:1)、邸TA-2化和焦亞硫酸鋼的憐酸鹽緩沖液4ml，抑在 5. 5~6. 5,40°C水化化形成混懸液，超聲勻化，整粒，冷凍干燥即得卡己他賽腫瘤祀向脂質 體凍干粉末。卡己他賽腫瘤祀向脂質體凍干粉末用純化水稀釋復溶之后測其含量（相對標 示量）、粒徑和包封率分別為101. 6%、125. 2nm和91. 6%。
[0030] 實施例4
[0031] 將3mg卡己他賽、80mg憐脂酷乙醇胺、8mg膽固醇、葉酸-聚乙二醇2000-雙硬脂 酷憐脂酷乙醇胺8. 7mg置于50ml旋蒸瓶中，加入10ml乙醇，溶解。40°C減壓蒸發除去乙 醇。將旋蒸瓶放置真空干燥箱中一段時間直至除盡乙醇，加入含有5%的薦糖、邸TA-2化和 亞硫酸氨鋼的憐酸鹽緩沖液4ml，抑在4. 5~5. 5,40°C水化化形成混懸液，超聲勻化，整 粒，冷凍干燥即得卡己他賽腫瘤祀向脂質體凍干粉末。卡己他賽腫瘤祀向脂質體凍干粉末 用純化水稀釋復溶之后測其含量（相對標示量）、粒徑和包封率分別為95. 6%、128. 6nm和 96. 7%。
[0032] 實施例5本發明卡己他賽腫瘤祀向脂質體的粒徑考察
[0033] 將本發明實施例1-4得到的脂質粉末用純化水稀釋復溶后用粒徑儀測其粒徑，結 果如圖1所示。由粒徑圖顯示可看出，根據本發明制備得到的脂質體的粒徑在120nm左右， 粒徑分布成正態分布。
[0034] 實施例6本發明卡己他賽腫瘤祀向脂質體的體外釋放實驗
[0035] 卡己他賽在抑7. 4的憐酸鹽緩沖液中幾乎不溶（溶解度3.加g/ml左右），因此體 外釋放實驗時需要加入助溶劑如十二烷基硫酸鋼、吐溫-80等，本發明制備的卡己他賽腫 瘤祀向脂質體體外釋放實驗采用吐溫-80為助溶劑，其用量為0. 5%。
[0036] 取本發明卡己他賽溶液適量（含卡己他賽約為1. 8mg)置于分子截留量為34000 的透析袋中，透析袋放置37°C含有lOOmlO.5%吐溫-80的憐酸鹽緩沖液的燒杯中，燒杯置 于搖床上，搖床設定參數為37°C，100巧m。分別于0. 5}1、比、2}1、地、她、12}1、2地、4她、72}1、 9化和12化取樣2ml，同時補樣2ml。重復3次，利用液相色譜測其含量。其累積釋放量如 圖2所示。體外釋放結果顯示，本發明所制備的卡己他賽腫瘤祀向脂質體在12化內的累積 釋藥量為70%左右，達到了較好的緩釋效果，避免了藥物突釋造成的不適反應。
[0037] 實施例7本發明卡己他賽腫瘤祀向脂質體的細胞抑制實驗
[0038] 腫瘤細胞表面的葉酸受體較正常細胞要多，采用乳腺癌MCF-7細胞來評價本發明 卡己他賽腫瘤祀向脂質體、卡己他賽普通脂質體和卡己他賽原料藥的細胞毒作用的強弱。
[0039] 取對數期的MCF-7細胞接種于96孔板中，每孔細胞數為5000個，將96孔板置于 37°C，二氧化碳含量為5%的培養箱中培養24小時。24小時之后，棄去舊的培養基，加入含 有不同濃度的本發明卡己他賽腫瘤祀向脂質體、卡己他賽普通脂質體和原料藥的新鮮培養 基，培養箱中繼續培養24小時，之后加入cck-8解育4h后，于酶標儀上450皿激發光下測 其0D值，計算細胞抑制率。結果如表1所示。使用GraphPadPrism軟件計算卡己他賽原料 藥、卡己他賽普通脂質體、本發明卡己他賽祀向脂質體對MCF-7細胞的半數抑制濃度（ICJ 分別為 7. 74nM、lOnM和 5. 36nM。 W40] 表1不同卡己他賽制劑對MCF-7細胞的增殖抑制作用[0041 ]
[0042] MCF-7細胞抑制實驗表明，本發明制備的卡己他賽腫瘤祀向脂質體對腫瘤細胞的 抑制作用比卡己他賽原料藥和卡己他賽普通脂質體都要強。本發明制備的腫瘤祀向脂質體 與腫瘤細胞表面的葉酸受體結合，通過細胞的內吞快速進入細胞，進而引發細胞的調亡。
[0043] 實施例8本發明卡己他賽腫瘤祀向脂質體穩定性考察
[0044] 將實施例1、2、3和4最終得到的脂質體粉末各取相等2份，放置于4°C冰箱中。于 一個月和Ξ個月后，用純化水稀釋復溶之后測其粒徑、包封率和含量（相對標示量）。其結 果如表2所示。 W45] 表2本發明卡己他賽腫瘤祀向脂質體的穩定性考察
[0046]
[0047] 卡己他賽腫瘤祀向脂質體穩定性考察結果可知，根據本發明提供的處方和制備方 法，可W得到具有高包封率，穩定性良好的卡己他賽腫瘤祀向脂質體。
【主權項】
1. 一種卡巴他賽腫瘤靶向脂質體注射劑，其特征在于，通過如下方法制備而成：將卡 巴他賽、磷脂、膽固醇、葉酸-聚乙二醇-雙硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶于有機溶劑中，減壓蒸發 除去有機溶劑，放置于真空干燥箱中，除盡有機溶劑，加入含有凍干保護劑的磷酸鹽緩沖液 形成混懸劑，勻化，整粒，冷凍干燥即可； 卡巴他賽、磷脂、膽固醇、葉酸-聚乙二醇-雙硬脂酰磷脂酰乙醇胺四者的重量比為 1:14 ~112:1. 75 ~28:0. 15 ~49. 7 ; 所用的磷脂選大豆磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、氫化大豆磷脂、蛋白卵磷脂中的 一種或二者的組合； 所述的聚乙二醇的分子量為800-5000 ; 其中有機溶劑為乙醇、甲醇或氯仿中的一種或幾種； 所述凍干保護劑為葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖中的一種或幾種； 磷酸鹽緩沖液的pH在3. 5~7. 5之間。2. 根據權利要求1所述的卡巴他賽腫瘤靶向脂質體注射劑，其特征在于，卡巴他賽、磷 月旨、膽固醇、葉酸-聚乙二醇-雙硬脂酰磷脂酰乙醇胺四者的重量比為1 :18~84:2. 25~ 21:0. 2 ~37. 3〇3. 根據權利要求1所述的卡巴他賽腫瘤靶向脂質體注射劑，其特征在于，磷酸鹽緩沖 溶液中含有抗氧劑和金屬離子絡合劑，抗氧劑選亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉和硫代 硫酸鈉中的一種或幾種；金屬離子絡合劑選乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸鹽。4. 根據權利要求3所述的卡巴他賽腫瘤靶向脂質體注射劑，其特征在于，凍干保護劑 在緩沖液中的質量百分含量為3%~10% ;抗氧劑在緩沖液中的質量百分含量為0. 1%~ 0. 2%，金屬離子絡合劑在緩沖液中的質量百分含量為0. 01%~0. 05%。
【專利摘要】本發明提供了一種卡巴他賽腫瘤靶向脂質體注射劑及其制備方法，屬藥物化學領域。該注射劑通過如下方法制備而成：將卡巴他賽、磷脂、膽固醇、葉酸-聚乙二醇-雙硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶于有機溶劑中，減壓蒸發除去有機溶劑，放置于真空干燥箱中，除盡有機溶劑，加入含有凍干保護劑的磷酸鹽緩沖液形成混懸劑，勻化，整粒，冷凍干燥即可。該制劑含有的葉酸-聚乙二醇-雙硬脂酰磷脂酰乙醇胺，不僅提高了脂質體在體內的循環時間，而且可以和腫瘤細胞表面的葉酸受體結合，使藥物快速聚集于腫瘤部位，提高卡巴他賽的療效，降低藥物的不良反應。并且存儲穩定性大大提高，克服了目前普通脂質體的不穩定性問題。制備簡單，使用方便，適合工業化生產。
【IPC分類】A61P35/00, A61K9/127, A61K31/337, A61K47/34, A61K9/19
【公開號】CN105380906
【申請號】CN201511002704
【發明人】趙永星, 朱松林, 李敏營, 陳永強, 崔浩, 陳水庫, 孟慶樂, 朱超越, 羅琦, 朱慧峰
【申請人】輔仁藥業集團有限公司, 開封制藥(集團)有限公司, 河南輔仁醫藥科技開發有限公司
【公開日】2016年3月9日
【申請日】2015年12月29日