-N-U-甲基-5-[ (4-甲基贓嗦-1-基）甲基]-IH-化挫-3-基}喀晚-2-胺(化合物E: 168mg)。
[0140] MS化SI+):490[(M+H)+].
[0141] Mffi(DMS0-d6):2.14(3H，s)，2.18-2.53(W，m)，3.45(2H，s)，3.67(3H，s)，3.87 (6H,s),5.15(2H,s),6.46(lH,s),7.06(lH,t J = 8.4Hz),8.26(2H,s),9.42(lH,s).
[0142] 本發明的醫藥組合物的藥理效果通過W下實施例來確認。
[0143] 試驗例1FGFR4酶活性檢測
[0144] 酶活性檢測使用人重組FGFR4(力瓜十八斗才公司，產品目錄編號：08CBS-0716C)。 測定法的概要如下所示。
[0145] 用二甲基亞諷(DMSO)溶解被驗化合物，W使得DMSO濃度成為2%的方式用反應緩 沖液（100nMHEPES(pH7.5)、0.003%化iji-35、0.004%Tween20、0.5mMDTT、10mM MgCl 2)稀釋，制備化合物溶液。向384孔板Iwel 1中，
[0146] (1)添加化合物溶液化L，
[0147] (2)添加化L用反應稀釋液稀釋過的FGFR4酶(3ngAiL)，
[014引 （3)20分鐘后添加巧光底物膚水溶液（組成為IOOmM HEPES(pH 7.5)、0.003% Brij-35、0.004%Tween 20、0.5mM DTT、10mM MgCl2、3.75]iM substrate-FX-peptide 30 (Perkin Elmer產品編號760430)、750tiM ATP)4化，
[0149] (4)于室溫下使之反應30分鐘(檢測時的被驗化合物終濃度為lOnM)。
[01加](5)加入15化/well的20mM抓TA溶液使反應停止后，用LabChip EZ Reader (Perkin Elmer)測定通過FGFR4的激酶反應而生成的憐酸化底物膚量。
[0151] 將未添加被驗化合物(僅加入DMSO)的well的測定值設為0%抑制，將未添加 FGFR4 酶的we 11的測定值設為100 %抑制，算出各化合物在1 OnM下的FGFR4酶抑制率。即，FGFR^I 抑制率通過<FGFR4酶抑制率（％)〉= [ I-K添加被驗化合物的well的測定值〉-<未添加 FGFR4酶的we 11的測定值〉} / {<未添加被驗化合物(僅添加 DMSO)的wel 1的測定值〉-<未添加 FGFR4酶的well的測定值〉}]X100算出。其結果示于表1。
[0152] [表 1]
[0153] 各被驗化合物（1 OnM)的FGFR4激酶活性抑制率
[0155] 由W上結果可W確認，作為本發明的醫藥組合物的有效成分的化合物A、化合物B、 化合物C、化合物D和化合物巧巧制了 FGFR4的激酶活性。
[0156] 試驗例2FGFR19基因擴增陽性肝癌細胞化地-7)的增殖檢測
[0157] 化H-7細胞為報告了FGF19基因擴增的肝實質細胞癌細胞株(Cancer cell. 2011， 19(3):347-58)。
[015引將化H-7細胞（購自t二一7シ哥^工シス研究資源パシ夕，JCRB0403)W500細 胞/9化L/well逐一接種到96孔聚苯乙締制平底板上，第二天添加被驗化合物溶液（I^L) (被驗化合物溶液的最終濃度為37nM，DMS0的最終濃度為0.1 % )。添加被驗化合物溶液五天 后，使用CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)通過ARV0X3 (Perkin Elmer)測定化H-7細胞的細胞數。將未添加被驗化合物(僅加入DMSO)的well的測 定值設為0 %抑制，將未接種細胞(僅培養基）的wel 1的測定值設為100 %抑制，算出各被驗 化合物在37nM下的增殖抑制率。即，通過<増殖抑制率（％ )〉=[ I-K添加被驗化合物的well 的測定值〉-< 未接種細胞（僅培養基）的well的測定值〉}/{<未添加被驗化合物（僅添加 DMSO)的well的測定值〉-<未接種細胞(僅培養基)的well的測定值〉}] X 100算出。將其結果 示于表2。
[0159] [表 2]
[0160] 各被驗化合物(37nM)的化H-7細胞增殖抑制率
[0162] 從W上結果可W確認，作為本發明的醫藥組合物的有效成分的化合物A、化合物B、 化合物C、化合物D及化合物巧巧制了 FGFl 9基因擴增的肝癌細胞的增殖。
[0163] 試驗例3FGF19基因擴增陽性肝癌細胞化地-7)皮下移植小鼠模型抗腫瘤試驗
[0164] 向裸鼠（CAnN. Cg-Foxnlnu/CrlCrl j(nu/nu):日本予中一/レスリパ一，雄性，4-5周 齡）右腹側皮下移植3 X 106cells/0.1 mUPBS和Matrigel Wl: 1懸浮的溶液）的HuH-7細胞。 從移植開始到約3周后，按照腫瘤體積和體重實施分組。各被驗化合物給予組由4或5只小鼠 構成，各組的平均腫瘤體積為147-180mm 3。將被驗化合物使用0.5%甲基纖維素水溶液制成 懸濁液，每日一次連續經口給藥。關于被驗化合物的給予量，化合物C設為0.3mg/kg/day，化 合物A、化合物B、化合物D及化合物E設為Img/kg/day，在給藥開始日（第0天)和最終測定日 (化合物E為第9天，化合物A、化合物C及化合物D為第10天，化合物B為第13天)測定腫瘤體 積。關于腫瘤體積，用游標卡尺測定短徑、長徑，W (腫瘤體積mm3 )=(短徑mm X短徑mm X長 徑mm)/2算出。另外，將未添加被驗化合物的組（即僅給予0.5%甲基纖維素水溶液)作為對 照組，將對照組的最終測定日設為各化合物的最終測定日的同日（關于針對化合物E的對照 組為第9天，關于針對化合物A、化合物C及化合物D的對照組為第10天，關于針對化合物B的 對照組為第13天）。各被驗化合物的腫瘤增殖抑制率通過<腫瘤増殖抑制率（％ )〉= <1-(被 驗化合物給予組腫瘤體積增加量/對照組腫瘤體積增加量)〉X 100算出。腫瘤體積增加量W (腫瘤體積增加量）=(各組的最終測定日的腫瘤體積)-(各組第0天的腫瘤體積)算出。其結 果在表3中不出。
[01 化][表 3]
[0166]化H-7細胞皮下移植小鼠模型中的腫瘤增殖抑制率
[0168] 從W上結果可W確認，作為本發明的醫藥組合物的有效成分的化合物A、化合物B、 化合物C、化合物D及化合物巧巧制了皮下移植有FGF19基因擴增陽性肝癌細胞的動物模型中 肝癌的生長。
[0169] 試驗例1至3的結果示出，化合物A、化合物B、化合物C、化合物D或化合物E、或其可 藥用鹽抑制了 FGFR4的激酶活性，對于與FGFR4或FGF19相關的各種癌(尤其是肝癌，作為一 個方式FGF19基因擴增陽性肝癌）的增殖抑制是有用的。
[0170] 工業實用性
[0171] 作為本發明的醫藥組合物的有效成分的化合物A、化合物B、化合物C、化合物D或化 合物E、或其可藥用鹽具有FGFR4抑制作用，可用作與FGFR4相關的癌的治療用醫藥組合物、 作為另一方式與FGF19相關的癌的治療用醫藥組合物、作為又另一方式FGF19基因擴增陽性 肝癌治療用醫藥組合物的有效成分。
【主權項】
1. 一種與FGFR4相關的癌的治療用醫藥組合物，其包含5-[ (2，6-二氟-3，5-二甲氧基芐 基)氧基]-N_{3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2-胺、2-[4-({5_ [(2,6-二氟-3,5-二甲氧基芐基)氧基]啼啶-2-基}氨基)-1!1-吡唑-卜基]乙醇、（21〇-3-[4-({5-[(2,6-二氟-3,5-二甲氧基芐基)氧基]嘧啶-2-基}氨基)-1!1-吡唑-1-基]丙烷-1，2-二 醇、5-[(2,6_二氟-3,5-二甲氧基芐基)氧基]-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2-胺或 5-[ (2，6_二氟-3，5-二甲氧基芐基)氧基]-N-{ 1-甲基-5-[ (4-甲基哌嗪-1-基）甲基]-1H-吡 唑-3-基}嘧啶-2-胺或其可藥用鹽、以及賦形劑。2. 根據權利要求1所述的醫藥組合物，其中與FGFR4相關的癌為與FGF19相關的癌。3. 根據權利要求1所述的醫藥組合物，其中與FGFR4相關的癌為FGF19基因擴增陽性肝 癌。4. 根據權利要求1至3中任一項所述的醫藥組合物，其包含5-[(2,6_二氟-3,5-二甲氧 基芐基)氧基]-N-{3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2-胺或其可 藥用鹽、以及賦形劑。5.根據權利要求1至3中任一項所述的醫藥組合物，其包含2-[4-({5-[(2,6_二氟-3,5-二甲氧基芐基)氧基]嘧啶-2-基}氨基)-1H-吡唑-1-基]乙醇或其可藥用鹽、以及賦形劑。6. 根據權利要求1至3中任一項所述的醫藥組合物，其包含（2R)-3-[4-({5-[(2,6-二 氟-3,5-二甲氧基芐基)氧基]嘧啶-2-基}氨基)-1H-吡唑-1-基]丙烷-1，2-二醇或其可藥用 鹽、以及賦形劑。7. 根據權利要求1至3中任一項所述的醫藥組合物，其包含5-[(2,6_二氟-3,5-二甲氧 基芐基)氧基]-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2-胺或其可藥用鹽、以及賦形劑。8.根據權利要求1至3中任一項所述的醫藥組合物，其包含5-[(2,6_二氟-3,5-二甲氧 基芐基)氧基]-N-{1-甲基-5-[(4-甲基哌嗪-1-基）甲基]-1H-吡唑-3-基}嘧啶-2-胺或其可 藥用鹽、以及賦形劑。
【專利摘要】本發明提供一種與FGFR4相關的癌、與FGF19相關的癌或FGF？19基因擴增陽性肝癌的治療用醫藥組合物。本發明人對具有FGFR抑制作用的化合物進行了研究，確認到特定的嘧啶化合物具有FGFR4抑制作用，含有這些化合物作為有效成分的醫藥組合物對于與FGFR4相關的癌、作為另一方式與FGF19相關的癌、作為又另一方式FGF？19基因擴增陽性肝癌具有治療效果，從而完成了本發明。
【IPC分類】A61P43/00, A61K31/506, A61P1/16, A61P35/00
【公開號】CN105492009
【申請號】CN201480047119
【發明人】二見崇史, 竹下留美
【申請人】安斯泰來制藥株式會社
【公開日】2016年4月13日
【申請日】2014年8月27日
【公告號】CA2922352A1, EP3040072A1, US20160199371, WO2015030021A1