一種抗疲勞的中藥組合提取物及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種中藥組合及其提取物，具體地說，一種抗疲勞尤其是特殊環境疲 勞損傷的中藥組合提取物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 疲勞是受多因素影響引起的機體內許多生理生化變化的綜合反應。分為軀體性 疲勞和心理性疲勞，軀體性疲勞主要表現為運動能力的下降，心理性疲勞主要表現為行為 與意志的消極改變。疲勞在一定的范圍內是一種正常的生理現象，隨著社會工作與生活節 奏也越來越快，來自工作、家庭、住房、醫療、人際關系等的壓力使人長期處于緊張狀態，易 于引發軀體性疲勞和心理性疲勞，若長期得不到緩解就會轉變為病理性的疲勞，危害人的 身心健康，使生活質量嚴重下降，因而尋找有效并且安全的抗疲勞藥物已成為現代醫學的 一個研究重點。在軍事領域，軍事作業常需在特殊環境下進行，如高原低氧地區、寒冷地區 和炎熱地區等自然環境和密閉艙室、地下掩蔽工程等特殊環境，大多數環境惡劣，受高溫、 高濕、噪音、振動、電離輻射、有害氣體等多種復合因素影響，官兵的體力消耗和精神負擔加 重，長期處于該環境中將對作業人員的身體和心理健康產生危害，可能出現精神不集中、焦 慮、疲勞、機體內分泌紊亂、免疫力下降等疲勞癥狀，該狀態會嚴重影響軍事人員的作業效 率和戰斗力。因此，抗特殊環境下疲勞損傷藥物的研究對軍事醫學也具有重要的意義。 [0003]目前市面上的抗疲勞藥物多是一些化學藥物，這些藥物在發揮治療效果的同時 也帶來了不同程度的副作用。中藥具有活性成分多、作用緩和、副作用小等特點，作為 抗疲勞藥物的研究和開發具有廣闊的前景。刺五加為五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus(Rupr. et Maxim. )Harms的干燥根和根莖或莖[1]，其主要藥效成分為三砲 皂苷類、木脂素類和紫錐菊多酚（丁香苷和刺五加苷E)，藥理實驗證實刺五加具有抗潰 瘍、抗腫瘤、抗炎、抗福射和保護肝臟等作用。黃苗藥材為豆科植物蒙古黃苗Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao 或膜英黃苗 Astragalus membranaceus(Fisch. )Bge.的干燥根[2]，藥理研究表明黃苗具有增強機體免疫力、耐缺 氧、抗應激、調節血壓、降血糖、抗衰老、抗癌、強心、保護肝臟和腎臟的作用。明黨參藥材為 傘形科植物明黨參Changium smyrnioides Wolff的干燥根[3]，其含有揮發油、不飽和脂肪 油、多糖、氨基酸、磷脂、膽堿、微量元素等成分。
[0004] 發明人研制的含刺五加、黃芪和明黨參的復方刺五加制劑曾作為院內制劑用于緩 解疲勞。中醫理論認為疲勞的病位主要在肝、脾、腎三臟，其病機主要為脾腎虧虛，肝實致氣 滯血瘀，臟腑功能失調，機體氣血陰陽正氣不足等。刺五加味辛、微苦，溫，歸脾、腎、心經， 具有益氣健脾，補腎安神的功效；黃芪味甘、微溫，歸脾肺經，既能補益脾氣，又能升提中氣； 明黨參味甘、微苦，微寒，歸肺、脾、肝經，能夠養陰和胃，平肝解毒。發明人據此將上述三味 藥組方溫涼共濟，調補肝腎，兼顧脾胃，達到抗疲勞作用。
[0005] 發明人通過前期研究，并通過小鼠負重游泳建立持續運動所致疲勞模型，對由刺 五加、黃芪和明黨參配伍組成的復方進行組方優化并驗證，在此基礎上對大孔樹脂分離得 到的不同濃度乙醇洗脫部位進行抗疲勞篩選，并探討其作用機制。采用UHPLC-Q-TOF-MS聯 用技術對有效部位中的化學成分進行分析，明確其主要成分。并通過模擬密閉艙室動物模 型證實其對抗特殊環境下產生的疲勞具有顯著作用。
[0006] 參考文獻：
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[0009] [1]國家藥典委員會.中國藥典.一部.2010版.北京：中國醫藥科技出版社， 2010 ：195
【發明內容】
[0010] 本發明的目的是針對現有抗疲勞藥物的不足，缺少安全有效的特殊環境疲勞損傷 的防治藥物，研制一種抗疲勞尤其是特殊環境下疲勞損傷的中藥組合及其濃縮液或提取 物。
[0011] 本發明的再一的目的是，提供上述中藥組合提取物的制備方法。
[0012] 本發明的另一的目的是，提供上述中藥組合提取物的應用。
[0013] 為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：一種抗疲勞的中藥組合提取物，所述 中藥組合由下列重量份的原料藥制成：刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1。
[0014] 以下制備方法制備的中藥組合提取物。
[0015] 為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：一種抗疲勞的中藥組合提取 物的制備方法，所述的制備方法包括以下步驟：按刺五加、黃芪和明黨參的重量份比例為 5 : 5 : 1稱取各原料藥，將所述原料藥加水進行煎煮、濃縮，加入乙醇進行醇沉，醇沉后取 上清液濃縮得濃縮液。
[0016] 所述的制備方法包括以下步驟：按刺五加、黃芪和明黨參的重量份比例為 5 : 5 : 1稱取各原料藥，將所述原料藥加水進行煎煮、濃縮，加入乙醇行醇沉，醇沉后取上 清液濃縮過大孔樹脂柱，收集30-75%乙醇洗脫部位，減壓濃縮干燥得提取物。
[0017] 所述的制備方法包括以下步驟：按刺五加、黃芪和明黨參的重量份比例為 5 : 5 : 1稱取各原料藥，將所述原料藥粉碎，以30-95%乙醇回流，濾液濃縮，過大孔樹脂 柱，收集30-75%乙醇洗脫部位，洗脫液減壓濃縮干燥得提取物。
[0018] 所述的制備方法包括以下步驟：按刺五加、黃芪和明黨參的重量份比例為 5 : 5 : 1稱取各原料藥，將所述原料藥洗凈、粉碎，以提取溶劑30-95%乙醇，以2-3ml/min 的速度滲漉，收集15-20倍量乙醇體積的滲漉液，濃縮，用蒸餾水調節比重至1. 02~1. 05g/ ml，pH 5-6,濾液通過大孔樹脂柱，并棄去流出液，用水洗脫大孔樹脂柱，棄去洗脫液，繼續 用30-75%乙醇洗脫大孔樹脂柱，收集30-75%部位洗脫液，洗脫液減壓濃縮干燥得到提取 物。
[0019] 所述的大孔樹脂選自D-101、AB-8、ZTC-1或SP905。
[0020] 為實現上述第三個目的，本發明采取的技術方案是：所述的中藥組合提取物在制 備治療或預防抗疲勞及特殊環境下疲勞損傷的藥物或食物中的應用。
[0021] 所述的疲勞為特殊環境下的疲勞損傷，所述的特殊環境為包括有害氣體、噪音、高 溫、高濕或核輻射的密閉環境。
[0022] 所述的藥物的劑型是口服液、片劑、膠囊、顆粒劑、滴丸劑、丸劑、口嚼片、含片、口 香糖、膏劑、合劑、貼劑或凝膠劑。
[0023] 本發明優點在于：
[0024] 本發明以刺五加、黃芪和明黨參三味藥組方，達到溫涼共濟，五臟共補，調補肝腎， 兼顧脾胃，達到對單一藥物或其他藥物難以達效的復合疲勞的防治作用，本發明以刺五加、 黃芪和明黨參為主要原料制備的提取物，藥理實驗證明其對疲勞及特殊環境下疲勞損傷具 有顯著的預防作用，無毒副作用，能夠用于制備抗疲勞的藥物或食品。
【附圖說明】
[0025] 附圖1是大孔樹脂不同濃度乙醇洗脫物對小鼠血清TG的影響（η = 10)，其中，*P < 0. 05vs control〇
[0026] 附圖2是大孔樹脂不同濃度乙醇洗脫部位對小鼠血清LDH的影響（η = 10)，其中， < 0. 05,林P < 0.0 lvs control。
[0027] 附圖3是大孔樹脂不同濃度乙醇洗脫部位對小鼠血清CK的影響（η = 10)，其中， < 0. 05,林P < 0.0 lvs control。
[0028] 附圖4是復方刺五加對小鼠體重的影響（η = 10)。
[0029] 附圖5是復方刺五加對小鼠海馬神經元細胞超微結構的影響，其中，A :Model B : Control C :C2HD D :C2MD E :C3HD F :C3MD ;上列 A-F為細胞結構（X5000,標尺=2 μπι)，下 列A-F為突觸泡結構（Χ6000,標尺=1· 67 μπι)。
[0030] 附圖6是復方刺五加對小鼠胸腺內淋巴細胞超微結構的影響，其中，A :Model Β : Control C :C2HD D :C2MD E :C3HD F :C3MD ; (X4000,標尺=2. 5 μπι) 〇
[0031] 附圖7是復方刺五加對小鼠睪丸內精細胞和精子超微結構的影響，其中，A :Model B Control C :C2HD D :C2MD E :C3HD F :C3MD ;上列A-F為細胞結構（X5000,標尺=2 μπι)， 下列A-F為精子形態（X 6000,標尺=1.67 μ m)。
[0032] 附圖8是復方刺五加對小鼠小腸絨毛和上皮細胞超微結構的影響，其中，A :Model B:Control C:C2HD D:C2MD E:C3HD F:C3MD;上列 A-F 為小腸絨毛結構（X8000,標尺= 1. 25 μ m)，下列A-F為小腸上皮細胞結構（X 10000,標尺=1 μ m)。
【具體實施方式】
[0033] 下面結合附圖對本發明提供的【具體實施方式】作詳細說明。
[0034] 實施例1中藥提取物的制備（一）
[0035] 取刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1洗凈，置入提取容器內，加8-10倍蒸 餾水，煎煮2次，每次煎煮的時間為1. 5小時。將數次提取的藥液合并，濃縮，加入乙醇進行 醇沉，醇沉后的上清液減壓濃縮干燥得提取物C1。
[0036] 實施例2中藥提取物的制備（二）
[0037] 取刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1洗凈，置提取容器內加8-10倍蒸餾 水煎煮2次，每次煎煮的時間為1. 5小時。將數次提取的藥液合并，濃縮至比重為1. 01~ 1. 05,加入乙醇至含醇70-80%進行醇沉，醇沉后的上清液濃縮至比重1. 01~1. 04,將提取 液過AB-8大孔樹脂柱。流速1. 5-1. 8BV/h，收集30-75%乙醇洗脫部位，減壓濃縮干燥得提 取物。
[0038] 實施例3中藥提取物的制備（三）
[0039] 取刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1洗凈，置提取容器內加8-10倍蒸餾 水煎煮2次，每次煎煮的時間為1. 5小時。將數次提取的藥液合并，濃縮至比重為1. 01~ 1. 05,加入乙醇至含醇70-80%進行醇沉，醇沉后的上清液濃縮至比重1. 01~1. 04,將提取 液過ZTC-1大孔樹脂柱。流速1. 5-1. 8BV/h，收集30-75%乙醇洗脫部位，洗脫液減壓濃縮 干燥得提取物。
[0040] 其中收集30%乙醇洗脫部位減壓濃縮干燥得提取物C2,收集50% -70%乙醇洗脫 部位減壓濃縮干燥得提取物C3。
[0041] 實施例4中藥提取物的制備（四）
[0042] 按刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1粉碎，以8-10倍量的70-95%乙醇回 流3次，每次2小時，提取液濃縮，減壓濃縮干燥得提取物。
[0043] 實施例5中藥提取物的制備（五）
[0044] 按刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1粉碎，以8-10倍量的95%乙醇回流 3次，每次2小時，濾液濃縮，過D-101大孔樹脂柱，收集30-75%乙醇洗脫部位，減壓濃縮干 燥得提取物。
[0045] 實施例6中藥提取物的制備（六）
[0046] 按比例取刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1粉碎，加入提取溶劑70-95% 乙醇浸泡24小時后，進行滲漉，收集15-20倍體積的滲漉液，得提取液；將上述提取液濃縮， 蒸餾水調節比重至1. 03-1. 05g/ml，上D-101大孔樹脂柱，收集30-75%乙醇洗脫部位，洗脫 液減壓濃縮干燥得到提取物。
[0047] 實施例7中藥提取物的制備（七）
[0048] 按刺五加、黃芪和明黨參的比例為5