用于預防和/或治愈細菌性陰道病的包含乳酸菌的組合物的制作方法
【專利說明】用于預防和/或治愈細菌性陰道病的包含乳酸菌的組合物
[0001] 本發明涉及陰道局部使用的包含乳酸桿菌的組合物。本發明的組合物可有效用于 預防和/或治愈陰道病原體（特別是陰道加德菌）和/或導致細菌性陰道病的大腸菌群引 起的陰道感染，甚至復發或反復。
[0002] 已知的是，陰道微生物由各種大小和性質的內源性微生物群組成，其在生理上作 為定殖生態環境的共生物存活，并且因此根據定義形成了其生態系統。這樣的生態系統在 整體上由內襯陰道和子宮的上皮細胞、向器官的內腔中分泌的腺上皮細胞和復雜的菌群代 表，它們共生地相互作用以保持適當的生理狀態。這樣獲得的平衡條件支持以生理病理現 象交替的動力學，其中，環境影響微生物群，微生物反過來通過主要上行的傳播影響細胞介 導的免疫防御的反應性。陰道微生物群體是混合物并包括約50種細菌，既有需氧菌又有 厭氧菌。通常的95%的微生物組分是乳酸桿菌，其形成"陰道乳酸桿菌復合體（Doderlein complex) "的一部分，而剩余的5%包括共生菌和條件致病菌，其中有表皮鏈球菌屬、類白喉 菌、消化鏈球菌、擬桿菌屬、大腸桿菌、陰道加德菌和念珠菌屬。
[0003] 因此，通過標準分析和分子技術表明，屬于乳酸桿菌屬的菌株代表了最廣泛的組 分：這樣的微生物的濃度為約IXl〇9CFU/ml，比每克腸道內容物中相同細菌組的濃度高約 100倍。乳酸桿菌的最具代表性的品種是嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、植物乳桿菌、短乳桿菌、 簡氏乳桿菌、干酪乳桿菌、纖維素乳桿菌、雷氏乳桿菌、德氏乳桿菌和唾液乳桿菌。
[0004] 關于陰道微生物一些研究表明，通常主要存在的乳酸桿菌在防止不需要的微生物 定殖中起到關鍵作用，在上述不需要的微生物中有導致細菌性陰道病、真菌感染、性傳播疾 病和泌尿道感染（UTI)的那些微生物。
[0005] 陰道壁細胞在維持這樣的平衡中具有主要作用，特別是上層和中層上皮細胞，其 增殖和成熟與激素相關。實際上雌激素水平影響陰道上皮細胞的糖原含量，并且后者的代 謝介導了有機酸的合成，將器官腔的pH降低至3. 5至4. 5的值。由于這個機制，外源病原 體的侵襲或通常以低量水平存在于陰道中的無害微生物的復制受到阻礙。在青春期前的受 試者中，陰道上皮的糖原含量低，且pH為約7。
[0006] 然而，由于不同的外源和內源性因素，如抗生素攝入、應激條件、妊娠相關的激素 調節、月經周期或攝入高濃度雌激素，這種復雜的已平衡生態系統經常發生失衡。
[0007] 因此，需要有效干預以使陰道生態系統再平衡和均衡，從而避免微生物平衡的改 變，這種改變會導致不再受到"陰道乳酸桿菌復合體"作用阻礙的條件微生物的盛行，導致 其中有加徳菌和/或腸道菌的條件菌引起的陰道病或陰道炎。
[0008] 在絕經后的婦女中，雌激素水平的下降導致陰道糖原濃度的降低，陰道pH值增加 并且厭氧菌成為主導，發生腸桿菌的顯著增殖。
[0009] 細菌性陰道病是育齡婦女中最常見的陰道感染，對于孕婦也常見。細菌性陰道病 代表所有陰道感染中的超過60%。國家衛生統計中心一全國健康和營養調查（NHANES) 在2001年至2004年對超過12000名美國婦女進行的調查表明，細菌性陰道病的患病率為 29. 2%，但只有15. 7%有癥狀。相當百分比的陰道病因此是無癥狀的，S卩，不會導致陰道炎 癥的典型癥狀，例如瘙癢、燒灼感和性活動疼痛。它們中有許多不造成任何刺激、發紅或腫 脹，但在所有情況下它們都會導致陰道排出物增加，為白色或淺灰色的分泌物，其特點是難 聞的氣味。由于陰道排出物根據月經周期階段有很大改變，女性往往無法發現正在發生的 感染，因此陰道病得不到診斷。陰道病不治療可導致更嚴重的陰道炎和感染的發生，主要是 在特別敏感的受試者中。此外，其可以幫助通過性行為傳播感染。
[0010] 因此，需要有效干預以預防和/或治愈陰道病的發作并因此預防和/或治愈陰道 炎和細菌感染的發作。
[0011] 細菌性陰道病的真正原因目前仍然是研究和調查的目標。引起大多數病例的主要 病原是革蘭氏不定菌陰道加德菌（80% -85% )(是加徳菌屬的唯一已知物種）和革蘭氏陰 性菌大腸桿菌（10%-15%)。另外，致病菌大腸桿菌也引起需氧菌陰道病，需氧菌陰道病會 引起早產的風險。
[0012] 不過，細菌性陰道病的發生和與其他風險因素的同時相互作用有關。在最大的風 險因素中，例如可舉出不當的個人衛生（例如，過度使用陰道沖洗液）、使用抗生素或子宮 內機械避孕器具如避孕環、此前懷孕和一些遺傳傾向。
[0013] 細菌性陰道病的婦女有不正常的有著難聞氣味的陰道排出物。可能的排出物通常 是白色或灰色，并可具相當流動性。此外，受影響婦女排尿時有灼燒感和/或外陰部瘙癢。 然而，如前所述，相當一部分受影響的婦女沒有任何癥狀。
[0014] 在大多數的情況下，細菌性陰道病不會引起任何嚴重的問題。然而，需要考慮一些 相當嚴重的潛在并發癥，例如，HIV感染的風險在暴露于該病毒的情況下增加，或感染其他 性傳播疾病（其中有生殖器病毒單純皰疹、衣原體病和淋病）的病原劑的風險增加。
[0015] 導致陰道病的細菌也可以感染子宮和輸卵管。這種感染名為盆腔炎性疾病，并可 導致不育癥或損害輸卵管，增加異位妊娠和不育的風險。
[0016] 已知的是，可以用具有抗生素活性的分子治療細菌性陰道病，其中甲硝唑或克林 霉素是非常普遍的具有抗生素活性的分子。二者都可以甚至在懷孕期間使用，但推薦的劑 量是不同的。盡管這些行為通常被認為可有效治療急性感染，但它們往往不能提供顯著保 護以免于可能的復發，復發可能在治療結束后的不同時間發生。此外，目前可用的抗生素分 子仍然代表基于有機合成藥物的方法，因此，對于陰道的生理環境是明顯外源性的。
[0017] 因此，需要避免使用合成分子而相反地采用與陰道的生理環境相容的治療進行有 效干預，以預防和/或治愈陰道病的發作、因此預防和/或治愈陰道炎和細菌感染。
[0018] 另外，需要在急性階段和可能的復發中具有天然有效的屏障作用，該作用隨時間 持續從而確保長期保護和保證了長期持續有效的預防和/或治愈。
[0019] 申請人在長期深入研究之后，對上述需要給出了回答。事實上，申請人在測試和研 究多株乳酸桿菌后，基于其在定殖陰道粘膜并產生抑菌殺菌分子方面的特殊活性，成功地 只選擇其中的一些乳酸桿菌。所選菌株有效抗擊陰道加德菌并抗大腸桿菌，并同時具有抗 炎活性，因為它們是產生白介素10(IL-10)和白介素4(IL-4)的菌株。具有這些特殊性質 (抗大腸桿菌和抗炎性）的所選菌株可有效抗擊細菌性陰道病、陰道炎和相關感染。
[0020] 本發明的目的是一種用于預防和/或治愈細菌性陰道病、優選復發或反復的陰道 病的組合物，其具有所附權利要求公開的特征。
[0021 ] 本發明的優選實施方式在以下詳細描述中給出。
[0022] 在本發明上下文中，組合物意味著包括藥物組合物、或補劑產品或醫療器械或食 品組合物。
[0023] 本發明的一個目的是屬于由ProbioticalS.p.A.公司于2013年1月3日在 DSMZ中心保藏并具有保藏編號DSM26955(LF15)的發酵乳桿菌物種的細菌菌株，和屬于 由ProbioticalS.p.A.公司于2013年1月3日在DSMZ中心保藏并具有保藏編號DSM 26956 (LF16)的發酵乳桿菌物種的細菌菌株，所述細菌菌株用于預防和/或治愈細菌性陰 道病、陰道炎和與致病性大腸菌群和/或加德菌相關的陰道感染，優選用于治療復發或反 復陰道病。
[0024] 本發明的一個目的是一種包含細菌混合物的組合物，所述混合物包含具有對抗陰 道加德菌和大腸桿菌的特殊抗菌活性和刺激白介素IL-4和白介素IL-10產生的抗炎癥活 性的菌株或由其組成。
[0025] 本發明的一個目的是一種組合物，其中所述混合物包含至少具有對抗陰道加德菌 和大腸桿菌的菌株與至少抗大腸桿菌抗菌活性和刺激白介素IL-4和白介素IL-10產生的 抗炎癥活性的菌株的組合或由其組成。
[0026] 本發明的一個目的是一種組合物，所述組合物包含細菌混合物或由其組成，所述 細菌混合物包含以下菌株的組合或由其組成：選自包含植物乳桿菌菌株LMGP-21021-LP01 和植物乳桿菌菌株LMGP-21020-LP02的組的至少一種細菌菌株；以及選自包含菌株發酵 乳桿菌DSM26955 (LF15)和菌株發酵乳桿菌DSM26956 (LF16)的組的至少一種細菌菌株； 所述組合物用于預防和/或治愈細菌性陰道病、陰道炎和與大腸菌群病原體和/或加德菌 相關的陰道感染；優選用于治療