本發明公開了一種枸杞多糖鐵絡合物的制備方法，屬于絡合物領域。
背景技術：
枸杞是我國傳統名貴中藥材，富含植物多糖、蛋白質、維生素等營養成分。枸杞多糖是從枸杞中提取而得的一種水溶性多糖。已明確該多糖系蛋白多糖，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6種單糖成分組成.經研究表明，枸杞多糖是枸杞子調節免疫、延緩衰老的主要活性成分，可改善老年人易疲勞、食欲不振和視力模糊等癥狀，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗衰老等作用。
缺鐵的治療對缺鐵性貧血的病人是很有必要的，其中靜脈注射特別適用于那些不能耐受口服鐵劑治療、不能夠完全吸收膳食鐵或者有造血障礙的人群，靜脈注射鐵劑中右旋糖酐鐵應用廣泛，但其有明顯的不良反應，據報道，接受右旋糖酐鐵治療的病人中，接近26％的病人出現了副作用，引起這種嚴重副反應的根本原因還不明確，但是，已知對右旋糖酐的過敏反應是引起這種嚴重副作用的原因，因此沒有右旋糖酐的靜脈注射鐵劑可以降低或者避免這些副作用。
多糖鐵絡合物是新一代補鐵劑，不僅有合適的絡合穩定性，對胃腸道刺激性小，且當其釋放鐵之后，多糖本身具有多方面的生物活性，可被吸收利用。多糖鐵絡合物由糖基和配糖鐵兩部分組成。
技術實現要素：
本發明主要解決的技術問題：針對傳統缺鐵性貧血的病人，選用亞鐵鹽來治療缺
鐵性貧血，但其化學性質不穩定，生物利用度差，消化道刺激作用顯著，并且易在體內產生內源性自由基造成細胞膜損傷的缺點，提供了一種枸杞多糖鐵絡合物的制備方法，本發明先從枸杞干中經過微波浸提、醇沉、脫蛋白、透析等工藝得到枸杞精多糖，以枸杞精多糖鐵鹽為原料，經過堿化、絡合、醇沉、干燥等工藝最終制得枸杞多糖鐵絡合物，本發明制備得到的枸杞多糖鐵絡合物不僅可以作為新型補鐵劑，穩定性好，對胃腸道無或極少刺激作用，而且結合枸杞多糖自身的生物活性，還具有調節免疫、延緩衰老等作用，在人體釋放后可被吸收利用，無毒副作用。
為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是：
（1）稱取200～300g枸杞干，將其粉碎、過篩得60～80目枸杞粉末，將枸杞粉末按固液比1:6加入去離子水中，在溫度為70～80℃和微波頻率為2000～2200MHz下進行微波浸提3～5次，每次浸提5～10min，浸提結后過濾，收集濾液，并將濾液合并，得到枸杞多糖水浸液；
（2）將上述枸杞多糖水浸液按體積比1:2加入質量分數85%乙醇溶液中，攪拌15～20min后在室溫下靜置10～18h，靜置結束后過濾，收集沉淀物，將沉淀物按固液比1：3加入去離子水中混合，得枸杞粗多糖液，再將枸杞多糖液加入總體積3～5%的Sevage試劑進行振蕩脫蛋白，振蕩10～15min后在4000～6000r/min轉速下離心分離得上清液，將上清液裝入透析袋中，放入去離子水中透析，每隔3～5h更換一次水，透析20～24h后進行減壓蒸餾，將濃縮液噴霧干燥得枸杞精多糖，所述的sevage試劑是氯仿和正丁醇按體積比4:1混合；
（3）取3～5g上述得到的枸杞精多糖溶于30～50mL的蒸餾水中，攪拌溶解后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液調節pH為10～11，調節后向溶液中加入25～30mL質量分數15%碳酸鈉溶液，混合后放入水浴中，在80℃水浴下邊攪拌邊滴加60～100mL濃度為0.5mol/L氯化鐵溶液，滴加結束后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液保持pH為10～11，并保持在80℃溫度下攪拌回流2～3h，回流結束后過濾，將濾液旋轉蒸發濃縮至原體積的20%，得濃縮液；
（4）將上述濃縮液按體積比1:4加入無水乙醇中，攪拌混合后靜置3～5h后放入離心分離機中在5000～6000r/min離心分離20～30min，將沉淀物分別用丙酮和無水乙醇洗滌2～3次，將洗滌后的固體真空烘干，烘干后固體再次溶于蒸餾水中，在常溫下透析3～5h，透析后旋轉蒸發得濃縮液，向濃縮液中加入其體積2～4倍的無水乙醇，分離得沉淀物后分別用丙酮和無水乙醇清洗2～3次，清洗后真空干燥，即可得到枸杞多糖鐵絡合物。
本發明的應用方法：將本發明制備得到的枸杞多糖鐵絡合物加入到注射用水中配制成每毫升含鐵元素280～320mg的溶液，所述的注射用水為常規無菌去離子注射用水，加入質量分數15％的NaOH溶液調節PH值為9～11，控制溫度在55～65℃，然后再加入總質量1～3‰的活性炭，攪拌混合25～35min后用0.20～0.22μm微濾膜過濾，將濾液滅菌，滅菌后的濾液灌裝到容器中，用蒸汽加熱溫度控制在110～130℃，保持15～25min，即得枸杞多糖鐵注射液成品。
本發明的有益效果是：
（1）本發明制備得到的枸杞多糖鐵絡合物可以作為新型補鐵劑，穩定性好，對胃腸道無或極少刺激作用；
（2）本發明的枸杞多糖鐵絡合物結合枸杞多糖自身的生物活性，具有調節免疫、延緩衰老等作用，在人體釋放后可被吸收利用，無毒副作用；
（3） 本發明制備工藝簡單，穩定可靠，易操作，成本低。
具體實施方式
首先稱取200～300g枸杞干，將其粉碎、過篩得60～80目枸杞粉末，將枸杞粉末按固液比1:6加入去離子水中，在溫度為70～80℃和微波頻率為2000～2200MHz下進行微波浸提3～5次，每次浸提5～10min，浸提結后過濾，收集濾液，并將濾液合并，得到枸杞多糖水浸液；將上述枸杞多糖水浸液按體積比1:2加入質量分數85%乙醇溶液中，攪拌15～20min后在室溫下靜置10～18h，靜置結束后過濾，收集沉淀物，將沉淀物按固液比1：3加入去離子水中混合，得枸杞粗多糖液，再將枸杞多糖液加入總體積3～5%的Sevage試劑進行振蕩脫蛋白，振蕩10～15min后在4000～6000r/min轉速下離心分離得上清液，將上清液裝入透析袋中，放入去離子水中透析，每隔3～5h更換一次水，透析20～24h后進行減壓蒸餾，將濃縮液噴霧干燥得枸杞精多糖，所述的sevage試劑是氯仿和正丁醇按體積比4:1混合；取3～5g上述得到的枸杞精多糖溶于30～50mL的蒸餾水中，攪拌溶解后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液調節pH為10～11，調節后向溶液中加入25～30mL質量分數15%碳酸鈉溶液，混合后放入水浴中，在80℃水浴下邊攪拌邊滴加60～100mL濃度為0.5mol/L氯化鐵溶液，滴加結束后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液保持pH為10～11，并保持在80℃溫度下攪拌回流2～3h，回流結束后過濾，將濾液旋轉蒸發濃縮至原體積的20%，得濃縮液；將上述濃縮液按體積比1:4加入無水乙醇中，攪拌混合后靜置3～5h后放入離心分離機中在5000～6000r/min離心分離20～30min，將沉淀物分別用丙酮和無水乙醇洗滌2～3次，將洗滌后的固體真空烘干，烘干后固體再次溶于蒸餾水中，在常溫下透析3～5h，透析后旋轉蒸發得濃縮液，向濃縮液中加入其體積2～4倍的無水乙醇，分離得沉淀物后分別用丙酮和無水乙醇清洗2～3次，清洗后真空干燥，即可得到枸杞多糖鐵絡合物。
實例1
首先稱取200g枸杞干，將其粉碎、過篩得60目枸杞粉末，將枸杞粉末按固液比1:6加入去離子水中，在溫度為70℃和微波頻率為2000MHz下進行微波浸提3次，每次浸提5min，浸提結后過濾，收集濾液，并將濾液合并，得到枸杞多糖水浸液；將上述枸杞多糖水浸液按體積比1:2加入質量分數85%乙醇溶液中，攪拌15min后在室溫下靜置10h，靜置結束后過濾，收集沉淀物，將沉淀物按固液比1：3加入去離子水中混合，得枸杞粗多糖液，再將枸杞多糖液加入總體積3%的Sevage試劑進行振蕩脫蛋白，振蕩10min后在4000r/min轉速下離心分離得上清液，將清液裝入透析袋中，放入去離子水中透析，每隔3h更換一次水，透析20h后將溶液減壓蒸餾、干燥得枸杞精多糖，所述的sevage試劑是氯仿和正丁醇按體積比4:1混合；取3g上述得到的枸杞多糖溶于30mL的蒸餾水中，攪拌溶解后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液調節pH為10，調節后向溶液中加入25mL質量分數15%碳酸鈉溶液，混合后放入水浴中，在80℃水浴下邊攪拌邊滴加60mL濃度為0.5mol/L氯化鐵溶液，滴加結束后用濃度為3mol/L的氫氧化鈉溶液保持pH為10，并保持在80℃溫度下攪拌回流2h，回流結束后過濾，得濾液旋轉蒸發濃縮至原體積的20%，得濃縮液；將上述濃縮液按體積比1:4加入無水乙醇中，攪拌混合后靜置3h后放入離心分離機中在5000r/min離心分離20min，將沉淀物分別用丙酮和無水乙醇洗滌2次，將洗滌后的固體真空烘干，烘干后固體再次溶于蒸餾水中，在常溫下透析3h，透析后旋轉蒸發得濃縮液，向濃縮液中加入其體積2倍的無水乙醇，分離得沉淀物后分別用丙酮和無水乙醇清洗2次，即清洗后真空干燥，即可得到枸杞多糖鐵絡合物。
將本發明制備得到的枸杞多糖鐵絡合物加入到注射用水中配制成每毫升含鐵元素280mg的溶液，所述的注射用水為常規無菌去離子注射用水，加入質量分數15％的NaOH溶液調節PH值為9，控制溫度在55℃，然后再加入總質量1‰的活性炭，攪拌混合25min后用0.20μm微濾膜過濾，將濾液滅菌，滅菌后的濾液灌裝到容器中，用蒸汽加熱溫度控制在110℃，保持15min，即得枸杞多糖鐵注射液成品。
實例2
首先稱取250g枸杞干，將其粉碎、過篩得70目枸杞粉末，將枸杞粉末按固液比1:6加入去離子水中，在溫度為75℃和微波頻率為2100MHz下進行微波浸提4次，每次浸提8min，浸提結后過濾，收集濾液，并將濾液合并，得到枸杞多糖水浸液；將上述枸杞多糖水浸液按體積比1:2加入質量分數85%乙醇溶液中，攪拌17min后在室溫下靜置14h，靜置結束后過濾，收集沉淀物，將沉淀物按固液比1：3加入去離子水中混合，得枸杞粗多糖液，再將枸杞多糖液加入總體積4%的Sevage試劑進行振蕩脫蛋白，振蕩13min后在5000r/min轉速下離心分離得上清液，將清液裝入透析袋中，放入去離子水中透析，每隔4h更換一次水，透析22h后將溶液減壓蒸餾、干燥得枸杞精多糖，所述的sevage試劑是氯仿和正丁醇按體積比4:1混合；取4g上述得到的枸杞多糖溶于40mL的蒸餾水中，攪拌溶解后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液調節pH為10.5，調節后向溶液中加入27mL質量分數15%碳酸鈉溶液，混合后放入水浴中，在80℃水浴下邊攪拌邊滴加80mL濃度為0.5mol/L氯化鐵溶液，滴加結束后用濃度為3mol/L的氫氧化鈉溶液保持pH為10.5，并保持在80℃溫度下攪拌回流2.5h，回流結束后過濾，得濾液旋轉蒸發濃縮至原體積的20%，得濃縮液；將上述濃縮液按體積比1:4加入無水乙醇中，攪拌混合后靜置4h后放入離心分離機中在5500r/min離心分離25min，將沉淀物分別用丙酮和無水乙醇洗滌2次，將洗滌后的固體真空烘干，烘干后固體再次溶于蒸餾水中，在常溫下透析4h，透析后旋轉蒸發得濃縮液，向濃縮液中加入其體積3倍的無水乙醇，分離得沉淀物后分別用丙酮和無水乙醇清洗2次，即清洗后真空干燥，即可得到枸杞多糖鐵絡合物。
將本發明制備得到的枸杞多糖鐵絡合物加入到注射用水中配制成每毫升含鐵元素300mg的溶液，所述的注射用水為常規無菌去離子注射用水，加入質量分數15％的NaOH溶液調節PH值為10，控制溫度在60℃，然后再加入總質量2‰的活性炭，攪拌混合30min后用0.21μm微濾膜過濾，將濾液滅菌，滅菌后的濾液灌裝到容器中，用蒸汽加熱溫度控制在120℃，保持20min，即得枸杞多糖鐵注射液成品。
實例3
首先稱取300g枸杞干，將其粉碎、過篩得80目枸杞粉末，將枸杞粉末按固液比1:6加入去離子水中，在溫度為80℃和微波頻率為2200MHz下進行微波浸提5次，每次浸提10min，浸提結后過濾，收集濾液，并將濾液合并，得到枸杞多糖水浸液；將上述枸杞多糖水浸液按體積比1:2加入質量分數85%乙醇溶液中，攪拌20min后在室溫下靜置18h，靜置結束后過濾，收集沉淀物，將沉淀物按固液比1：3加入去離子水中混合，得枸杞粗多糖液，再將枸杞多糖液加入總體積5%的Sevage試劑進行振蕩脫蛋白，振蕩15min后在6000r/min轉速下離心分離得上清液，將清液裝入透析袋中，放入去離子水中透析，每隔5h更換一次水，透析24h后將溶液減壓蒸餾、干燥得枸杞精多糖，所述的sevage試劑是氯仿和正丁醇按體積比4:1混合；取5g上述得到的枸杞多糖溶于50mL的蒸餾水中，攪拌溶解后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液調節pH為11，調節后向溶液中加入30mL質量分數15%碳酸鈉溶液，混合后放入水浴中，在80℃水浴下邊攪拌邊滴加100mL濃度為0.5mol/L氯化鐵溶液，滴加結束后用濃度為3mol/L的氫氧化鈉溶液保持pH為11，并保持在80℃溫度下攪拌回流3h，回流結束后過濾，得濾液旋轉蒸發濃縮至原體積的20%，得濃縮液；將上述濃縮液按體積比1:4加入無水乙醇中，攪拌混合后靜置5h后放入離心分離機中在6000r/min離心分離30min，將沉淀物分別用丙酮和無水乙醇洗滌3次，將洗滌后的固體真空烘干，烘干后固體再次溶于蒸餾水中，在常溫下透析5h，透析后旋轉蒸發得濃縮液，向濃縮液中加入其體積4倍的無水乙醇，分離得沉淀物后分別用丙酮和無水乙醇清洗3次，即清洗后真空干燥，即可得到枸杞多糖鐵絡合物。
將本發明制備得到的枸杞多糖鐵絡合物加入到注射用水中配制成每毫升含鐵元素320mg的溶液，所述的注射用水為常規無菌去離子注射用水，加入質量分數15％的NaOH溶液調節PH值為11，控制溫度在65℃，然后再加入總質量3‰的活性炭，攪拌混合35min后用0.22μm微濾膜過濾，將濾液滅菌，滅菌后的濾液灌裝到容器中，用蒸汽加熱溫度控制在130℃，保持25min，即得枸杞多糖鐵注射液成品。