藥組。
[0158] 根據所加入的藥物將實驗分為4組：
[0159] 實驗組1:加入青葛締，終濃度為1測。
[0160] 實驗組2:加入青葛締，終濃度為如M。
[0161] 實驗組3:加入青葛締，終濃度為lOiiM。
[0162] 實驗組4:加入青葛締，終濃度為20iiM。
[0163] 2.3細胞培養24小時后收集細胞后，PBS洗2次細胞，1000巧m，4°C離屯、，lOmin。
[0164] 2.4將IX IO6個/ml細胞重懸于緩沖液中。
[01化]2.5取500ul細胞懸液加入試管中。
[0166] 2.6加入加1 annexin V-門TC,加1艦化丙晚入試管中。
[0167] 2.7 避光，室溫lOmin。
[0168] 2.8上機檢測。
[0169] 3.實驗結果
[0170] 表7青葛締對QGY-7703細胞調亡的影響
[0172] 結果如表7所示，當青葛締的最終終濃度為20iiM時，QGY-7703細胞得調亡率高達 50% W上，可見青葛締能誘導腫瘤細胞調亡。
[0173] 例3(藥理、藥效實驗）
[0174] 實驗一青葛締對小鼠肝腎損傷實驗
[0175] 實驗目的:研究青葛締對小鼠肝腎的損傷。
[0176] 1.實驗材料
[0177] 1.1實驗動物
[0178] 動物6~8周齡的NODSCID小鼠30只，體重18~22g，由北京維通利華實驗動物技術 有限公司提供，合格證號：11400700123247。
[0179] 1.2 試劑
[0180] 花生油(廣東長興食品貿易有限公司，批號090407);胎牛血清化yclone公司）；憐 酸鹽緩沖液(PBS，Hyclone開發公司）；肥染液(谷歌生物）；無水乙醇(大茂）；二甲苯(大茂）。
[0181] 1.3受試藥物
[0182] 青葛締:購于天津±蘭科技有限公司，批號A777550。取青葛締至燒杯中，加入花生 油作為溶媒，加熱，攬拌使溶解，放冷后加花生油至葛締在花生油中的質量濃度為5mg/ml， 即得青葛締油溶液。
[0183] 1.4 儀器
[0184] 低速臺式自動平衡離屯、機(DT5-3);C02培養箱（170R);倒置相差顯微鏡(CKX41奧 林己斯）；自動細胞計數儀(ounts化r IC-100);生物安全柜(BSC-1000IIAC);全自動染色封 片一體化工作站化EICA ST5020)，組織包埋機化isTOSTAR)，全自動封閉式組織脫水機 (SHAND0N PATACENTRE)，石蠟切片機(LEICA RM2245)。
[01化]2.方法
[01化]蘇木素-伊紅化emato巧lin-eosin，肥)染色：用石蠟切片機進行石蠟樣本的切片， 厚度3.5皿，連續切片，染色程序為烤片干燥20分鐘，二甲苯2次X 10分鐘，無水乙醇2次X 2 分鐘，95 %乙醇1分鐘，80 %乙醇1分鐘，70 %乙醇1分鐘，水洗1分鐘，蘇木素8分鐘，蘇木素10 分鐘，水洗2次X 1分鐘，0.5 %鹽酸酒精10秒，水洗10分鐘，伊紅2分鐘，水洗1分鐘，80 %乙醇 5秒，85%乙醇5秒，90%乙醇5秒，95 %乙醇1分鐘，無水乙醇2次X 2分鐘，無水乙醇3分鐘，二 甲苯2次X 2分鐘，結束染色后直接用中性樹膠封片。
[0187] 2.1實驗結果
[0188] 結果如圖1所示，青葛締對動物肝腎無明顯影響。其中，肝臟切片可見肝竇、肝索形 態結構完整，肝臟未見細胞核水腫，細胞質無病變;腎臟切片可見腎小球結構完整，且數量 與對照組一致，細胞質、細胞核均未見病變形態。
[0189] 例4(藥理、藥效實驗）
[0190] 實驗一青葛締對人胎肝成纖維細胞化iver fibroblast)增殖的影響
[0191] 實驗目的：研究青葛締對人胎肝成纖維細胞化iver fibroblast)增殖的影響。
[0192] 1.實驗材料
[0193] 1.1細胞株人胎肝成纖維細胞(Xiver fibroblast)
[0194] 1.2藥材、試劑和儀器青葛締:購于天津±蘭科技有限公司，批號A777550。胎牛 血清化yclone公司），MEM培養基(Gibco公司），DMS0(sigma公司），MTT(sigma公司）；膜蛋白 酶(G化CO公司）。倒置相差顯微鏡（CKX41奧林己斯）；BioTek化X800酶標儀（美國BioTek公 司）；低速臺式自動平衡離屯、機(DT5-3)。
[0195] 2.實驗方法
[0196] 2.1人胎肝成纖維細胞化iver fibroblast)培養生長至指數生長期時，即W 0.25 %膜蛋白酶消化，1000 X g離屯、3min，細胞沉淀W10 %FBS的DMEM培養基調整至5 X 1 〇4 個/ml，96孔培養板每孔接種20化1，置于37°C、5%C02及飽和濕度條件下培養24小時。
[0197] 2.2每組設5個復孔，每孔中加入不同濃度的青葛締，上述條件下繼續培養24小 時。
[019引陰性對照組：即不加藥組。
[0199] 根據所加入的藥物將實驗分為4組：
[0200] 實驗組1:加入青葛締，終濃度為化M。
[0201] 實驗組2:加入青葛締，終濃度為如M。
[0202] 實驗組3:加入青葛締，終濃度為10測。
[0203] 實驗組4:加入青葛締，終濃度為20iiM。
[0204] 2.3細胞培養24小時后，吸走培養基，每孔加入10化1的MTT(四甲基偶氮挫鹽)試 劑，37°C，5%C〇2及飽和濕度條件下繼續培養4小時。
[02化]2.4小屯、吸去孔內液體，每孔加入150ul二甲基亞諷，置搖床上低速振蕩lOmin，使 結晶充分溶解。
[0206] 用酶標儀測定在波長為450nm處的吸光度值(0D)，570nm作為參考波長，細胞生長 抑制率按公式:抑制率=(對照孔OD值-實驗孔OD值)/對照孔OD值）X 100%計算。
[0207] 3.實驗結果
[0208] 表8青葛締對人胎肝成纖維細胞增殖的影響
[0210] 結果如表8所示，青葛締對人胎肝成纖維細胞化iver fibroblast)無毒性。
[0211] 實驗二青葛締對ipse誘導分化的神經干細胞(NSC)增殖的影響
[0212] 實驗目的:研究青葛締對ipse誘導分化的神經干細胞(NSC)增殖的影響
[0213] I.實驗材料
[0214] 1.1細胞株ipse誘導分化的神經干細胞(NSC)
[0215] 1.2藥材、試劑和儀器青葛締:購于天津±蘭科技有限公司，批號A777550。胎牛 血清化yclone公司），MEM培養基(Gibco公司），DMS0(sigma公司），MTT(sigma公司）；膜蛋白 酶(G化CO公司）。倒置相差顯微鏡（CKX41奧林己斯）；BioTek化X800酶標儀（美國BioTek公 司）；低速臺式自動平衡離屯、機(DT5-3)。
[0216] 2.實驗方法
[0217] 2.1 NSC細胞培養生長至指數生長期時，即WO. 25 %膜蛋白酶消化，1000 X g離屯、 Smin，細胞沉淀W神經干細胞培養基調整至5 X IO4個/ml，96孔培養板每孔接種20化1，置于 37°C、5 % C〇2及飽和濕度條件下培養24小時。
[0218] 2.2每組設5個復孔，每孔中加入不同濃度的青葛締，上述條件下繼續培養24小 時。
[0219] 陰性對照組：即不加藥組。
[0220] 根據所加入的藥物將實驗分為4組：
[0221] 實驗組1:加入青葛締，終濃度為1測。
[0222] 實驗組2:加入青葛締，終濃度為如M。
[0223] 實驗組3:加入青葛締，終濃度為10測。
[0224] 實驗組4:加入青葛締，終濃度為20iiM。
[0225] 2.3細胞培養24小時后，吸走培養基，每孔加入10化1的MTT(四甲基偶氮挫鹽)試 劑，37°C，5%C〇2及飽和濕度條件下繼續培養4小時。
[0。6] 2.4小屯、吸去孔內液體，每孔加入150ul二甲基亞諷，置搖床上低速振蕩IOmin，使 結晶充分溶解。
[0227]用酶標儀測定在波長為450nm處的吸光度值(0D)，570nm作為參考波長，細胞生長 抑制率按公式:抑制率=(對照孔OD值-實驗孔OD值)/對照孔OD值）X 100%計算。
[022引3.實驗結果：
[0229]表9青葛締對NSC細胞增殖的影響
[0231 ]結果如表9所示，青葛締低濃度能促進NSC細胞增殖，高濃度能抑制NCS細胞的增 殖，但青葛締濃度為時對NSC細胞的抑制率低于對腫瘤細胞的抑制率。故青葛締對NSC 細胞無毒性。
[0232] 實驗S青葛締對人腎小管上皮細胞(HK2)增殖的影響
[0233] 實驗目的:研究青葛締對人腎小管上皮細胞(HK2)增殖的影響
[0234] 1.實驗材料
[0235] 1.1細胞株人腎小管上皮細胞(HK2)
[0236] 1.2藥材、試劑和儀器青葛締:購于天津±蘭科技有限公司，批號A777550。胎牛 血清化yclone公司），MEM培養基(Gibco公司），DMS0(sigma公司），MTT(sigma公司）；膜蛋白 酶(G化CO公司）。倒置相差顯微鏡（CKX41奧林己斯）；BioTek化X800酶標儀（美國BioTek公 司）；低速臺式自動平衡離屯、機(DT5-3)。
[0237] 2.實驗方法
[023引2.1皿2細胞培養生長至指數生長期時，即Wo. 25 %膜蛋白酶消化，