青蒿烯在制備抗腫瘤藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種化合物的新應用，特別設及青葛締在制備抗腫瘤藥物方面的新應 用。
【背景技術】
[0002] 青葛締 (Ademi Sitene)來源于植物黃花葛，其分子式為Cl巧20〇5，化學結構式為
分子量為280.32，不溶于水，可溶于乙醇和乙酸和常用有機溶劑。青葛 締是從菊科艾屬植物黃花葛葉中提取分離得到的一種具有過氧橋的倍半祗內醋類化合物， 菊科艾屬植物用于治療追疾，中國古代醫術中早有記載。目前，青葛素及其衍生物作為高效 低毒的抗追疾藥己經得到了全世界的公認。青葛締 (Artemisitene)是青葛素合成的前體成 分之一，近年來研究發現，青葛素及其衍生物具有明顯的抗腫瘤作用。公開號為 CN104825443A的中國專利申請公開了青葛締的抗氧化應用，在世界上首次鑒定青葛締是 化f2的激活子，可作為食品輔助劑廣泛應用。在現有技術中，未有實驗數據證實青葛締具有 特定的抗腫瘤的藥理活性。
【發明內容】
[0003] 本發明所要解決的技術問題是提供青葛締的用途。
[0004] 實際上，上述青葛締的用途是青葛締在制備抗腫瘤藥物中的應用，其中所述的青 葛締的化學結構式為下式(I)所示，
[0006] 上述應用中，所述的藥物由青葛締和醫學上可接受的輔料組成，其中青葛締的重 量含量為0.5~30%。所述藥物可W是注射劑，也可W是常見的口服制劑，如片劑和軟膠囊。
[0007] 上述注射劑為每1000 ml含有青葛締500mg和氯化鋼9g的水溶液，且pH值為3.0~ 5.5 O
[0008] 上述軟膠囊的內容物由W下重量份的原料組成:青葛締30份，食用玉米油20份，稀 釋劑40份。
[0009] 上述片劑由青葛締和成形劑組成，其中青葛締的重量含量為2.3~2.5%。
[0010] 本發明所述的應用是利用青葛締抑制腫瘤細胞生長、誘導腫瘤細胞調亡，來達到 抗腫瘤目的的，因此，本發明所述的化合物在制備抗腫瘤藥物中的應用，具體是指所述的青 葛締在制備腫瘤細胞生長的抑制劑和腫瘤細胞調亡的誘導劑中的應用。
【附圖說明】
[00川圖巧小鼠肝腎切片肥染色顯微照片，其中左邊為肝，右邊為腎。
【具體實施方式】
[0012] 例1(藥理、藥效實驗）
[0013] 實驗一青葛締對人肝癌細胞株化P3B2.1-7皮下移植瘤的抑制實驗
[0014] 實驗目的:研究青葛締對小鼠肝癌移植瘤的抑制作用。
[001引 1.實驗材料
[0016] 1.1實驗動物
[0017] 動物6~8周齡的NODSCID小鼠30只，體重18~22g，由北京維通利華實驗動物技術 有限公司提供，合格證號：11400700123247。
[001引 1.2試劑
[0019]花生油（廣東長興食品貿易有限公司，批號090407);胎牛血清化yclone公司）；憐 酸鹽緩沖液(PBS ,Hyclone公司）。
[0020] 1.3受試藥物
[0021] 青葛締:購于天津±蘭科技有限公司，批號A777550。取青葛締置于燒杯中，加入花 生油作為溶媒，加熱，攬拌使溶解，放冷后加花生油至青葛締在花生油中的質量濃度為5mg/ ml,即得青葛締油溶液。
[0022] 1.4 儀器
[0023] 低速臺式自動平衡離屯、機(DT5-3);C02培養箱（170R);倒置相差顯微鏡(CKX41奧 林己斯）；自動細胞計數儀(ounts化r IC-100);生物安全柜(BSC-1000IIAC)。
[0024] 2.方法
[0025] (1)將人肝癌細胞株化P3B2.1-7傳代后，用0.25 %的膜蛋白酶消化細胞，用PBS調 整細胞數至IO7個/ml，得瘤液。
[0026] (2)取30只小鼠（18-22g/只），分別接種步驟1所得的瘤液0.1ml于右上肢皮下后， 被隨機分為W下4組：
[0027] 1)青葛締低劑量組:給予青葛締治療，25mg/kg;
[002引2)青葛締高劑量組組:給予青葛締治療，50mg/kg;
[0029] 3)陽性對照組:給予順銷(孤P)治療，20mg/kg;
[0030] 4)空白對照組:花生油腹腔注射。
[0031 ]當移植瘤最大直徑巧mm時，認為移植瘤接種成功，株細胞細胞在5天時全部成瘤。 成瘤后腹腔注射給藥，青葛締組每日給藥一次，連續10天，停藥次日稱重，解剖后剝離皮下 瘤體，稱瘤重；陽性對照組隔日給藥，連續五次，停藥次日稱重，解剖后剝離皮下瘤體，稱瘤 重;空白對照組腹腔注射花生油，每日給藥一次，連續10天，解剖后剝離皮下瘤體，稱瘤重。 按下式計算抑瘤率（％ )=(對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重X100%。 [003^ 3.結果
[0033]表1青葛締對人肝癌細胞株化p3B2.1-7皮下移植瘤大小的影響
[0035] 結果如表1所示，青葛締對人肝癌細胞株化p3B2.1-7皮下移植瘤的抑制作用隨劑 量增加而增大，其抑制腫瘤的效果與DDP相當。
[0036] 實驗二青葛締對人肝癌細胞株QGY-7703皮下移植瘤的抑制實驗
[0037] 實驗目的:研究青葛締對小鼠肝癌移植瘤的抑制作用。
[0038] 1.實驗材料
[0039] 1.1實驗動物
[0040] 動物6~8周齡的NODSCID小鼠30只，體重18~22g，由北京維通利華實驗動物技術 有限公司提供，合格證號：11400700123247。
[OOW 1.2 試劑
[0042] 花生油（廣東長興食品貿易有限公司，批號090407);胎牛血清化yclone公司）；憐 酸鹽緩沖液(PBS ,Hyclone公司）。
[0043] 1.3受試藥物
[0044] 青葛締:購于天津±蘭科技有限公司，批號A777550。取青葛締至燒杯中，加入花生 油作為溶媒，加熱，攬拌使溶解，放冷后加花生油至葛締在花生油中的質量濃度為5mg/ml即 得青葛締油溶液。
[0045] 1.4 儀器
[0046] 低速臺式自動平衡離屯、機(DT5-3);C02培養箱（170R);倒置相差顯微鏡(CKX41奧 林己斯）；自動細胞計數儀(〇unts1:ar IC-100);生物安全柜(BSC-1000IIAC);電子分析天平 (北京賽多利斯天平有限公司）；BioTek化X800酶標儀(美國BioTek公司）。
[0047] 2.方法
[004引（1)將人肝癌細胞株QGY-7703傳代后，用0.25 %的膜蛋白酶消化細胞，用PBS調整 細胞數至IO7個/ml，得瘤液。
[0049] (2)取30只小鼠（18-22g/只），分別接種步驟1所得的瘤液0.1ml于右上肢皮下后， 被隨機分為W下4組
[0050] 1)青葛締低劑量組:給予青葛締治療，25mg/kg;
[0051] 2)青葛締高劑量組組:給予青葛締治療，50mg/kg;
[0052 ] 3)陽性對照組:給予順銷(孤P)治療，20mg/kg;
[0化3] 4)空白對照組:花生油腹腔注射。
[0054]當移植瘤最大直徑巧mm時，認為移植瘤接種成功，株細胞在5天時全部成瘤。成瘤 后腹腔注射給藥，本化合物組每日給藥一次，連續10天，停藥次日稱重，解剖后剝離皮下瘤 體，稱瘤重；陽性對照組隔日給藥，連續五次，停藥次日稱重，解剖后剝離皮下瘤體，稱瘤重； 空白對照組腹腔注射花生油，每日給藥一次，連續10天，解剖后剝離皮下瘤體，稱瘤重。按下 式計算抑瘤率（％ )=(對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重X 100%。
[005引3.結果
[0056]表2青葛締對人肝癌細胞株QGY-7703皮下移植瘤大小的影響
[0058] 結果如表2所示，青葛締對人肝癌細胞株QGY-7703皮下移植瘤的抑制作用隨劑量 增加而增大，其抑制腫瘤的效果與DDP相當。
[0059] 4.討論
[0060] 本實驗采用構建肝癌體外移植瘤小鼠模型，探討青葛締的抗腫瘤作用。結果顯示， 青葛締可明顯抑制小鼠皮下移植瘤的生長，且抑瘤率隨其劑量的增加而增大。
[0061 ] 例2(藥理、藥效實驗）
[0062] 實驗一青葛締對人肝癌細胞株化p3B2.1-7增殖的影響
[0063] 實驗目的：研究青葛締對人肝癌細胞株化p3B2.1-7增殖的影響。
[0064] 1.實驗材料
[00化]1.1細胞株人肝癌細胞株化p3B2.1-7
[0066] 1.2藥材、試劑和儀器青葛締:購于天津±蘭科技有限公司，批號A777550。胎牛 血清化yclone公司），MEM培養基(Gibco公司），DMS0(sigma公司），MTT(sigma公司）；膜蛋白 酶(G化CO公司）。倒置相差顯微鏡（CKX41奧林己斯）；BioTek化X800酶標儀（美國BioTek公 司）；低速臺式自動平衡離屯、機(DT5-3)。
[0067] 2.實驗方法
[00側 2.1化p3B2.1-7細胞培養生長至指數生長期時，即Wo . 25 %膜蛋白酶消化，1000 X g離屯、3min，細胞沉淀W10%FBS的MEM培養基調整至5 X IO4個/ml，96孔培養板每孔接種 20化1，置于37°C、5%C02及飽和濕度條件下培養24小時。
[0069] 2.2每組設5個復孔，每孔中加入不同濃度的青葛締，上述條件下繼續培養24小 時。
[0070] 陰性對照組：即不加藥組。
[0071 ]根據所加入的藥物將實驗分為4組：
[0072] 實驗組1:加入青葛締，終濃度為化M。
[0073] 實驗組2:加入