>[0036] 2、實驗結果顯示,±太片醇提取物、±太片總皂巧均可降低肝纖維化大鼠的ALT、 AST,升高肝纖維化大鼠的白蛋白,降低肝纖維化大鼠的LN、HA,改善大鼠肝纖維化程度,減 輕肝組織炎癥細胞浸潤和脂肪變性程度。此外,±太片醇提取物及±太片總皂巧降低肝纖 維化大鼠血清MDA水平,升高S0D、G細含量,提示±太片醇提取物及±太片總皂巧可能通過 抑制肝臟中氧化應激,從而減輕肝細胞和肝臟結構的破壞,抑制肝纖維化的發展。總體實驗 效果顯示,±太片提取物及±太片總皂巧均可有效治療肝纖維化,其作用可能與抗脂質過 氧化作用有關,治療效果最優為±太片總皂巧,±太片提取物次之,但兩者均顯示出顯著的 治療效果。
【具體實施方式】
[0037] 下面通過實施例進一步說明本發明。應該理解的是,本發明的實施例是用于說明 本發明而不是對本發明的限制。根據本發明的實質對本發明進行的簡單改進都屬于本發明 要求保護的范圍。除非另有說明,本發明中的乙醇量的百分數是體積百分數,v/v表示溶液 的體積比。
[003引實施例1:上太片醇提取物的制備
[0039] 取11^±太片粉碎,按藥材重量的8倍,加入濃度為95%乙醇回流提取2次,每次提 取時間為化,過濾,合并提取液,過濾,濃縮,干燥,得±太片醇提取物。
[0040] ±太片醇提取物的提取收率為11.5%。
[0041]實施例2:上太片醇提取物的制備
[0042] 取化邑±太片粉碎,按藥材重量的12倍,加入濃度為70%乙醇回流提取3次,每次提 取時間為化,過濾,合并提取液,過濾,濃縮,干燥,得±太片醇提取物。
[0043] ±太片醇提取物的提取收率為13.2%。
[0044] 實施例3:±太片總皂巧的制備
[0045] 取11^±太片粉碎,加入濃度為80%的乙醇回流提取3次,每次乙醇用量分別為藥 材總重量的8倍、10倍、12倍,每次提取時間為比,過濾,合并提取液,減壓濃縮至藥材重量的 1.5倍,冷卻至室溫,300化/min離屯、15min,分離出上清液。上清液上DlOl大孔樹脂,依次用 3BV水,4BV20 %乙醇洗脫,棄去洗脫液,再用4BV60 %,3BV80 %的乙醇洗脫,收集合并洗脫 液,濃縮,干燥,得±太片總皂巧提取物。
[0046] W馨葫皂巧元為對照,用香草醒-高氯酸-冰醋酸顯色法測定吸光度,按回歸方程 計算,±太片總皂巧提取物中總皂巧的含量為50.12%。
[0047] 實施例4:±太片總皂巧的制備
[004引取化邑±太片粉碎,加入濃度為75%、95%的乙醇回流提取2次,每次乙醇用量分別 為藥材總重量的10倍,每次提取時間為化,過濾,合并提取液,減壓濃縮至藥材重量的1.8 倍,冷卻至室溫,350化pm離屯、20min,分離出上清液。上清液上DlO 1大孔樹脂,依次用4BV水, 4BV10 %乙醇洗脫,棄去洗脫液,再用3BV60 %,4BV70 %的乙醇洗脫,收集、合并洗脫液,濃 縮,干燥,得±太片總皂巧提取物。
[0049] W馨葫皂巧元為對照,用香草醒-高氯酸-冰醋酸顯色法測定吸光度,按回歸方程 計算,±太片總皂巧提取物中總皂巧的含量為55.44%。
[0050] 實施例5:±太片總皂巧的制備
[0051] 取化旨±太片粉碎,加入濃度為70%的乙醇回流提取3次,每次乙醇用量分別為藥 材總重量的12倍,每次提取時間為化,過濾,合并提取液,減壓濃縮至藥材重量的1.8倍,靜 置至室溫,400化pm離屯、20min,分離出上清液。上清液上DlOl大孔樹脂,依次用2BV水, 2BV10 %乙醇、2BV20 %乙醇洗脫,棄去洗脫液,再用7BV70 %的乙醇洗脫,收集、合并洗脫液, 濃縮,干燥,得±太片總皂巧提取物。
[0052] W馨葫皂巧元為對照,用香草醒-高氯酸-冰醋酸顯色法測定吸光度,按回歸方程 計算,±太片總皂巧提取物中總皂巧的含量為58.81 %。
[0053] 實施例6:±太片總皂巧的制備
[0054] 取化旨±太片粉碎,加入濃度為95%的乙醇回流提取2次,每次乙醇用量分別為藥 材總重量的8倍,每次提取時間為化,過濾,合并提取液,減壓濃縮至藥材重量的2.0倍,冷卻 至室溫,離屯、,分離出上清液。上清液上DlOl大孔樹脂,依次用3BV水,4BV20%乙醇洗脫,棄 去洗脫液,再用4BV70%,3BV90%的乙醇洗脫,收集、合并洗脫液,濃縮,干燥,得±太片總皂 巧提取物。
[0055] W馨葫皂巧元為對照,用香草醒-高氯酸-冰醋酸顯色法測定吸光度,按回歸方程 計算,±太片總皂巧提取物中總皂巧的含量為53.68%。
[0056] 藥效實驗:抗大鼠肝纖維化
[0化7] 1.實驗材料
[0化引 1.1動物
[0化9] Wistar大鼠,雌性,SPF級,體重180~220g,60只,購自廣西醫科大學實驗動物中 屯、。
[0060] 1.2 試劑
[0061] 四氯化碳(廣州市海珠區化學試劑廠,RA);橄攬油(國藥集團化學試劑有限公司); 血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶檢測試劑、白蛋白檢測試劑(邁瑞醫療);透明質酸檢測試劑、 層粘連蛋白化N)放免檢測試劑(上海海軍醫學研究所);還原型谷脫甘膚檢測試劑、丙二醒 檢測試劑盒、過氧化物歧化酶試劑(南京建成生物工程研究所)。
[0062] 1.3藥品
[0063] 馬洛替醋(亞寶欣,山西亞寶藥業集團)、實施例1(臨用前用質量濃度為0.2%簇甲 基纖維素鋼配制成相應濃度)、實施例3。
[0064] 2.實驗方法
[0065] 2.1造模、給藥:將大鼠按體重隨機分成5組,每組12只,分別為空白組、模型組、實 施例1組、實施例3組、馬洛替醋片組(陽性藥)。除空白組,其它組采用40%CCL4橄攬油溶液, 2ml/kg體重腹腔注射,每周2次,持續8周。實施例組和陽性藥組于第4次造模后給藥,實施例 組劑量分別為800、300mg/kg(W制備所得的干粉計),馬洛替脂劑量為60mg/kg,l次/天,空 白組與模型組給予等容積蒸饋水,灌胃容積均為ImlAOOg體重,連續給藥6周。
[0066] 2.2動物處理和指標檢測:最后一次給藥后,麻醉大鼠從腹主動脈采血,離屯、取血 清檢測肝功能、纖維化、氧自由基指標;采血后取肝臟稱重,計算肝臟系數,并取右葉肝組織 用10 %的中性甲醒溶液固定,經肥染色觀察肝纖維化程度。
[0067] 實驗動物肝纖維化程度分級標準進行分級,共分為0~6級。0級:肝小葉結構完整, 無炎細胞浸潤,無纖維化增生;1級:少量膠原纖維從匯管區或中央靜脈區向外延伸;2級:膠 原纖維從匯管區或中央靜脈周圍向外延伸明顯,但未包繞整個肝小葉;3級:膠原纖維延伸 明顯,相互連接,包繞整個肝小葉;4級:膠原纖維包繞分割肝小葉,W致正常肝小葉結構破 壞,假小葉形成,但W大卵圓形假小葉形成為主;5級:肝小葉結構完全破壞,假小葉形成,大 卵圓形假小葉與小圓形假小葉各占50% ;6級:肝內布滿圓形假小葉,假小葉間有粗大增生 的膠原纖維。
[0068] 3.統計學處理
[0069] 組織學檢查中的肝纖維化病理分級按等級資料,各組間的差異比較采用秩和檢 驗;生化定量檢測結果按計量資料W均數±標準差表示,各組間的差異分析采用t檢驗。使 用的統計軟件為SPSS13.0,P<0.05認為差異有顯著性。
[0070] 4.實驗結果
[0071] 4.1動物一般情況
[0072] 模型組大鼠實驗過程中死亡1只,治療組與空白組均無死亡。空白組大鼠肝臟顏色 鮮紅,表面