5)，再加熱并未顯示預先觀察的玻璃化轉變的證據， 這表明全部莫昔克丁在第一熱循環期間結晶。這得到熔點觀察的進一步支持，盡管在第二 熱循環期間未觀察到結晶過渡。在從高于熔點但低于分解溫度的220°C冷卻樣品之后（圖 6)，第二熱循環僅顯示玻璃化轉變，這表明樣品在熔化物質冷卻后變為無定形。
[0232] 調節的DSC示于圖7。該結果與得自常規DSC的那些相符。在可逆熱流實驗中出 現玻璃化轉變，而在不可逆熱流條件下觀察到弛豫焓、結晶和分解。在可逆和不可逆熱流模 式中均發生熔化。
[0233] 熱轉化的莫昔克丁。將大約lg莫昔克丁（批號S090601)置于玻璃小瓶中，然后 將其置于~190°C的熱油浴中，并保持在該溫度大約5分鐘。在冷卻后，物質稍變黃。收集 淡黃色固體并在研缽和研棒中磨碎。為了評價經歷這些條件的莫昔克丁的純度，進行HPLC 和LC-MS。通過粉末X射線衍射（PXRD)光譜分析粉末。PXRD圖譜顯示顯著衍射峰，表明存 在可觀的量結晶物質，盡管仍余留某些量的無定形物質，如衍射圖譜中的暈狀包絡所示。這 指出無定形莫昔克丁在加熱至190°C時結晶（圖8)。
[0234] 無定形和熱轉化的結晶莫昔克丁的IR和拉曼譜圖示于圖9和圖10。與無定形莫 昔克丁相比，結晶莫昔克丁顯示重疊于約3500cm1寬峰上的2個尖峰，3471cm 1和3541cm、 結晶莫昔克丁的羰基伸縮振動顯示從1712cm1至1707cm 1的輕度紅移。這展示這些IR峰 能夠用來將該晶型區別于無定形莫昔克丁。
[0235] 獲得該熱轉變的溫臺微觀圖像（圖11)。體相、無定形莫昔克丁在約120°C展示浸 濕現象。隨著溫度升高浸濕顯著增加而樣品顯得流動，指出樣品已發生玻璃化轉變。該與 DSC觀察平行。在120至170°C，樣品保持該橡膠態。在約185°C白色斑點開始出現，而在 190°C出現大塊〃棱晶晶體〃。隨著溫度升高至205°C出現更多晶體。在210°C以上，晶體開 始熔化，在218°C完成。化合物在約230°C分解。溫臺微觀實驗證實DSC結果，確認莫昔克 丁從無定形態經玻璃化轉變轉化為橡膠態，隨后結晶，隨后熔化，然后分解。
[0236] 莫昔克丁 /MeOH的制備和表征。在50_60°C向0. 5ml甲醇逐漸加入無定形莫昔克 丁（lot#S090601)直至溶液變得飽和。將所得混合物冷卻至室溫和在短時間段之后形成棒 狀晶體。過濾固體，晶體圖像展示于圖12。晶體是雙折射的、指示結晶度。空氣干燥莫昔克 丁 /MeOH晶體lh。粉末X射線衍射確認其高度的結晶度（圖13)。
[0237] 空氣干燥的莫昔克丁 'MeOH晶體的熱分析展示50_150°C的0. 98%的重量損失（圖 14)。化合物在高于250°C分解。
[0238] DSC不顯示相應的溶劑損失，原因是其低含量。展示約150°C的小放熱，然后在 214°C熔化（圖15)。溶劑蒸發或相變導致150°C的小峰。熔點非常接近無定形莫昔克丁， 表示它們可能是相同形式。
[0239] 莫昔克丁 ??ΟΗ的制備和表征。在50-60°C，向1ml乙醇逐漸加入無定形莫昔克 丁（lot#S090601)直至溶液飽和。所得混合物置于室溫下，快速形成具有約2mm X 2mm X 0.5mm的大致尺度的大晶體。粉碎一個代表性晶體，拍攝晶體圖像，其描述于圖16。
[0240] 分離莫昔克丁 'EtOH晶體，空氣干燥2h。用研缽和研棒磨碎晶體，通過粉末X射線 衍射和熱分析進行分析。PXRD顯示強衍射圖譜（圖17)，其不同于莫昔克丁 ·ΜθΟΗ，這表明 它們具有不同的晶型。
[0241] 空氣干燥的莫昔克丁 ??ΟΗ的熱重分析展示隨25至200°C加熱的11. 87%的重量 損失（圖18)。該重量損失大致相應于2摩爾乙醇/1摩爾莫昔克丁。基于莫昔克丁：乙 醇=1:2的理論計算得出12. 57%乙醇重量含量，這與實驗值相符。化合物在高于250°C分 解。
[0242] 該物質的DSC展示肩部在90°C的尖銳吸熱線，其可能相應于乙醇損失，如圖19所 不。
[0243] 在100°C真空干燥莫昔克丁 ??ΟΗ晶體4h。DSC顯示真空干燥的莫昔克丁變為無 定形（圖20)。該進一步由粉末X射線衍射確認。PXRD上僅出現一些小的散射峰（圖21)， 原因可能是結構隨溶劑除去的不完全塌縮。
[0244] 結晶莫昔克丁 ??ΟΗ的單晶結構經測定展示單斜P2i空間群，晶胞參數 a= Π.2731(15)Α, b = 8.9286(12)A, c = 21.955(3)Α, β = 93.623(2)。， Τ= 2205.4(5)ζ = 2〇
[0245] 每不對稱單元存在1個莫昔克丁和2個乙醇分子，如圖22所述。這與TGA結果相 符。一個乙醇與一個莫昔克丁羥基基團成氫鍵作為供體，而另一個乙醇與又一莫昔克丁羥 基基團成氫鍵作為受體。莫昔克丁分子通過氫鍵一起連接，沿晶體學α方向形成通道，其 中容納乙醇分子（圖23)。
[0246] 莫昔克丁. ΙΡΑ的制備和表征。在50_60°C向1ml異丙醇溶液，逐漸加入無定形莫昔 克丁（lot#S090601)至飽和。冷卻所得溶液，保持在室溫下，引起大棱晶晶體的快速形成。 拍攝晶體圖像，描述于圖24。分離莫昔克丁 .IPA晶體，空氣干燥2h。粉末X射線衍射顯示 這些晶體是高度結晶的（圖25)。在莫昔克丁（lot#070201，不含BHT)用于結晶時，也形成 晶體，如圖26所示。空氣干燥的莫昔克丁 . IPA晶體的熱分析顯示從25-200°C的14. 87% 的單次重量損失（圖27)。該重量損失大約相應于2摩爾IPA/1摩爾莫昔克丁。基于莫昔 克丁 ：IPA = 1:2的理論計算得出15. 78% IPA重量含量，這良好地與實驗數據相符。化合 物在高于250°C分解。
[0247] 該物質的DSC展示肩部在90°C的尖銳吸熱線（圖28)，其可能相應于IPA的溶劑 損失。溶劑蒸發或相變導致在130°C的小峰，需要進一步研究。
[0248] 莫昔克丁 . IPA晶體在100°C真空干燥30分鐘。DSC顯示真空干燥的莫昔克丁變 為無定形（圖29)。
[0249] 莫昔克丁.正丁醇的制備和表征。向0.5ml正丁醇，逐漸加入無定形莫昔克丁 (lot#S090601)至飽和（保持溫度為50-60°C )。然后混合物轉移至-10°C過夜，在此期間 時間形成晶體（圖30)。分離莫昔克丁 /正丁醇晶體，空氣干燥2h。粉末X射線衍射顯示 這些晶體是高度結晶的（圖31)。
[0250] 空氣干燥的莫昔克丁 .正丁醇的熱分析顯示隨25至150°C加熱的14. 94%的重量 損失（圖32)。該重量損失相應于1. 5摩爾正丁醇/1摩爾莫昔克丁。基于莫昔克丁 ：正丁 醇=1:1. 5的理論計算得出14. 78%正丁醇重量含量。化合物在高于250°C分解。
[0251] DSC展示在65°C的尖銳吸熱線（圖33)，可能相應于正丁醇損失。去溶劑化的莫 昔克丁在215°C熔化，相應于多晶型A的熔點。去溶劑化溫度與莫昔克丁 . EtOH和莫昔克 丁 . IPA相比相對較低，表明正丁醇與莫昔克丁分子松散地結合。
[0252] 為了確認莫昔克丁 .正丁醇去溶劑化的過程，晶體在60°C真空干燥2h。DSC和 PXRD顯示真空干燥的莫昔克丁在干燥后變得無定形（圖34和35)。較不嚴格的干燥條件 未成功將該物質脫溶劑化物（圖36)。
[0253] 莫昔克丁 . MCH的制備和表征。向lml甲基環己燒（MCH)溶液加入約500mg無定 形莫昔克丁（l〇t#S090601)，同時加熱至50-60°C，蒸發濃縮混合物。在冷卻至室溫之后，加 入己烷，形成固體沉淀。用己烷洗滌固體，在室溫下短時間段干燥（圖像，圖37)。粉末X射 線衍射展示其結晶度（圖38)。
[0254] 空氣干燥的莫昔克丁 . MCH晶體的熱分析展示隨50至150°C加熱的1. 68%的重量 損失（圖39)。化合物在高于250°C分解。DSC展示在211 °C的明顯熔點（圖40)。該熔化 溫度符合熱轉化的固體和莫昔克丁 . MeOH，意味著它們是相同晶型。此外，得自甲醇和MCH 的莫昔克丁晶體的PXRD圖譜是等同的（MeOH的圖13vs. MCH的圖41)進一步確認來自兩種 溶劑系統的晶型的相似性。
[0255] 結論。從醇溶劑包括甲醇、乙醇、IPA和丁醇等得到一系列結晶莫昔克丁形式。制 備自甲醇和甲基環己烷的那些與熱轉化的那些具有基本相同的PXRD圖譜，表明它們具有 相似晶型。從乙醇、IPA和正丁醇的莫昔克丁的重結晶產生它們各自的溶劑化物。莫昔克 丁 . EtOH和莫昔克丁 . IPA溶劑化物在損失溶劑后變為無定形，但是令人驚訝地和出乎意料 地，莫昔克丁.正丁醇在快速除去溶劑后保持結晶。結晶莫昔克丁幾乎是非吸濕性的，而無 定形莫昔克丁稍有吸濕性。
[0256] 實施例2-制備包含莫昔克丁和體外釋放特征曲線的緩釋聚合物植入物。
[0257] 概要。莫昔克丁 API的晶型特性描述于圖2-8和10-12 :包括玻璃轉變溫度，結晶 和晶體恪化。制備含無定形或結晶莫昔克丁的聚合物植入物。對于無定形莫昔克丁植入 物，過程溫度保持在~120-170°C。發明人預見到高于120°C的任意溫度（但是在莫昔克丁 分解溫度之下）均可接受，原因是莫昔克丁在其玻璃轉變溫度以上會流動并且隨溫度升高 會更容易擠出（也即從120至170°C)。發明人令人驚訝地和出乎意料地發現，莫昔克丁在 高于170°C結晶。從而，存在對制備本發明植入物最佳的窄溫度范圍，并且，盡管與預期相 反，對于產生含有無定形莫昔克丁的植入物來說，在高于重結晶溫度的溫度進行是并不希 望的。在180-2KTC的溫度處理時，無定形莫昔克丁發生結晶，而該轉變具有改變所制備的 任何聚合物植入物的釋放特征曲線的效果。
[0258] 聚合物植入物。在二氯甲烷中制備莫昔克丁（40% w/w)，BHT(1. 4% )和聚d丙 交酯-乙交酯（75:25L:G ;0. 4iv)的溶液和在Buchi噴霧干燥器上噴霧干燥。將噴霧干燥 的粉末置于Tenius Olsen塑性計，在118°C擠出。將所得~0. 8mm直徑的聚合物絲條切割 為~2mm長度的小丸。將5個丸置于含有10mL 2% SDS的pH 7的PBS溶液的閃爍小瓶中。 制備3個重復試樣的小瓶和置于37°C的振搖（120rpm)水浴。在各采樣點移除溶液，用新 鮮的2% SDSPBS溶液替換和進行HPLC測試。結果示于圖44。體外釋放特征提供于圖44 中。額外地，樣品通過DSC測試（圖43)。在丸粒樣品中莫昔克丁是無定形的。
[0259] 在備擇批次中，在二氯甲烷中制備莫昔克丁（40% w/w)，BHT(1.4% )，和聚d丙交 酯/交酯-乙交酯（75:25L:G ;0. 4iv)的溶液和在Buchi噴霧干燥器上噴霧干燥。將噴霧 干燥的粉末置于3/8〃單螺旋擠出機（0. 75mm短合模面，延伸的混合螺旋，K-Tron微供料器 設至24g/hr)和在130°C擠出。將所得~0. 8mm直徑的聚合物絲條切割為~2mm長度的小 丸。將5個丸劑置于含有10mL 2% SDS的pH 7的PBS溶液的閃爍小瓶中。制備3個重復 試樣的小瓶和置于37°C振搖（120rpm)水浴中。在各采樣點移除溶液，用新鮮的2% SDS的 PBS溶液替換，進行HPLC測試。體外溶解數據示于圖45。
[0260] 實施例3-注射聚合物植入物的狗中的莫昔克丁血漿特征曲線。
[0261] 在第0天，對5只犬類動物經皮下給予1次注射的4個植入物（含有2000mcg無 定形莫昔克丁，75:25DLG(0. 4i. v.)，如上述-lot#438-148制備），將分開的含適當數量植 入物的植入物針用于各處理動物。血液樣品（大約5至7mL)收集在單獨標記的肝素化管 中。回收血漿和以等分試樣儲存冷凍，直至測試需要。犬研究的數據結果示于圖46。額外 地，植入物樣品也通過DSC和IR測試，其確定莫昔克丁在植入物中是無定形的。
[0262] 雖已在本發明優選實施方式中詳加描述，應理解的是本發明的上述描述期望是示 例性而非局限于上述的特定細節，原因是其許多明顯變化是可能的。所述實施方式的各種 變化或修飾可以發生于本領域技術人員。這些改變、變化和修飾能夠進行而不背離本發明 的范圍或主旨。
[0263] 1.莫昔克丁的多晶型A形式，具有約210°C的熔點。
[0264] 2.莫昔克丁 · 2Et0H溶劑化物，由下述參數表征：
[0265] a)單斜P2i空間群，其中
[0266] b) a= 11.2731(15)A;
[0267] c) b = 8.9286(12)A;
[0268] d) c = 21.955(3)A;
[0269] e) β = 93. 623(2)。；
[0270] f) v = 2205.4(5)A3;
[0271] g)Z = 2〇
[0272] 3.莫昔克丁 · 1. 5Bu0H溶劑化物。
[0273] 4.莫昔克丁 · 2IPA溶劑化物。
[0274] 5.制備段落1的莫昔克丁晶型的方法，包括下述步驟：在特定的溫度和時間條件 下加熱無定形莫昔克丁，或者將段落2的莫昔克丁溶劑化物快速地去溶劑化，由此制得所 述晶型。
[0275] 6.用于非人類動物的長效的聚合物植入物，包含PLGA和無定形莫昔克丁。
[0276] 7.段落6的植入物，其中PLGA具有約50-75%比約25-50%的L:G的L:G比率。
[0277] 8.段落7的植入物，其中所述L:G比率是75:25。
[0278] 9.段落8的植入物，其對內源寄生物具有活性的時間段大于3個月。
[0279] 10.段落9的植入物，其對內源寄生物具有活性的時間段大于4個月。
[0280] 11.段落10的植入物，其對內源寄生物具有活性的時間段大于6個月。
[0281] 12.段落6的植入物，其中所述內源寄生物是犬惡絲蟲。
[0282] 13.段落6的植入物，其中所述動物是貓或狗或牛。
[0283] 14.制備段落6的植入物的方法，包括下述步驟：
[0284] a)制備莫昔克丁和PLGA在適宜溶劑中的溶液；
[0285] b)加入0-1% (w/w)抗氧化劑；
[0286] c)用適宜的干燥手段除去溶劑；
[0287] d)使步驟c的經干燥物質在適宜溫度擠出以產生聚合物絲條；
[0288] e)切割或者縮小聚合物絲條的尺寸，由此產生所述植入物。
[0289] 15.段落14的方法，其中所述溶劑是二氯甲烷和所述干燥手段是Buchi噴霧干燥 器。
[0290] 16.段落14的方法，其中所述擠出在適于將莫昔克丁保持于無定形狀態的溫度進 行。
[0291] 17.段落16的方法，其中所述擠出不在高于180°C進行。
[0292] 18.段落17的方法，其中所述擠出在約110°C至約180°C進行。
[0293] 19.段落18的方法，其中所述擠出在約118°C進行。
[0294] 20.用于處理或預防動物中的寄生物感染的組合物，包含段落1的莫昔克丁晶型 或其藥學上可接受的鹽，和藥學上可接受的載體。
【主權項】
1. 用于非人類動物的長效的聚合物植入物，包含PLGA和無定形莫昔克丁。2. 權利要求1的植入物，其中PLGA具有約50-75%比約25-50%的L:G的L:G比率。3. 權利要求2的植入物，其中所述L:G比率是75:25。4. 權利要求3的植入物，其對內源寄生物具有活性的時間段大于3個月。5. 權利要求4的植入物，其對內源寄生物具有活性的時間段大于4個月。6. 權利要求5的植入物，其對內源寄生物具有活性的時間段大于6個月。7. 權利要求1的植入物，其中所述內源寄生物是犬惡絲蟲。8. 權利要求1的植入物，其中所述動物是貓或狗或牛。9. 制備權利要求1的植入物的方法，包括下述步驟： a) 制備莫昔克丁和PLGA在適宜溶劑中的溶液； b) 加入0-1% (w/w)抗氧化劑； c) 用適宜的干燥手段除去溶劑； d) 使步驟c的經干燥物質在適宜溫度擠出以產生聚合物絲條； e) 切割或者縮小聚合物絲條的尺寸，由此產生所述植入物。10. 權利要求9的方法，其中所述溶劑是二氯甲烷和所述干燥手段是Buchi噴霧干燥 器。11. 權利要求9的方法，其中所述擠出在適于將莫昔克丁保持于無定形狀態的溫度進 行。12. 權利要求11的方法，其中所述擠出不在高于180°C進行。13. 權利要求12的方法，其中所述擠出在約IKTC至約180°C進行。
【專利摘要】本發明提供新的抗寄生物形式和農藥形式的莫昔克丁，包括長效的聚合物植入物。所得化合物可以用于獸醫學組合物中，其用于處理、控制和預防動物中的內源和外源寄生物感染。
【IPC分類】A61K47/34, A61P33/00, A61K31/365
【公開號】CN105232529
【申請號】CN201510629669
【發明人】S·M·卡迪, B·馬, R·C·查普曼, C·楊, U·杰恩
【申請人】梅里亞有限公司
【公開日】2016年1月13日
【申請日】2012年11月30日
【公告號】CA2857958A1, CN104053660A, EP2785719A1, US8715711, US9044453, US20130143956, US20140323559, WO2013082373A1