1.一種紅肉蘋果組培苗生產花青苷的方法,其特征在于:包括以下步驟:
(1)獲取無菌材料:
選擇新疆紅肉蘋果與富士蘋果雜交后獲得的果肉鮮紅的優系(2010-15)紅肉蘋果的新稍莖尖為外植體,用1%吐溫(或洗衣粉)水浸泡15min,再用自來水沖洗20min后,于超凈工作臺上,用75%的酒精浸泡消毒30s,無菌水沖洗1遍,再用0.1%氯化汞溶液浸泡消毒6-8min,期間不斷晃動,使外植體各面均接觸到消毒液,最后用無菌水清洗5遍;
(2)初代培養獲得紅肉蘋果組培苗:
將外植體接種到誘導培養基上,所述誘導培養基以MS為基本培養基,添加1.0mg·L-1的6-BA(芐基腺嘌呤)、0.1mg·L-1的IBA(吲哚丁酸),30g·L-1蔗糖,8g·L-1瓊脂,3g·L-1活性炭,4g·L-1PVP,培養基pH值為5.8,經121℃高壓蒸汽滅菌25min后,分裝,待外植體生長成0.6-1.3cm的小芽時,進行繼代增值培養;
(3)繼代培養獲得大量紅肉蘋果組培苗:
將小芽接種到繼代培養基上進行增值培養,所述繼代培養基成分為MS、1.0mg·L-16-BA、0.1mg·L-1IBA,約10-20天后,分化出2-3個叢生芽,25-35天后,叢生芽長至約2cm,平均4-5周繼代一次,繼代培養過程中溫度控制在20-30℃;
(4)壯苗培養:
取繼代培養長勢良好的紅肉蘋果組培苗,接種至以MS為基本培養基,添加1.0mg·L-1的6-BA(芐基腺嘌呤)、0.1mg·L-1的IBA(吲哚丁酸)、30g·L-1果糖或山梨醇、8g·L-1瓊脂的培養基上,放置在17℃恒溫光照培養箱里進行壯苗培養;
(5)花青苷的提取和粗品的制備:
選取果糖或山梨醇處理的17℃恒溫培養14天后的組培苗,剪碎后用液氮研磨成粉,將得到的粉末置于錐形瓶中,按固液比1:10加入丙酮溶液,將錐形瓶用封口膜封口,置于超聲波清洗器中,控制溫度在30℃,超聲30min后置于黑暗中浸提10小時,得浸提液,將浸提液用連接真空抽氣泵的布氏漏斗抽濾,將所得濾液倒入旋蒸瓶,在旋轉蒸發儀上以20-30℃的溫度旋蒸去除丙酮溶劑,然后避光靜置,再經過抽濾,濾紙上的顆粒即為花青苷粗品。