靶向疏水性抗腫瘤藥物納米制劑及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥領域，具體是設及一種祀向疏水性抗腫瘤藥物納米制劑及其制備 方法。
【背景技術】
[0002] 大部分腫瘤內部血管生長迅速、不規則，內部淋己系統清除慢，存在腫瘤滲透增 強因子，使大分子和納米顆粒易滯留在腫瘤內部，稱為"增強滲透和滯留效應"巧nhanced 化rme油ilityandRetention，EPR)。納米給藥系統由于EPR效應可被動祀向到腫瘤，在腫 瘤祀向治療應用過程中越來受到重視。普通的納米劑型，如脂質體、納米粒等在血漿中，會 被人體網狀內皮系統識別，使納米制劑的血漿清除加快，降低了其治療效果。因此表面被修 飾的納米制劑引起了人們的廣泛研究與關注。
[0003] 白蛋白是一類在血漿中大量存在的蛋白。藥物載體研究中常見的白蛋白包括人血 清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清白蛋白。白蛋白分子中存在多種藥物結合位點，對不同種類 的藥物均能有效負載；同時其具有水溶性高、穩定性好、可降解等特點，其生物相容性高，已 被美國食品藥品監督管理局（抑A)批準用于人體，因此白蛋白是藥物輸送的理想載體。同 時，白蛋白上存在的氨基、琉基等，可W進一步修飾主動祀向基團W提高祀向性。現有注射 用紫杉醇（白蛋白結合型）注射劑（Abraxane)的上市引起了市場的廣泛關注。
[0004] 專利CN201210142991通過制備透明質酸和人血白蛋白的共輛物作為載體，然后 將其與植物類抗癌藥物及納米粒子穩定劑在高速均質、高壓均質或超聲處理條件下制得植 物類抗癌祀向納米制劑。該納米制劑具有腫瘤細胞表面的受體如CD44的生物祀向作用，靜 脈注射進入體內后依靠腫瘤的Era效應和HA的CD44高度結合性，使藥物在腫瘤部位蓄積， 并且延長納米載藥系統在體內的循環時間。
[0005] 在生物醫學應用中，納米粒子藥物的粒徑比較重要，不同的粒徑代謝路徑也不一 樣，小粒徑通過腎代謝，大粒徑通過肝代謝。其中，20-200nm的粒子對腫瘤有被動祀向作用， 在此粒徑范圍內的納米粒子藥物可W消除在藥物本身的尺寸大小引起的一些生物醫學效 應，從而可W提高療效。
[0006] 注射劑是無菌制劑的一種，注射劑的無菌是通過良好控制且經過驗證的滅菌/ 除菌生產工藝、生產過程中嚴格執行藥品生產質量管理規范（GMP，GoodManufac化ring Practice化r地armaceuticalpro化cts)實現的。含有大量蛋白質（如白蛋白）的制劑 均不能用常規的方法（如高溫）進行滅菌，因為高溫會使蛋白變性。過濾滅菌法是監管部口 認可的針對產品具有不穩定性而不能采用包括熱滅菌在內的情況的最終滅菌方法，因此， 通過0. 22μm濾器過濾除菌是制備注射型納米制劑的優選方案。
[0007] 但是CN201210142991的納米制劑顆粒，粒徑分布系數較大，粒徑分布較廣，而且 凍干復溶后，由于修飾人血白蛋白的透明質酸分子鏈之間纏繞，導致粒子之間互相聚集、附 著，導致凍干品復溶后粒子粒徑增加，因此進行微孔濾器過濾化22μm)時容易出現濾器 濾膜孔道堵塞的情況，使濾液中的粒子濃度降低，從而導致濾液中藥物含量的降低，從而影 響藥效及降低產品收率。
【發明內容】
[0008] 基于此，本發明的目的之一在于提供一種祀向疏水性抗腫瘤藥物納米制劑，該 納米制劑粒徑分布較均勻，分散性好，穩定不團聚，凍干復溶后粒徑基本不變，微孔濾器 (0. 22μm)過濾后濾液中的藥物濃度基本不變。
[0009] 實現上述目的的具體技術方案如下：
[0010] 一種祀向疏水性抗腫瘤藥物納米制劑，包括質量比為1 :4-32. 5的疏水性抗腫瘤 藥物和載體，所述載體由37. 5-95. 3wt%的白蛋白和4. 7-62. 5wt%的透明質酸-白蛋白共 輛物組成，所述透明質酸-白蛋白共輛物由摩爾比為1 :1-20的白蛋白與透明質酸制備而 成。
[0011] 在其中一些實施例中，所述祀向疏水性抗腫瘤藥物納米制劑包括質量比為1 : 4. 8-19的疏水性抗腫瘤藥物和載體，所述載體由50. 0-95.Owt%的白蛋白和5. 0-50.Owt% 的透明質酸-白蛋白共輛物組成，所述透明質酸-白蛋白共輛物由摩爾比為1 :2-20的白蛋 白與透明質酸制備而成。
[0012] 在其中一些實施例中，所述透明質酸的分子量為2-60kDa。
[0013] 在其中一些實施例中，所述白蛋白為人血白蛋白、牛血清白蛋白、卵清白蛋白W及 重組人血白蛋白。
[0014] 在其中一些實施例中，所述疏水性抗腫瘤藥物選自紫杉醇、多西紫杉醇、阿齊他 賽、阿霉素、喜樹堿、環抱菌素、雷帕霉素、萬古霉素、塞替派或它們的衍生物。
[0015] 在其中一些實施例中，所述祀向疏水性抗腫瘤藥物納米制劑還包括納米粒子穩定 劑，所述納米粒子穩定劑選自聚氧乙締-聚氧丙締-聚氧乙締扶段聚合物，d-a生育酪班 巧酸聚乙二醇醋、聚維酬，所述納米粒子穩定劑為疏水性抗腫瘤藥物的質量的1. 0-10. 0%。
[0016] 本發明的另一目的在于提供上述祀向疏水性抗腫瘤藥物納米制劑的制備方法。
[0017] 具體技術方案如下：
[0018] 一種上述祀向疏水性抗腫瘤藥物納米制劑的制備方法，包括W下步驟：
[0019] (1)制備透明質酸-白蛋白共輛物：
[0020] 將透明質酸和白蛋白加入到水性介質中溶解，調節溶液抑為5. 0-6. 0,然后將 1-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亞胺鹽酸鹽和N-徑基硫代班巧酷亞胺鋼鹽加入到上述溶 液中反應15-60min，調節溶液抑為7. 0-7. 5,在室溫下繼續攬拌反應3-2地，反應完畢后，透 析除去未鍵合的透明質酸、未反應的1-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亞胺鹽酸鹽和N-徑 基硫代班巧酷亞胺鋼鹽和其它副產物，冷凍干燥后得透明質酸-白蛋白共輛物；或
[0021] 將透明質酸溶于水性介質中，調節溶液抑為5. 0-6. 0,然后加入1-乙基-3-(3-二 甲胺丙基）碳二亞胺鹽酸鹽和N-徑基硫代班巧酷亞胺鋼鹽，室溫下攬拌反應15-60min，得 到透明質酸班巧酷亞胺活性脂；再將透明質酸班巧酷亞胺活性脂逐滴加入到白蛋白的水性 介質溶液中或將白蛋白的水性介質溶液逐滴加入到透明質酸班巧酷亞胺活性脂中，調節溶 液抑為7. 0-7. 5,在室溫下攬拌反應3-2地，反應完畢后，透析除去未鍵合的透明質酸、未反 應的1-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亞胺鹽酸鹽和N-徑基硫代班巧酷亞胺鋼鹽和其它 副產物，冷凍干燥后得透明質酸-白蛋白共輛物；
[0022] (2)配制載體溶液：
[002引將白蛋白和步驟（1)制備的透明質酸-白蛋白共輛物溶于水性介質中，得到載體 溶液；
[0024] (3)配制藥物溶液：
[0025] 將疏水性抗腫瘤癌藥物或疏水性抗腫瘤癌藥物和納米粒子穩定劑溶于有機溶劑 中，得到藥物溶液；
[0026] (4)制備納米制劑：
[0027] 均質條件下，將上述步驟（3)配制的藥物溶液加入到步驟似配制的載體溶液中 獲得初乳，再于高壓均質下獲得復乳，然后除去有機溶劑，過濾，冷凍干燥得到祀向疏水性 抗腫瘤藥物納米制劑。
[0028] 在其中一些實施例中，步驟（2)所述的載體溶液中載體的濃度為4. 0-50.Omg/mL， 步驟（3)所述的藥物溶液中疏水性抗腫瘤藥物的濃度為16. 0-345.Omg/mL。
[0029] 在其中一些實施例中，步驟（1)所述的水性介質為2-(N-嗎啡嘟）乙橫酸緩沖 液、憐酸鹽緩沖液或無菌水；步驟（2)所述的水性介質為無菌水、憐酸鹽緩沖液、生理鹽水、 5.Owt%葡萄糖水溶液或5.Owt%甘露醇水溶液；步驟（3)所述的有機溶劑為二氯甲燒、氯 仿、二氯甲燒與乙醇的混合物、或氯仿與乙醇的混合物。
[0030] 在其中一些實施例中，步驟（4)所述的高壓均質的壓力為10000-400(K)psi，高壓 均質的物料流量為10. 0-25.化A，高壓均質的循環次數為7-20次；所述除去有機溶劑的方 法為在15. 0-45. (TC的條件下減壓旋轉蒸發除去有機溶劑。
[0031] 本發明的發明人在長期的經驗積累和實驗過程中發現，在透明質酸-白蛋白共輛 物中加入未改性的白蛋白，可W減小本發明所述祀向疏水性抗腫瘤藥物納米制劑顆粒的粒 徑，使粒徑分布更均勻，可W避免或減少納米粒子之間的互相聚集與附著，因此本發明所述 的祀向疏水性抗腫瘤藥物納米制劑，其具有W下的優點：
[0032] 1、本發明的納米制劑的粒徑分布較均勻且絕大部分小于220nm，而且復溶后粒徑 沒有增加，經微孔濾器化22μm)過濾后具有較高的收率，大大降低了因粒徑過大而被截 留造成的損失，從而可W提高藥效，增強對腫瘤的抑制作用。
[0033] 2、本發明的納米制劑的粒徑絕大部分小于220nm，而且粒子復溶后粒徑沒有增