一種新型負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫藥領域，具體涉及一種新型負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體及其制備方法。
【背景技術】
[0002]目前癌癥的發病率高，因其早期診斷效率低，篩查手段有限，確診時多數癌癥患者已屬于晚期。癌癥患者的治療包括徹底的腫瘤減滅輔以一線聯合化療方案，對60%?80%的初治癌癥患者有一定療效，但其中50%?80%的患者會在初治后復發。并且，化療藥物雖然能夠有效的殺死腫瘤細胞，但是化學療法最大的缺點是不能夠將足夠量的藥劑輸送到身體的病灶部位，并且化療藥物具有較強的毒副作用。而小分子藥物具有快速從體內清除的特點因而又需要大量的藥物。此外，還有一些患者因為無法耐受化療藥物的毒性反應而終止化療，從而導致癌癥進展迅速甚至死亡。因此，在保障患者生活質量的前提下提高化療療效是當前癌癥治療中亟待解決的問題。
[0003]阿霉素(doxorubicin，Dox)又稱多柔比星，屬于高效的廣譜抗癌藥物。在臨床應用時，Dox主要通過插入細胞DNA，引發拓撲異構酶Π破壞DNA的三級結構來發揮藥效的。迄今為止，Dox單獨或與其他抗腫瘤藥物聯合用藥，均被認為是治療實體腫瘤，如:乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、肝癌等的一種強有力的化療藥物，亦是治療卵巢癌極為有效的藥物之一。但由于其心臟毒性等副作用使應用受限，阿霉素作為化療藥物，主要毒副作用有手足綜合征、黏膜炎、骨髓抑制;對復發和難治性卵巢癌有一定的作用，特別是對鉑類敏感患者，生存期及總費用較應用拓撲替康有明顯優勢，但對鉑類耐藥患者卻不能提高生存率。因此，研究新的藥物劑型，通過將藥物靶向輸送到腫瘤部位達到靶向治療是當前亟待解決的問題。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于針對現有技術的不足，現提供一種以膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球為載體的新型負載阿霉素的納米級藥物載體及其制備方法。
[0005]為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為:一種新型負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米級藥物載體，其創新點在于:由阿霉素和載體構成，所述載體為膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球，所述新型負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的顆粒直徑為75-115nm。
[0006]本發明的另一個目的是公開一種新型負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的制備方法，其創新點在于:包括3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成、膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球的制備和負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的制備三個步驟，完成新型負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的制備;具體步驟如下:
3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成的具體步驟如下: (1)將5.16g氫氧化鈉用雙蒸餾水制成50ml水溶液，將5.0g間氨基苯硼酸一水合物溶解在氫氧化鈉水溶液中；
(2)在10分鐘內將5.2mL64.4mmol的丙烯酰氯攪拌下逐滴加入上述的冷卻溶液中，攪拌30分鐘，隨后升到室溫并繼續攪拌2小時；
(3)將步驟(2)所得的混合物用鹽酸調節pH到8，過濾得到沉淀物，選用25mL冷水進行洗滌，所述洗滌次數為3次，然后在真空環境下進行干燥；
(4)將步驟(3)干燥所得的沉淀物溶解于50mL乙醇水溶液中，所述乙醇水溶液中的乙醇與水的體積比為80:20，過濾，將過濾液靜置過夜，過濾所得白色固體，在真空環境下進行干燥，得到白色固體，即完成了 3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成；
膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球的制備的具體步驟如下:
(5)將120mg膠原蛋白-1型和90mg3-丙稀酰胺基苯硼酸加熱溶解于1mL蒸饋水中，所述加熱溫度為40-50°C ；自然冷卻；
(6)將9.4mg的4，4-偶氮雙加入到步驟(5)所得的冷卻溶液中，再用氫氧化鈉水溶液調節溶液的PH值到6.3;利用水浴鍋將反應溶液加熱到90°C，緩慢攪拌，反應混合物會慢慢變藍，完成膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球的制備；
負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的制備的具體步驟如下:
(7)將制備的5mg/mL膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球溶液用氫氧化鈉的水溶液調節PH值到8.4，所述膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球溶液為5ml;
(8)將ImL濃度為3mg/mL的鹽酸阿霉素水溶液逐滴加入到納米微球的水溶液中，攪拌下反應12小時，離心去上清，將沉淀物重新分散在水溶液中或5%葡萄糖的注射液中，即完成了負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的制備。
[0007]本發明的有益效果如下:
(I)本發明的載藥納米微球在不同PH值溶液中釋放實驗結果證明負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體作為阿霉素抗腫瘤藥物的載體，可以有很好緩釋的效果和腫瘤部位選擇性釋放的特性。空白的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球對細胞沒有細胞毒性。載藥納米微球有較好的緩釋功能及潛在降低毒副作用的可能。在相同的給藥劑量下，載藥納米微球組對皮下移植瘤的增長有較好的抑制作用。
[0008](2)本發明制備方法制得的納米微球粒徑較均一，分散性好，溫度在25-55°C之間，納米載體穩定性好，由于阿霉素在酸堿溶液中存在方式不一樣，在酸性溶液中，阿霉素是水溶性離子的形式，在堿性溶液中，阿霉素是非離子的疏水性中性形式，因而我們制備的納米級藥物載體在不同PH的液體中的釋放試驗表明在pH為7.4的溶液中，只有大約6%的阿霉素從納米微球中釋放出來。當溶液的pH降低到6.0時，釋放量增多，約有19%的負載的阿霉素從納米微球中釋放出來。隨著pH值的繼續降低至5.0時，釋放量繼續增大，約有33%的負載的阿霉素從納米微球中釋放。當pH降低至4.0時，釋放量明顯增大，約有76%的負載的阿霉素從納米微球中釋放。因而我們可以得出，負載阿霉素的納米微球在中性溶液中釋放少量阿霉素，且釋放緩慢，在酸性溶液中具有快速釋放大量阿霉素。此種在中性溶液中釋放少，在酸性溶液中快速釋放的現象，在腫瘤的研究當中是有重大意義的，對于腫瘤組織有很好的選擇性。通過釋放實驗結果，證明負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)作為阿霉素抗腫瘤藥物的載體，可以有很好緩釋的效果和腫瘤部位選擇性釋放的特性。
【具體實施方式】
[0009]以下由特定的具體實施例說明本發明的實施方式，熟悉此技術的人士可由本說明書所揭露的內容輕易地了解本發明的其他優點及功效。
[0010]—種新型負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體，由阿霉素和納米載體構成，載體為膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球，新型負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的顆粒直徑為75-115nm。
[0011]實施例1
一種新型負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的制備方法，包括3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成、膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球的制備和負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的制備三個步驟，完成新型負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的制備；具體步驟如下:
3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成的具體步驟如下:
(1)將5.16g氫氧化鈉用雙蒸餾水制成50ml水溶液，將5.0g間氨基苯硼酸一水合物溶解在氫氧化鈉水溶液中；
(2)在10分鐘內將5.2ml64.4mmol的丙烯酰氯攪拌下逐滴加入上述的冷卻溶液中，攪拌30分鐘，隨后升到室溫并繼續攪拌2小時；
(3)將步驟(2)所得的混合物用鹽酸調節pH到8，過濾得到沉淀物，選用25mL冷水進行洗滌，洗滌次數為3次，然后在真空環境下進行干燥；
(4)將步驟(3)干燥所得的沉淀物溶解于50mL乙醇水溶液中，乙醇水溶液中的乙醇與水的體積比為80: 20，過濾，將過濾液靜置過夜，過濾所得白色固體，在真空環境下進行干燥，得到白色固體，即完成了 3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成；
膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球的制備的具體步驟如下:
(5)將120mg膠原蛋白-1型和90mg3-丙稀酰胺基苯硼酸加熱溶解于1mL蒸饋水中，加熱溫度為40°C ；自然冷卻；
(6)將9.4mg的4，4-偶氮雙加入到步驟(5)所得的冷卻溶液中，再用氫氧化鈉水溶液調節溶液的PH值到6.3;利用水浴鍋將反應溶液加熱到90°C，緩慢攪拌，反應混合物會慢慢變藍，完成膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球的制備；
負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的制備的具體步驟如下:
(7)將制備的5mg/mL膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球溶液用氫氧化鈉的水溶液調節PH值到8.4，膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球溶液為5ml;
(8)將ImL濃度為3mg/mL的鹽酸阿霉素水溶液逐滴加入到納米微球的水溶液中，攪拌下反應12小時，離心去上清，將沉淀物重新分散在水溶液中或5%葡萄糖的注射液中，即完成了負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的制備。
[0012]本實施例下制備得到的新型負載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級藥物載體的顆粒直徑為79.3nm。
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