溶酶體。第二行左一為對照組的dRB顯色照片，未發現紅色熒光點的存在。
【具體實施方式】
[0035]下面通過實施例具體說明本發明的內容:
[0036]實施例1
[0037]—種小檗堿納米復合物，其制備方法如下:
[0038]室溫下，將2g分子量為20000的苯乙烯-馬來酸酐交替共聚物溶于1ml的N，N-二甲基甲酰胺和Iml三乙胺中，再加入500mg小檗堿的鹽酸鹽或硫酸鹽，攪拌過夜；加入5ml碳酸氫鈉的飽和水溶液以去除酸酐，再次攪拌Ih;采用截留分子量為3500kD的透析袋除去分子量在3500kD以下的物質后，冷凍干燥或真空干燥，將干燥后的固體溶于水中制成10mg/ml的溶液，超聲處理40min以促進自主整裝形成顆粒，即得所述之小檗堿納米復合物，為微束結構。
[0039]實施例2
[0040]本實施例之中的小檗堿納米復合物與實施例1不同之處在于，加入了羅丹明dRB作為標記物，便于后續檢測，但羅丹明dRB的加入對小檗堿納米復合物的形成及結構無影響，具體制備方法如下:
[0041 ]室溫下，將2g分子量為20000的苯乙烯-馬來酸酐交替共聚物溶于1ml的N，N-二甲基甲酰胺和Iml三乙胺中，并向其中逐滴滴入Iml濃度為500mg/ml的dRB的N，N-二甲基甲酰胺溶液，攪拌2h ；加入500mg小檗堿的鹽酸鹽，攪拌過夜；加入5ml碳酸氫鈉的飽和水溶液以去除酸酐，再次攪拌Ih;采用截留分子量為3500kD的透析袋除去分子量在3500kD以下的物質后，冷凍干燥或真空干燥，將干燥后的固體溶于水中制成1mg/ml的溶液，超聲處理40min以促進自主整裝形成顆粒，即得所述之小檗堿納米復合物，為微束結構，ESdRBOP-Berb。
[0042]對比例I
[0043]制備方法同實施例2，但不加小檗堿，得到的產物記為dRBOP。
[0044]實驗例I紫外表征
[0045]分別用I3BS配制濃度為100yg/mL的小檗堿鹽酸鹽、實施例2中得到的dRB@P-Berb、對比例I中得到的dRBOP的溶液;酶標儀分別檢測上述三種溶液在350nm?600nm之間的紫外吸收。X = 425nm處為小檗堿的特征吸收峰，λ = 575ηηι處為dRB的特征吸收峰。
[0046]結果如圖4所示，小檗堿溶液在λ = 425ηπι處有最大吸收峰，對比例I的dRBOP溶液在λ = 575ηπι處有最大吸收峰；而實施例2的dRB@P-Berb溶液在λ = 425ηπι處及λ = 575ηπι處均有吸收峰，說明實施例2的dRBOP-Berb中既含有小檗堿也含有dRB，即實施例2的dRB@P_Berb制備成功。
[0047]實驗例2微束dRB@P-Berb在不同pH值條件下的水合半徑
[0048]向pH為4或7的磷酸緩沖液(10mM, Iml)中分別加入10μ1實施例2制備的dRBOP-Berb和對比例I的dRB@P(10mg ml'in PBS)，測量二者不同pH下的平均粒徑及Zeta電勢。
[0049]結果如圖5至圖12所示，
[0050]實施例2制備的dRB@P-Berb:pH值為7時，平均粒徑Z-V=185nm;Zeta電勢Z-P = -20.8mV ； pH 值為 4 時，平均粒徑 Z-V= 1323nm ； Zeta 電勢 Z-P = -19.9mV；
[0051]對比例I制備的dRB@P:pH值為7時，平均粒徑Z-V = 266nm;Zeta電勢Z-P = -25.1mV;pH 值為 4 時，平均粒徑 Z-V = 517nm； Zeta 電勢 Z-P = -24.9mV ；
[0052]實驗例3小檗堿納米復合物微束dRBOP-Berb的生物膜透過能力
[0053]采用U87細胞和B16F10細胞；細胞先用含有dRB@P_Berb( 10yg/ml)的DMEM培養30mi η后用PBS清洗。再加入Ly so tracker green (ΙμΜ)染色20min，用PB S洗掉殘余的Lysotracker green，用激光共聚焦焚光顯微鏡進行觀察分析。結果如圖13至圖14所示，說明了本發明的小檗堿納米復合物dRBOP-Berb可進入細胞內部，且可定位于溶酶體。
[0054]以上所述，僅為本發明較佳實施例而已，故不能依此限定本發明實施的范圍，即依本發明專利范圍及說明書內容所作的等效變化與修飾，皆應仍屬本發明涵蓋的范圍內。
【主權項】
1.一種小檗堿納米復合物的制備方法，其特征在于:室溫下，將分子量為1000?25000的苯乙烯-馬來酸酐交替共聚物溶于N，N-二甲基甲酰胺和三乙胺中，再加入小檗堿，攪拌過夜;加入碳酸氫鈉的飽和水溶液，再次攪拌0.5?1.5h后；除去分子量在4000kD以下的物質，冷凍干燥或真空干燥，將干燥后的固體溶于水中制成9?11 m g / m I的溶液，超聲處理3 5?45min，即得所述之小檗堿納米復合物;所述苯乙烯-馬來酸酐交替共聚物、N，N-二甲基甲酰胺、三乙胺、小檗堿、碳酸氫鈉的飽和水溶液的配方比例為1.8?2.2g: 9?I Iml:0.9?1.1ml:480?520mg:4.8?5.2mI。2.根據權利要求1所述的一種小檗堿納米復合物的制備方法，其特征在于:所述苯乙烯-馬來酸酐交替共聚物、N，N-二甲基甲酰胺、三乙胺、小檗堿、碳酸氫鈉的飽和水溶液的配方比例為2g:1Oml: Iml:500mg:5ml。3.根據權利要求1所述的一種小檗堿納米復合物的制備方法，其特征在于:所述苯乙烯-馬來酸酐交替共聚物的分子量為20000。4.根據權利要求1所述的一種小檗堿納米復合物的制備方法，其特征在于:采用透析袋除去分子量在3500kD以下的物質。5.根據權利要求1所述的一種小檗堿納米復合物的制備方法，其特征在于:所述小檗堿納米復合物為微束結構。6.根據權利要求1所述的一種小檗堿納米復合物的制備方法，其特征在于:所述小檗堿納米復合物可進入細胞，定位于細胞內溶酶體。7.權利要求1至6中任一項所述的小檗堿納米復合物的制備方法的制藥用途。8.一種小檗堿納米復合物，其特征在于:所述小檗堿納米復合物為微束結構，可定位于細胞內溶酶體，該小檗堿納米復合物由聚苯乙烯馬來酸酐與小檗堿在N，N-二甲基甲酰胺和三乙胺中反應形成，且小檗堿包埋于苯乙烯-馬來酸酐交替共聚物中。9.根據權利要求8所述的一種小檗堿納米復合物的制藥用途。
【專利摘要】本發明公開了一種小檗堿納米復合物及其制備方法，將苯乙烯-馬來酸酐交替共聚物溶于N,N-二甲基甲酰胺和三乙胺中，加入小檗堿，攪拌過夜；加入碳酸氫鈉的飽和水溶液；干燥后復溶于水中，超聲處理，即得所述之小檗堿納米復合物；本發明通過將小檗堿與聚苯乙烯馬來酸酐形成高分子納米復合物，可以增加小檗堿的生物膜透過能力，提高小檗堿的生物利用度，具有廣泛的應用前景。
【IPC分類】A61K31/4375, A61P9/10, A61P1/00, A61P9/00, A61P35/00, A61K47/34, A61P5/00, A61K9/107
【公開號】CN105663040
【申請號】CN201610030840
【發明人】唐慶林, 賴敏靈, 郭以和, 費燕, 陳鐘, 蘇軍凱, 張鳴青
【申請人】中國人民解放軍第一七五醫院
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2016年1月18日