一種單克隆抗體在治療神經退行性疾病中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明術語生物醫藥領域，具體地，涉及一種單克隆抗體在神經退行性疾病中的 應用。
【背景技術】
[0002] 阿爾茨海默病（Alzheimer's disease，AD)是一種慢性漸進性的神經退行性疾病， 臨床主要表現為認知功能不斷下降，同時伴有多種行為異常，最終導致死亡。AD主要包括家 族性和散發性：前者發病早，與淀粉樣前體蛋白（amyloid precursor protein, APP)、早老 素 Upresenilin 1，PS 1)和早老素2(preSenilin 2，PS2)基因突變有關；后者病例多，多 數在65歲以后發病，與載脂蛋白E(Ap〇lip〇pr 〇tein E，Ap〇E)的多態性有關。AD目前在所 有死亡原因中居第六位，在65歲以上人群的死亡原因中居第五位。2010年，全球AD病例 有3600萬；到2030年，可能會達到6600萬；到2050年，可能會達到11500萬。AD的發病 原因非常復雜，至今尚未確切闡明。
[0003] 目前臨床上AD的主要治療藥物為多奈哌齊，該藥為膽堿酯酶抑制劑，通過減少乙 酰膽堿的降解而發揮改善學習記憶的作用，只能夠緩解AD病人的學習記憶損傷癥狀，并不 能減輕神經炎癥、老年斑沉積等病理損傷。
[0004] 因此，本領域迫切需要開發一種療效更好、副作用少的治療神經退行性疾病的藥 物。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一種療效更好、副作用少的治療神經退行性疾病的藥物。
[0006] 在本發明的第一方面，提供了一種單克隆抗體的用途，所述單克隆抗體用于制備 治療神經退行性疾病的藥物組合物，其中所述的單克隆抗體具有如SEQ ID N0. :1所示序 列。
[0007] 在另一優選例中，所述的藥物組合物含有SEQ ID N0. :1所示序列的單克隆抗體， 和藥學上可接受的載體。
[0008] 在另一優選例中，所述的神經退行性疾病選自下組：阿爾茨海默病、帕金森氏病和 腦中風等（Αβ誘導的學習記憶障礙、LPS誘導的學習記憶障礙）。
[0009] 在另一優選例中，所述的藥物組合物中所述單克隆抗體的濃度為l-100mg/ml。
[0010] 在另一優選例中，所述單克隆抗體的施用劑量為0. l-100mg/kg。 toon] 在另一優選例中，所述的藥物組合物還用于：（i)抑制炎癥因子與受體結合和/或
[11] 抑制小膠質細胞的增殖和活化；和/或（iii)抑制炎癥因子分泌。
[0012] 在另一優選例中，所述炎癥因子選自下組：IL-l、IL-2、和IL-6。
[0013] 在另一優選例中，所述的藥物組合物的劑型包括：注射劑、凍干粉。
[0014] 在另一優選例中，所述的藥物組合物為注射劑，并優選地含有：
[0015] (i)治療有效量的抗TNF-α抗體（即SEQ ID NO. : 1所示序列的單克隆抗體）；
[0016] (ii)含〇· 8-6. 2mg/ml組氨酸的緩沖體系；
[0017] (iii)滲透壓調節劑；以及
[0018] (iv)表面活性劑，
[0019] 其中，所述制劑的pH為5. 5-6. 5。
[0020] 在另一優選例中，所述抗TNF- α抗體的濃度為40-60mg/ml。
[0021] 在另一優選例中，所述抗TNF-α抗體的濃度為45-55mg/ml，優選為48-52mg/ml， 最優選為50mg/ml。
[0022] 在另一優選例中，所述組氨酸的濃度為1. 6-5. Omg/ml，優選為3. 0-3. 8mg/ml。
[0023] 在另一優選例中，所述組氨酸的pH為5. 5-6. 5,優選為5. 8-6. 2。
[0024] 在另一優選例中，所述抗TNF-a抗體為單克隆抗體。
[0025] 在另一優選例中，所述單克隆抗體為全長抗體。
[0026] 在另一優選例中，所述單克隆抗體為IgGl抗體。
[0027] 在另一優選例中，所述單克隆抗體為人源化抗體。
[0028] 在另一優選例中，所述單克隆抗體為包含抗原結合區的抗體片段。
[0029] 在另一優選例中，所述抗體片段為Fab或F(ab' )2片段。
[0030] 在另一優選例中,所述單克隆抗體結合TNF- α。
[0031] 在另一優選例中，所述抗TNF-α抗體選自：阿達木單抗（adalimumab)、英夫利昔 單抗（infliximab)、戈利木單抗（Golimumab)。
[0032] 在另一優選例中，所述抗TNF-α抗體為SEQ ID NO. :1所示序列的單克隆抗體。
[0033] 在另一優選例中，所述制劑的pH為5. 8-6. 2,優選為5. 9-6. 1，最優選為6. 0。
[0034] 在另一優選例中，所述滲透壓調節劑包括多元醇和氯化鈉。
[0035] 在另一優選例中，所述多元醇為甘露醇或山梨醇。
[0036] 在另一優選例中，所述多元醇的濃度為8-20mg/ml，優選為10-15mg/ml。
[0037] 在另一優選例中，所述NaCl的濃度為2-10mg/ml，優選為4-8mg/ml，更優選為 5. 5-6. 5mg/ml 〇
[0038] 在另一優選例中，所述表面活性劑的濃度為0· 6-1. Omg/ml，優選為0· 8-1. Omg/ ml〇
[0039] 在另一優選例中，所述表面活性劑為聚山梨酯。
[0040] 在另一優選例中，所述聚山梨酯為聚山梨酯80。
[0041] 在另一優選例中，所述制劑具有下組的一種或多種特征：
[0042] (a)所述制劑在2-8 °C可保存至少2年；
[0043] (b)所述制劑適合皮下注射。
[0044] 在另一優選例中，所述制劑包括：
[0045] (a)40_60/ml抗TNF-α單克隆抗體（即SEQ ID N0. :1所示序列的單克隆抗體）；
[0046] (b) 0· 8-6. 2mg/ml 組氨酸；
[0047] (c) 8_20mg/ml 多兀醇；
[0048] (d) 2-10mg/mlNaCl ；
[0049] (e)0· 6_1· 0mg/ml 聚山梨酯，
[0050] 并且所述制劑的pH為5· 5-6. 5。
[0051 ] 在另一優選例中，所述藥物組合物中不含檸檬酸。
[0052] 在另一優選例中，所述的單克隆抗體由CH0細胞表達，經純化獲得。
[0053] 在另一優選例中，所述治療神經退行性疾病的治療效果呈劑量依賴型。
[0054] 本發明第二方面提供了一種治療神經退行性疾病的藥物組合物，所述的藥物組合 物含有安全有效量的SEQ ID N0. :1所示序列的單克隆抗體，和藥學上可接受的載體。
[0055] 在另一優選例中，所述的藥物組合物包括：
[0056] ⑴治療有效量的抗TNF-α抗體（即SEQ ID NO. : 1所示序列的單克隆抗體）；
[0057] (ii)含0· 8-6. 2mg/ml組氨酸的緩沖體系；
[0058] α ?)滲透壓調節劑；以及
[0059] (iv)表面活性劑，
[0060] 其中，所述制劑的pH為5. 5-6. 5。
[0061] 本發明的第三方面提供了一種治療神經退行性疾病的方法，所述方法包括步驟： 將具有SEQ ID N0. :1所示序列的單克隆抗體或其藥物組合物施用于需要的對象。
[0062] 在另一優選例中，所述的需要的對象為哺乳動物，例如人、非人靈長類、大鼠、小 鼠。
[0063] 本發明的第四方面提供了一種體外非治療性的抑制炎癥因子分泌的方法，所述方 法包括步驟：
[0064] 在SEQ ID NO. : 1所示單克隆抗體的存在下，培養細胞，從而抑制所述細胞分泌炎 癥因子。
[0065] 在另一優選例中，所述的細胞包括小膠質細胞。
[0066] 在另一優選例中，所述炎癥因子包括下組：IL_1、IL-2、和IL-6。
[0067] 本發明第五方面提供了一種體外非治療性的抑制小膠質細胞的增殖和/或活化 的方法，所述方法包括步驟：
[0068] 在SEQ ID N0. :1所示單克隆抗體的存在下，培養小膠質細胞，從而抑制所述小膠 質細胞的增殖和/或活化。
[0069] 應理解，在本發明范圍內中，本發明的上述各技術特征和在下文（如實施例）中具 體描述的各技術特征之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說明】
[0070] 圖1顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-a單克隆抗體與TNF-a的結合動力學曲線。
[0071] 圖2顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-a單克隆抗體與不同種類細胞因子的結合情 況比較。
[0072] 圖3顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-a單克隆抗體對TNF-a與重組p55或p75 結合的抑制作用。
[0073] 圖4顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-a單克隆抗體對TNF- a介導的細胞毒性的 中和作用。
[0074] 圖5顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-a單克隆抗體對〇Αβ142誘導學習記憶 損傷小鼠在Υ迷宮中自發交替反應率的影響。###Ρ〈〇. 001，與saline組比較；*ρ〈0. 05， **ρ〈0· 01，與 οΑβ i 42組比較。
[0075] 圖6顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體對〇Α β i 42誘導小鼠海馬內小 膠質細胞活化的抑制作用。A :saline組；Β :〇Αβ i 42組；C :重組人抗腫瘤壞死因子-ct單 克隆抗體5mg/kg組；D :重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體15mg/kg組；E :重組人抗腫 瘤壞死因子-α單克隆抗體50mg/kg組；F:多奈哌齊5mg/kg組。###p〈0. 001，與saline組 比較；*ρ〈〇· 05, **ρ〈0· 01，***ρ〈0· 001，與 οΑβ i 42組比較。
[0076] 圖7顯示了重組人抗腫瘤壞死因子- α單克隆抗體對〇Αβ i 42誘導學習記憶損傷 小鼠海馬內TNF-α水平的影響。###p〈〇. 〇〇1，與saline組比較；*p〈0. 05, #p〈0. 01，與 〇Αβ i 42組比較。
[0077] 圖8顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體對LPS誘導學習記憶損傷小鼠 在Υ迷宮中自發交替反應率的影響。###Ρ〈〇. 001，與saline組比較；*#ρ〈0. 001，與LPS組 比較。
[0078] 圖9顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體對LPS誘導小鼠海馬內小膠質 細胞活化的抑制作用。A:saline組；B:LPS組；C:重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體 5mg/kg組；D :重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體15mg/kg組；Ε :重組人抗腫瘤壞死因 子- α單克隆抗體50mg/kg組；F :米諾環素50mg/kg組。###p〈0. 001，與saline組比較； ***p〈0. 001，與 LPS 組比較。
[0079] 圖10顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體對LPS誘導學習