arg(Pbf)-OH和碳酸鈉的摩爾比為1：1～2；H-Arg(Pbf)-OH和Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu的摩爾比為1:1.1～1.5。其中有機溶劑為四氫呋喃、二氧六環、丙酮中的一種或一種以上的混合液。步驟(b)中，載體樹脂為替代度為0.3-1.0mmol/g的RinkAmideresin或RinkAmideAMresin。步驟(b)中，美拉諾坦Ⅰ肽樹脂的制備過程為：(1)保護氨基酸Fmoc-Val-OH在縮合試劑的作用下與載體樹脂進行偶聯反應，制備Fmoc-Val-RinkAmideresin或Fmoc-Val-RinkAmideAMresin；(2)依次偶聯保護氨基酸Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、三肽片段Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH，然后進行N端乙酰化反應，制得美拉諾坦Ⅰ肽樹脂。步驟(b)中的反應都是以2-5倍的投料比加入保護氨基酸或三肽片段進行偶聯反應，每一個偶聯反應均是在縮合試劑的存在下進行的固相接肽反應，每一步偶聯反應均以Kaiser試劑檢測反應終點，反應完畢后用脫保護試劑脫除Fmoc，再與下一個位點進行偶聯反應。優選的，脫保護試劑為哌啶與DMF體積比1:4組成的混合溶液；縮合試劑為DIC/HOBt、DIC/HOAt、TBTU/HOBt/DIEA、HBTU/HOBt/DIEA、HATU/HOAt/DIEA中的一種。優選的，N端乙酰化反應為：配制乙酸酐/DIEA/DCM或乙酸酐/吡啶/DCM的混合溶液作為封端試劑，加入到肽樹脂反應器中，攪拌反應1-3h；乙酸酐、吡啶、DIEA的用量為合成規模的5-30倍摩爾量，DCM用量為乙酸酐的2倍體積。步驟(c)中，美拉諾坦Ⅰ粗肽的制備過為：將美拉諾坦Ⅰ肽樹脂加入到裂解液中，在15～30℃下，裂解反應2～5h，反應結束，將裂解液過濾到甲基叔丁基醚或乙醚中沉降并洗滌，離心收集沉淀，真空干燥后得美拉諾坦Ⅰ粗肽。其中裂解液為加入體積比1-5％清除劑的TFA溶液，清除劑為苯甲醚、苯甲硫醚、乙二硫醇、巰基乙醇、苯酚、水中的一種或幾種。相對于現有技術，本發明的有益效果是：液相法制備三肽片段：Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH，相比于固相合成法，能夠避免合成過程中第6位His和第7位D-Phe發生消旋化，產生難以除去的對映異構體雜質，使產品總純度達到99.5％以上，對映異構體雜質[6-D-His]-美拉諾坦Ⅰ和[7-Phe]-美拉諾坦Ⅰ含量均小于0.1％，總收率大于60％，大大提高了終產品純度及收率降低了生產成本。說明書和權利要求書中所使用的縮寫含義如下：Fmoc9-芴甲氧羰基RinkAmideAMresinRinkAmideAM樹脂RinkAmideresinRinkAmide樹脂DCM二氯甲烷DMFN,N-二甲基甲酰胺DIEAN,N-二異丙基乙胺DICN,N-二異丙基碳二亞胺HOBt1-羥基苯并三唑HOAtN-羥基-7-偶氮苯并三氮唑HBTU苯并三唑-1-四甲基六氟磷酸酯TBTU苯并三唑四甲基四氟硼酸TFA三氟乙酸HOSuN-羥基琥珀酰亞胺DCC二環己基碳二亞胺BOC叔丁氧羰基TIS三異丙基硅烷具體實施方式下面用具體實施例對本發明進行詳細說明，但不限定本專利；根據本發明改變原料的投料比，或是反應溶劑或及縮合劑等，均在本發明的保護范圍內。實施例1：Fmoc-His(Trt)-OSu的制備準確稱取Fmoc-His(Trt)-OH929.6g(1.5mol)和HOSu189.9g(1.65mol)溶于2.5L四氫呋喃中，低溫(0℃)攪拌。準確稱取DCC340.4g(1.65mol)，溶于1L四氫呋喃中，緩慢滴加到上述溶液中，攪拌反應，TLC監測反應終點。反應完成后，抽濾，濃縮反應液至900-1000mL，向濃縮液中加入5L石油醚，析出白色固體，溶液-20℃靜置1h。靜置后抽濾，濾餅以1L乙酸乙酯溶解，加入5L石油醚，析晶，抽濾，濾餅真空干燥后，得Fmoc-His(Trt)-OSu949.4g，純度99.8％，收率88.3％。實施例2：Fmoc-His(Trt)-OSu的制備準確稱取Fmoc-His(Trt)-OH743.7g(1.2mol)和HOSu165.7g(1.44mol)溶于3L二氧六環中，低溫(0℃)攪拌。準確稱取DCC297.1g(1.44mol)，溶于1.5L四氫呋喃中，緩慢滴加到上述溶液中，攪拌反應，TLC監測反應終點。反應完成后，抽濾，濃縮反應液至1500mL，向濃縮液中加入7.5L石油醚，析出白色固體，溶液-20℃靜置1h。靜置后抽濾，濾餅以1.5L乙酸乙酯溶解，加入7.5L石油醚，析晶，抽濾，濾餅真空干燥后，得Fmoc-His(Trt)-OSu738.0g，純度99.8％，收率85.8％。實施例3：Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH的制備準確稱取H-D-Phe-OH99.1g(0.6mol)和碳酸鈉122.4g(1.2mol)溶于1.2L水中，低溫(0℃)下緩慢加入實施例2中所得Fmoc-His(Trt)-OSu645.1g(0.9mol)的四氫呋喃溶液2.5L，攪拌反應，TLC監測反應終點。反應完全后，過濾，低溫(0℃)下向濾液中加入飽和檸檬酸水溶液，調節溶液pH值至2～3，析出白色固體，抽濾，濾餅用水洗滌3次，干燥后用1.5L乙酸乙酯重新溶解，加入7L石油醚析晶，過濾，抽干，真空干燥得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH399.9g，純度99.8％，收率86.9％。實施例4：Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH的制備準確稱取H-D-Phe-OH165.2g(1.0mol)和碳酸鈉116.6g(1.1mol)溶于2L水中，低溫(0℃)下緩慢加入實施例1中所得Fmoc-His(Trt)-OSu788.5g(1.1mol)的四氫呋喃溶液4L，攪拌反應，TLC監測反應終點。反應完全后，過濾，低溫(0℃)下向濾液中加入飽和檸檬酸水溶液，調節溶液pH值至2～3，析出白色固體，抽濾，濾餅用水洗滌3次，干燥后用2L乙酸乙酯重新溶解，加入10L石油醚析晶，過濾，抽干，真空干燥得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH671.0g，純度99.8％，收率87.5％。實施例5：Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu的制備準確稱取實施例4中所得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH536.8g(0.7mol)和HOSu96.7g(0.84mol)溶于1800mL二氧六環中，低溫(0℃)攪拌。準確稱取DCC173.3g(0.84mol)，溶于500mL四氫呋喃中，緩慢滴加到上述溶液中，攪拌反應，TLC監測反應終點。反應完成后，抽濾，濃縮反應液至700-800mL，向濃縮液中加入4L石油醚，析出白色固體，溶液-20℃靜置1h。靜置后抽濾，濾餅以700mL乙酸乙酯溶解，加入3.5L石油醚，析晶，抽濾，濾餅真空干燥后，得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu532.1g，純度99.8％，收率86.5％。實施例6：Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu的制備準確稱取實施例3中所得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH306.8g(0.4mol)和HOSu50.6g(0.44mol)溶于1200mL四氫呋喃中，低溫(0℃)攪拌。準確稱取DCC90.8g(0.44mol)，溶于300mL四氫呋喃中，緩慢滴加到上述溶液中，攪拌反應，TLC監測反應終點。反應完成后，抽濾，濃縮反應液至400～500mL，向濃縮液中加入2.5L石油醚，析出白色固體，溶液-20℃靜置1h。靜置后抽濾，濾餅以400mL乙酸乙酯溶解，加入2L石油醚，析晶，抽濾，濾餅真空干燥后，得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu310.0g，純度99.8％，收率89.7％。實施例7：Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH的制備準確稱取H-Arg(Pbf)-OH92.5g(0.2mol)和碳酸鈉42.4g(0.4mol)溶于400mL水中，低溫(0℃)下緩慢加入實施例6中所得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu259.2g(0.3mol)的四氫呋喃溶液1L，攪拌反應，TLC監測反應終點。反應完全后，過濾，低溫(0℃)下向濾液中加入飽和檸檬酸水溶液，調節溶液pH值至2～3，析出白色固體，抽濾，濾餅用水洗滌3次，干燥后用1L乙酸乙酯重新溶解，加入5L石油醚析晶，過濾，抽干，真空干燥得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH206.4g，純度99.8％，收率87.8％。實施例8：Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH的制備準確稱取H-Arg(Pbf)-OH231.3g(0.5mol)和碳酸鈉58.3g(0.55mol)溶于1L水中，低溫(0℃)下緩慢加入實施例5中所得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu475.2g(0.55mol)的四氫呋喃溶液2.5L，攪拌反應，TLC監測反應終點。反應完全后，過濾，低溫(0℃)下向濾液中加入飽和檸檬酸水溶液，調節溶液pH值至2～3，析出白色固體，抽濾，濾餅用水洗滌3次，干燥后用3L乙酸乙酯重新溶解，加入15L石油醚析晶，過濾，抽干，真空干燥得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH508.9g，純度99.8％，收率86.6％。實施例9：Fmoc-Val-RinkAmideresin的制備準確稱取RinkAmideresin55.6g(樹脂初始替代度為0.90mmol/g，合成規模為50mmol)置于合成柱中，用500mLDMF洗滌兩次，加入500mLDCM溶脹30min；抽濾掉DCM后，加入Fmoc-Val-OH/DIC/HOBt的混合溶液[稱取Fmoc-Val-OH33.9g(100mmol)和14.9g(110mmol)HOBt置于溶解瓶中，加入250mlDMF溶液攪拌溶解，低溫(0℃)下加入17.0ml(110mmol)DIC，活化5min]，攪拌反應3h，抽掉反應液，用500mLDMF洗滌3次，然后再用DCM、甲醇各洗滌3次，真空干燥后得Fmoc-Val-RinkAmideresin60.9g。實施例10：Fmoc-Val-RinkAmideAMresin的制備準確稱取RinkAmideAMresin108.7g(樹脂初始替代度為0.92mmol/g，合成規模為100mmol)置于合成柱中，用900mLDMF洗滌兩次，加入900mLDCM溶脹30min；抽濾掉DCM后，加入Fmoc-Val-OH/DIC/HOBt的混合溶液[稱取Fmoc-Val-OH101.8g(300mmol)和44.6(330mmol)HOBt置于溶解瓶中，加入900mlDMF溶液攪拌溶解，低溫(0℃)下加入51.1ml(330mmol)DIC，活化5min]，攪拌反應4h，抽掉反應液，用900mLDMF洗滌3次，然后再用DCM、甲醇各洗滌3次，真空干燥后得Fmoc-Val-RinkAmideAMresin118.9g。實施例11：美拉諾坦Ⅰ肽樹脂的制備將實施例9中的Fmoc-Val-RinkAmideresin60.9g(合成規模50mmol)置于合成柱中，加入500mLDCM溶脹30min；抽濾掉DCM后，500mLDMF洗滌2次，加入20％哌啶/DMF溶液500mL脫保護2次，分別反應10min和10min；然后用DMF洗滌6次，每次500mL；稱取Fmoc-Pro-OH33.7g(100mmol)、HOAt14.9g(110mmol)用1LDMF溶解，低溫(0℃)中預冷15-20min，然后加入DIC17.0ml(110mmol)活化5min，將溶液加入到樹脂中，反應2h，反應終點以Kaiser試劑檢測結果為準，反應達終點后，抽掉反應液，用DMF洗滌6次，每次500mL；隨后再脫保護。如此反復循環操作，依次偶聯Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Ser(OtBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(OtBu)-OH，配制1600mL乙酰化試劑(400ml乙酸酐、350ml吡啶和850mlDMF混合溶液)，加入到反應柱中，反應1h，反應結束，樹脂用DMF、DCM和甲醇分別洗滌3次，每次500mL，真空干燥得美拉諾坦Ⅰ肽樹脂195.5g實施例12：美拉諾坦Ⅰ肽樹脂的制備將實施例10中的Fmoc-Val-RinkAmideresin118.9g(合成規模100mmol)置于合成柱中，加入900mLDCM溶脹30min；抽濾掉DCM后，900mLDMF洗滌2次，加入20％哌啶/DMF溶液900mL脫保護2次，分別反應10min和10min；然后用DMF洗滌6次，每次900mL；稱取Fmoc-Pro-OH101.2g(300mmol)、HOBt44.6g(330mmol)用1LDMF溶解，低溫(0℃)中預冷15-20min，然后加入DIC51.1ml(330mmol)活化5min，將溶液加入到樹脂中，反應2h，反應終點以Kaiser試劑檢測結果為準，反應達終點后，抽掉反應液，用DMF洗滌6次，每次900mL；隨后再脫保護。如此反復循環操作，依次偶聯Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Ser(OtBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(OtBu)-OH，配制800mL乙酰化試劑(200ml乙酸酐、175ml吡啶和425mlDMF混合溶液)，加入到反應柱中，反應1h，反應結束，樹脂用DMF、DCM和甲醇分別洗滌3次，每次900mL，真空干燥得美拉諾坦Ⅰ肽樹脂385.6g。實施例13：美拉諾坦Ⅰ粗肽的制備將實施例11得到的195.5g美拉諾坦Ⅰ肽樹脂(50mmol)，加入到預冷的1.5L裂解液(體積配比為TFA/TIS/苯酚/苯甲硫醚/H2O＝85/2.5/2.5/5/5)中，室溫下攪拌反應3h；裂解反應結束，過濾樹脂，100mlTFA洗滌樹脂2次，合并濾液和洗液，旋蒸濃縮至1L，濃縮液倒入10L預冷的叔丁基甲醚中，析出白色沉淀，靜置1h后，過濾，叔丁基甲醚洗滌6次，真空干燥得美拉諾坦Ⅰ粗肽85.6g，收率104.0％，純度80.5％。實施例14：美拉諾坦Ⅰ粗肽純化精制將實施例13中的美拉諾坦Ⅰ粗肽85.6g，采用內徑為100mm的C18制備柱，流動相A為0.1％TFA/水，流動相B為0.1％TFA/乙腈，上樣量為10g/針，流速300ml/min，檢測波長210nm，梯度洗脫，峰前和峰后循環進樣，得到中控分析純度為98.5％以上的精肽溶液；以醋酸/乙腈/水體系轉鹽后凍干得美拉諾坦Ⅰ50.3g，純度99.5％，對映異構體雜質[6-D-His]-美拉諾坦Ⅰ含量為0.07％，[7-Phe]-美拉諾坦Ⅰ含量為0.01％，總收率為61.1％。實施例15：美拉諾坦Ⅰ粗肽的制備將實施例12得到的385.6g美拉諾坦Ⅰ肽樹脂(100mmol)，加入到冷凍的3L裂解液(體積配比為TFA/TIS/苯酚/苯甲硫醚/H2O＝85/2.5/2.5/5/5)中，室溫下攪拌反應4h；裂解反應結束，過濾樹脂，300mlTFA洗滌樹脂2次，合并濾液和洗液，旋蒸濃縮至2L，濃縮液倒入20L預冷叔丁基甲醚中，析出白色沉淀；靜置1h后，過濾，叔丁基甲醚洗滌6次，真空干燥得美拉諾坦Ⅰ粗肽176.4g，收率107.1％，純度80.3％。實施例16：美拉諾坦Ⅰ粗肽純化精制將實施例15中的美拉諾坦Ⅰ粗肽176.4g，采用內徑為100mm的C18制備柱，流動相A為0.1％TFA/水，流動相B為0.1％TFA/乙腈，上樣量為10g/針，流速300ml/min，檢測波長210nm，梯度洗脫，峰前和峰后循環進樣，得到中控分析純度為98.5％以上的精肽溶液；以醋酸/乙腈/水體系轉鹽后凍干得美拉諾坦Ⅰ108.2g，純度99.6％，對映異構體雜質[6-D-His]-美拉諾坦Ⅰ含量為0.02％，[7-Phe]-美拉諾坦Ⅰ含量為0.03％，總收率為65.7％。當前第1頁1 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