發生， 并具有修復作用，其中C3效果更好，C3HD細胞形態完全正常。
[0254] (七）對小鼠睪丸組織的影響
[0255] 透射電鏡下觀察可見，空白對照組精細胞形態正常，曲精管上皮細胞形態規則，未 見凋亡細胞；精子形態正常，數目較多。與此相比，模型組可見部分凋亡的精細胞，部分精細 胞核內染色質聚集，出現胞漿空泡化；少量曲精管上皮細胞出現凋亡，部分胞漿內有空泡， 少量細胞胞漿已脫落；精子數目較少，偶見異常。C2HD組部分區域少量精細胞凋亡，胞漿出 現空泡，其他區域偶見精細胞出現凋亡；少量曲精管上皮細胞可見胞漿脫落，胞漿內有少量 空泡；精子形態基本正常，數目偏少。C2MD組精細胞分散，泡漿內大量空泡，部分精細胞核 內染色質聚集；曲精管上皮細胞部分凋亡，核固縮，核內染色質聚集；精子形態偶見異常， 數目基本正常。C3HD組可見少量精細胞凋亡，部分胞漿內可見空泡；曲精管上皮細胞未見 凋亡，少量胞漿內可見空泡；精子數目正常，少量精子出現畸形。C3MD組可見有少量精細胞 凋亡，部分精細胞染色質聚集，胞漿空泡化；曲精管上皮細胞胞漿內可見空泡，少量上皮細 胞可見胞漿脫落；精子數目正常，少量精子出現畸形。研究結果表明，C2和C3均能輕度緩 解睪丸中精細胞和曲精管上皮細胞的凋亡。
[0256] (八）對小鼠小腸組織的影響
[0257] 透射電鏡下觀察可見，空白對照組小腸絨毛排列緊密整齊，細胞界限清晰可見，細 胞器正常。與此相比，模型組小鼠小腸絨毛排列稀疏紊亂，部分區域絨毛脫落缺失，部分區 域絨毛變短；大部分上皮細胞核內染色質聚集，出現胞漿空泡化甚至脫落。C2HD組小腸絨 毛排列整齊，部分區域絨毛較正常略短且排列稀疏；少數上皮細胞內偶見空泡。C2MD組小 腸絨毛偏短，部分區域排列松散；部分上皮細胞內可見少量空泡。C3HD組小腸絨毛排列緊 密整齊，長度接近正常；上皮細胞形態正常，界限清晰可見，核內染色質分布均勻，未見明顯 空泡。C3MD組小腸絨毛排列緊密整齊，長度較正常略短；上皮細胞形態基本正常，少數細胞 胞漿內偶見空泡。由此結果可知，C2和C3均能減少小腸絨毛受損傷程度，減少上皮細胞凋 亡的出現，其中C3效果相對較好，高劑量細胞形態完全正常。
[0258] (九）討論
[0259] 某些特殊領域，由于作業任務的特殊性常需在惡劣環境下進行，如礦井、密閉艙 等，這些環境大多為密閉的，里面常具有高溫、高濕、噪音、有害氣體、輻射等有害因素。機體 長期處于上述環境中可導致內環境紊亂，機體功能失調，引起疲勞甚至產生病變。上述特殊 環境下疲勞的產生涉及多個器官及系統，其中神經系統、免疫系統、消化系統、生殖系統對 此反應較為敏感，尤其是神經系統，但是上述有害因素對于機體的影響也是一個慢性應激 過程，短期內一些宏觀觀察指標改變并不明顯，而細胞凋亡發生在這些指標改變之前，因此 除了對海馬內神經遞質進行檢測外，可以利用透射電鏡技術觀察不同組織內細胞超微結構 的變化及凋亡形態。
[0260] 長期處于密閉環境中的作業人員，由于精神緊張、體力消耗加重、注意力集中等原 因極易引起精神疲勞，從而導致認知功能下降、記憶力減退、精神不佳等現象，而海馬是調 控認知、學習能力和記憶力的神經中樞，其內神經遞質含量的高低、神經元結構的正常與否 以及海馬的大小直接影響著學習能力、記憶力和精神狀態的好壞。5-HT是在海馬組織內合 成的重要的中樞神經抑制性遞質，對于睡眠、感知、情緒等精神行為具有重要的調節作用， 其含量的增加可抑制多巴能神經元系統而產生疲勞，也可能減弱喚醒能力和動力而引起疲 勞。對神經元細胞超微結構觀察可見，與模型組相比C2和C3組顯著減少神經元細胞凋亡 數目，改善細胞形態，后者神經元細胞形態正常，未出現凋亡。由此表明C3可通過降低海馬 內5-HT含量，抑制神經元細胞凋亡，維持神經系統的正常功能起到緩解疲勞的作用。
[0261] 環境變化直接影響機體的免疫力，存在多種有害因素的密閉環境可導致機體免疫 功能下降。胸腺作為中樞淋巴器官，是體內重要的免疫器官，對于多種刺激反應敏感，其內 的淋巴細胞對于輻射、噪音等有害因素的損傷更為敏感。電鏡觀察可見，與模型組相比C2 和C3組顯著減少淋巴細胞凋亡數目，改善細胞形態，后者細胞形態完全正常，未有任何異 常，提示C3可保護淋巴細胞免受有害因素損傷，抑制細胞凋亡，維持免疫系統的正常功能 而起到緩解疲勞的作用。
[0262] 密閉環境中，噪音、輻射等有害因素易于引起疲勞，長時間的積累可影響機體的生 殖功能，損傷生殖系統，生殖系統對于輻射的反應尤為敏感。電鏡觀察可見C2和C3組精細 胞形態和精子形態與模型組相比有一定程度的改善。
[0263] 高溫、高濕等有害因素可引起食欲不振、精神萎靡，導致消化系統功能紊亂，加重 疲乏感。小腸是食物消化和吸收的重要部位，其內整齊有序的絨毛結構是小腸正常消化和 吸收的重要保障。電鏡觀察可見，與模型組相比C2和C3組小腸絨毛形態和上皮細胞形態 明顯改善，其中C3組小腸絨毛及上皮細胞形態完全正常，表明C3可保護小腸絨毛結構，并 修復損傷結構，抑制上皮細胞凋亡，保護小腸結構，維持消化系統的正常功能而起到抗疲勞 作用。
[0264] 實驗表明，C2和C3對于特殊環境下的疲勞損傷均具有緩解作用，尤其以C3的緩 解效果較好。能夠顯著減低海馬內5-HT含量，抑制神經元細胞、淋巴細胞和小腸絨毛細胞 的凋亡，維持細胞的正常形態，保護海馬、胸腺和小腸組織免受損害，促進損傷后修復，維持 機體神經系統、免疫系統和消化系統的正常功能而起到抗疲勞的作用。
[0265] 實施例17急性毒性實驗
[0266] ICR小鼠50只，雌雄各半，體重18_22g，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提 供，許可證號SCXK (滬）2012-0002。實驗期間，動物飼養環境保持在室溫25+2°C，相對濕度 50-70 %，小鼠可自由攝取食物和水。
[0267] 取實施例1，例3的提取物，分別加入0. 5% CMC-Na溶液中，邊加邊攪拌直至達到 飽和，得到最大濃度混懸液，該過程中記錄加入的量，計算其最大濃度。
[0268] 小鼠在動物實驗中心適應性喂養3天后，隨機抽取18只小鼠，雌雄各半，按體重 隨機分為3組，每組6只。實驗前禁食12h，分別將已配置好的混懸液按最大濃度最大體積 (0. 8ml/只）一次性灌胃給藥，給藥后2h禁食，24h內及時觀察小鼠行為活動、呼吸情況、口 鼻分泌物、有無嘔吐、有無中毒和死亡等現象，發現部分小鼠活動減少，閉目不動，12h后恢 復正常，持續觀察7天，小鼠無異常情況和死亡現象，由此可知上述三種藥物無法計算LD 5。， 根據實驗情況可測其MTD。
[0269] 實驗結果表明，上述三種復方刺五加提取物均無明顯急性毒性。其最大濃度最大 體積時的給藥劑量均超過人（60kg)臨床常用劑量的300倍以上，因此是安全的。
[0270] 實施例18提取物制劑的制備
[0271] 本發明制備片劑、膠囊、顆粒劑、口服液等口服制劑，輔料可以是乳糖、淀粉、糊精、 硬脂酸鹽等，按常規技術制備。
[0272] 一、顆粒劑的制備
[0273] 取實施例1-8任一所述的提取物加入輔料制粒，干燥，過300目篩。包裝成10g/ 袋，成品顆粒。所述的輔料可以是乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸鹽等。
[0274] 取實施例1-8任一所述的提取物的浸膏粉適量，加入乳糖混勻，浸膏粉：乳糖= 8 : 1，然后噴入乙醇并攪拌混合，用12目篩網制成濕顆粒，于60°C干燥，再過12目篩1次， 并用60目篩分出細粉，收集不能通過12目篩、能通過60目篩的顆粒和粉末，包裝。
[0275] 二、片劑/膠囊的制備
[0276] 取實施例1-8任一所述的提取物100g，加淀粉，乳糖，微晶纖維素，淀粉漿適量，硬 脂酸鎂1 %，分別過80目篩，混勻，再過40目篩3次，將上述混合粉用7 %淀粉漿制軟材， 過24目篩粒，50°C干燥2小時，干燥顆粒過30目篩整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，壓片，得片劑 1000 片。
[0277] 三、袋泡茶的制備
[0278] 取實施例1-8任一所述的提取物100_300g，加雞骨草1350g，荷葉500克，加白砂 糖及其他輔料適量，以袋泡茶包裝材料分裝成1〇〇〇包即可。
[0279] 或以提取物500g，加茶葉1500克，白砂糖或其他輔料適量，以袋泡茶包裝材料分 裝成1000包即可。
[0280] 四、口服液/合劑的制備
[0281] 取實施例1-8任一所述的提取物，加2倍量酒精，攪拌沉淀過夜。取上清液，濃縮至 稠浸膏；加適當制藥輔料，制成口服液、合劑。制藥輔料可根據需要選擇添加矯味劑和防腐 劑，常用的矯味劑有蜂蜜、單糖漿、甘草酸和甜菊苷等；防腐劑有山梨酸、苯甲酸和丙酸等。
[0282] 五、口服液/飲料的制備
[0283] 取實施例9所述的醇沉后的上清液，過濾回收乙醇至無醇味后配液，過濾，灌封， 滅菌，制得口服液或飲料成品。
[0284] 以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人 員，在不脫離本發明方法的前提下，還可以做出若干改進和補充，這些改進和補充也應視為 本發明的保護范圍。
【主權項】
1. 一種抗疲勞的中藥組合提取物，其特征在于，所述的中藥組合提取物由以下重量份 的原料藥制備而得：刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 :5 :1。2. 根據權利要求1所述的中藥組合提取物的制備方法，其特征在于，所述的制備方法 包括以下步驟：按權利要求1所述的重量份稱取各原料藥，將所述原料藥進行煎煮、濃縮， 加入提取溶劑乙醇行醇沉，醇沉后取上清液濃縮得濃縮液。3. 根據權利要求1所述的中藥組合提取物的制備方法，其特征在于，所述的制備方法 包括以下步驟：按權利要求1所述的重量份稱取各原料藥，將所述原料藥進行煎煮、濃縮， 加入提取溶劑乙醇行醇沉，醇沉后取上清液濃縮過大孔樹脂柱，以30-75%乙醇收集洗脫部 位，減壓濃縮干燥得提取物。4. 根據權利要求1所述的中藥組合提取物的制備方法，其特征在于，所述的制備方法 包括以下步驟：按權利要求1所述的重量份稱取各原料藥，將所述原料藥粉碎，以30-95% 乙醇回流，提取液濃縮，過大孔樹脂柱，收集30-75 %乙醇洗脫部位，減壓濃縮干燥得提取 物。5. 根據權利要求1所述的中藥組合提取物的制備方法，其特征在于，所述的制備方 法包括以下步驟：按權利要求1所述的重量份稱取各原料藥，將所述原料藥洗凈、粉碎，以 30-95%乙醇，以2-3ml/min的速度滲漉，收集15-20倍量乙醇體積的滲漉液，濃縮，用蒸餾 水調節比重至1. 02~1. 05g/ml，pH 5-6,濾液過大孔樹脂柱，收集30-75%乙醇洗脫部位， 洗脫液減壓濃縮干燥得到提取物。6. 根據權利要求3-5任一所述的制備方法，其特征在于，所述的大孔樹脂選自D-101、 AB-8、ZTC-1 或 SP905。7. 根據權利要求2-6任一所述的制備方法制備的中藥組合提取物。8. 根據權利要求1或7任一所述的中藥組合提取物在制備治療或預防疲勞及特殊環境 下疲勞損傷的藥物或食物中的應用。9. 根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述的疲勞為特殊環境下的疲勞損傷，所 述的特殊環境為包括有害氣體、噪音、高溫、高濕或核輻射的密閉環境。10. 根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述的藥物的劑型是口服液、片劑、膠 囊、顆粒劑、滴丸劑、丸劑、□嚼片、含片、□香糖、膏劑、合劑、貼劑或凝膠劑。
【專利摘要】本發明涉及一種抗疲勞的中藥組合提取物，所述的中藥組合提取物由以下重量份的原料藥制備而得：刺五加、黃芪和明黨參的比例為5：5：1。本發明還提供該中藥組合提取物的制備方法及應用。本發明的中藥組合提取物的主要組成成分為木脂素類、皂苷類和黃酮類化合物，經藥理實驗證明該提取物對疲勞及特殊環境下疲勞損傷具有顯著緩解作用，安全性高，能用于制備抗疲勞的藥物或食品。
【IPC分類】A61K36/481, A61P39/00, A23G4/12
【公開號】CN105726622
【申請號】CN201410742421
【發明人】黃寶康, 季曉, 陳璐, 張乃丹, 王曉鈺
【申請人】中國人民解放軍第二軍醫大學
【公開日】2016年7月6日
【申請日】2014年12月8日