一種具有免疫調節作用的雙鏈聚核苷酸—ε-聚賴氨酸復合物及其制備使用方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及醫藥領域，具體的說本發明提供一種具有免疫調節作用的雙鏈聚核巧 酸一E-聚賴氨酸復合物及其制備使用方法。本發明亦提供一種具有引發增強免疫反應與改 變免疫反應類型作用的免疫原組合物及其制備使用方法。
【背景技術】
[0002] -、雙鏈聚核巧酸:雙鏈聚核巧酸或其衍生物具有多種藥理活性，來源是天然提取 或人工合成。人工合成的雙鏈聚核巧酸如聚肌胞(P〇lyi:c)可誘導體內產生干擾素，保護細 胞免受病毒感染，具有防治病毒性疾病等療效;天然提取的雙鏈聚核巧酸如呼腸孤病毒科 提取的病毒雙鏈RNA具有抗病毒、抗腫瘤等活性。
[0003] 聚肌胞(P〇lWC，PIC)是人工合成的聚次黃嚷嶺核巧酸(PolyI)和聚胞喀晚核巧酸 巧OlyC)配對后的雙鏈產物，是一種高效干擾素誘生劑。但由于PIC易于被人及靈長目動物 血清中的核酸酶水解，限制了臨床使用。
[0004] 聚肌胞主要用于預防和治療病毒性感染，如流感、病毒性肝炎、瘤疹性結膜炎。也 試用于腫瘤的輔助性治療。少數病人有一過性低熱，偶見乏力、口干、惡屯、等。
[0005] 二、E-聚賴氨酸
[0006] 1977年日本學者S.化ima和H.Sakai在從微生物中篩選的過程中，發現一株放線菌 No. 346能產生大量而穩定的化agendo~化Sitive (簡寫為DP)物質，通過對酸水解產物的分 析及結構分析，證實該DP物質是一種含有25-30個賴氨酸殘基的同型單體聚合物，稱為E-多 聚賴氨酸（E-PL)。
[0007] E-聚賴氨酸具有很好的殺菌能力和熱穩定性。E-聚賴氨酸的作用機理主要表現在 如下3個方面：
[000引（1)作用于細胞壁和細胞膜系統；
[0009] (2)作用于遺傳物質或遺傳微粒結構；
[0010] (3)作用于酶或功能蛋白。
[0011] E-聚賴氨酸富含陽離子，與帶有陰離子的物質有強的靜電作用力并且對生物膜有 良好的穿透力，基于運一特性多聚賴氨酸可用于某些藥物的載體，因此在醫療和制藥方面 得到廣泛應用。E-聚賴氨酸與氨甲嚷嶺（治療白血病、腫瘤的藥物）聚合，能提高藥物的療 效。
[001^ S、特異性免疫的類型
[0013] 特異性免疫（specific immunity)又稱獲得性免疫或適應性免疫，運種免疫只針 對一種病原。是獲得免疫經后天感染(病愈或無癥狀的感染)或人工預防接種(菌苗、疫苗、 類毒素、免疫球蛋白等)而使機體獲得抵抗感染能力。一般是在微生物等抗原物質刺激后才 形成的(免疫球蛋白、免疫淋己細胞），并能與該抗原起特異性反應。
[0014] 特異性免疫類型--細胞免疫：
[0015] T細胞是參與細胞免疫的淋己細胞，受到抗原刺激后，轉化為致敏淋己細胞，并表 現出特異性免疫應答，免疫應答只能通過致敏淋己細胞傳遞，故稱細胞免疫。免疫過程通過 感應、反應、效應=個階段，在反應階段致敏淋己細胞再次與抗原接觸時，便釋放出多種淋 己因子(轉移因子、移動抑制因子，激活因子，皮膚反應因子，淋己毒，干擾素），與巨隧細胞， 殺傷性T細胞協同發揮免疫功能。細胞免疫主要通過抗感染;免疫監視;移植排斥;參與遲發 型變態反應起作用。其次輔助性T細胞與抑制性T細胞還參與體液免疫的調節。
[0016] 特異性免疫類型一體液免疫：
[0017] B細胞是參與體液免疫的致敏B細胞。在抗原刺激下轉化為漿細胞，合成免疫球蛋 白，能與祀抗原結合的免疫球蛋白即為抗體。免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig)分為五類。
[0018] ① IgG是血清中含量最多的免疫球蛋白，唯一能通過胎盤的抗體，具有抗菌、抗病 毒、抗毒素等特性，對毒性產物起中和、沉淀、補體結合作用，臨床上所用丙種球蛋白即為 1祐。
[0019] ②IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是個體發育中最先合成的抗體，因為它是一種 巨球蛋白，故不能通過胎盤。血清中檢出特異性IgM,作為傳染病早期診斷的標志，掲示新近 感染或持續感染，具有調理、殺菌、凝集作用。
[0020] ③IgA有兩型即分泌與血清型。分泌型IgA存在于鼻、支氣管分泌物、唾液、胃腸液 及初乳中。其作用是將病原體粘附于粘膜表面，阻止擴散。血清型IgA,免疫功能尚不完全清 楚。④I巧是出現最晚的免疫球蛋白，可致敏肥大細胞及嗜堿性粒細胞，使之脫顆粒，釋放組 織胺。寄生蟲感染，血清I巧含量增高。
[0021] ⑤I曲其免疫功能不清。
[0022] 還有一類無T與B淋己細胞標志的細胞，具有抗體依賴細胞介導的細胞毒作用能殺 傷特異性抗體結合的祀細胞，又稱殺傷細胞化i 1 Ier cel 1 )，簡稱K細胞，參與ADCC效應，在 抗病毒，抗寄生蟲感染中起殺作用。再一類具有自然殺傷作用的細胞，稱為自然殺傷細胞 (natural killer cell)即NK細胞。在殺傷祀細胞時，不需要抗體與補體參與。
[0023] 特異性免疫形成過程
[0024] 在抗原刺激下，機體的特異性免疫應答一般可分為感應、反應和效應3個階段。分 為=個階段:1感應階段是抗原處理、呈遞和識別的階段；
[0025] 2.反應階段是B細胞、T細胞增殖分化，W及記憶細胞形成的階段；
[0026] 3.效應階段是效應T細胞、抗體和淋己因子發揮免疫效應的階段。
[0027] 如果某些病原體突破了第一道和第二道防線，即進入人體并生長繁殖，引起感染。 有的有癥狀，就是患病;有的沒有癥狀，稱作隱性感染。不論是哪一種情況，機體都經歷了 一次與病原體斗爭的過程，運種專口針對某一種病原體(抗原）的識別和殺滅作用稱為特異 性免疫。譬如得過傷寒病的人對傷寒桿菌有持久的免疫力，那是因為傷寒桿菌刺激機體產 生免疫應答，增加了巨隧細胞的吞隧功能，同時在體內還產生抗傷寒桿菌的抗體。人體的免 疫系統又能把傷寒桿菌運個"敵人"的特征長期"記憶"下來，如果再有傷寒桿菌進入，就會 很快被識別、被消滅。
[0028] 能進行免疫應答的免疫細胞有很多種，最重要的是淋己細胞。它又分成兩種。兩種 細胞的發育成熟過程不一樣，一種是在胸腺內發育成熟，稱作T淋己細胞，是在骨髓內發育 成熟的為B淋己細胞。
[0029] 具有吞食異物的巨隧細胞也是一種重要的免疫細胞，它具有"加工廠"的作用，即 巨隧細胞吞隧異物(如細菌、腫瘤細胞等)后，對異物進行加工處理。處理后的異物(抗原)就 與T淋己細胞和B淋己細胞發生免疫反應，它本身也能直接殺滅異物或者產生細胞因子參與 免疫反應。
[0030] B淋己細胞受病原體刺激后，引起一系列變化，最終轉化成為能產生抗體的漿細 胞，所產生的抗體通過各種方式來消滅病原體，如溶解病原體，中和病原體產生的毒素，凝 集病原體使之成為較大顆粒讓吞隧細胞吞食消滅。漿細胞產生的抗體存在于機體的血液和 體液中，運種免疫反應就稱為體液免疫。
[0031] 經處理后的病原體刺激T淋己細胞后，也同樣引起一系列變化，最終轉化成能釋放 出淋己因子的致敏淋己細胞。淋己因子種類很多，作用也并不相同，它們積極地參與到免疫 反應中，運種免疫反應通常稱為細胞免疫。體液免疫和細胞免疫二者之間不是孤立的，它們 相輔相成，互相協作，共同發揮免疫作用。
[0032] 特異性免疫引發與增強一免疫佐劑
[0033] 又稱非特異性免疫增生劑。本身不具抗原性，但同抗原一起或預先注射到機體內 能增強免疫原性(見抗原)或改變免疫反應類型。
[0034] 種類很多，目前尚無統一的分類方法，常用的佐劑可分為4類:無機佐劑，如氨氧化 侶，明抓等;有機佐劑，微生物及其產物如分枝桿菌(結核桿菌、卡介苗）、短小桿菌、百日咳 桿菌、內毒素、細菌提取物(胞壁酷二膚)等;合成佐劑，如人工合成的雙鏈多聚核巧酸(雙鏈 多聚腺巧酸、尿巧酸）、左旋咪挫、異丙肌巧等;油劑，如費氏佐劑、花生油乳化佐劑、礦物油、 植物油等。弗氏佐劑目前在實驗動物中最常用，又可分為弗氏不完全佐劑和完全佐劑兩種。 不完全佐劑是油劑(石蠟油或植物油）與乳化劑（羊毛脂或吐溫(Tween)SO)相混合而成，當 其再與抗原混合，即成油包水乳劑，可用于免疫注射。在不完全佐劑中加入死的分枝桿菌， 即成為弗氏完全佐劑。完全佐劑的免疫強度大于不完全佐劑。該佐劑主要用于動物實驗，不 適宜于人類使用。而且動物多次注射