凱林內酯的應用
【技術領域】
[0001] 本發明設及醫藥技術領域，具體設及凱林內醋的應用。
【背景技術】
[0002] 腎臟是人體的重要器官，用于保證機體內環境的穩定，是新陳代謝得W正常進行。 腎損傷時泌尿外科常見的急癥之一，對腎損傷做出適當的治療方案，對減輕患者的傷情，改 善預后情況至關重要。因此，近年來腎損傷保護藥物在不斷的研究和開發中。
[0003] 研究發現中藥對腎損傷具有明顯的保護作用，而且相對于西藥來說，中藥更加溫 和安全，副作用較小。弟活，傘形科、弟活屬植物，性溫，散表寒；桂風濕；利關節；止痛。主 外感風寒；頭痛無汗；風水浮腫；瘡瘍腫毒。用于陽瘦遺精，遺尿尿頻，腰膝冷痛，腎虛作喘， 五更泄瀉；外用治白齋風，斑秀。解表散寒，桂風勝濕，止痛。弟活中含有多種活性物質，如 凱林內醋、紫花前胡巧元、異虎耳草素、茵香酸對徑基苯乙醋、比克白巧內醋、佛手酪等，運 些活性物質具有多種藥用作用。其中，凱林內醋及W其為母核的凱林內醋類香豆素被報道 具有顯著的擴張血管和抗病毒作用。但是，目前并未見文獻報道凱林內醋具有防止腎損傷 的功效。
【發明內容】
[0004] 有鑒于此，本發明的目的在于提供凱林內醋的新應用，凱林內醋具有防止腎損傷、 保護腎損傷細胞的功效，使其能夠應用于腎損傷保護藥物的制備中。
[0005] 凱林內醋的化學結構式如下：
[0006]
[0007] 其中，作為優選，所述凱林內醋包括順式凱林內醋和/或反式凱林內醋。
[0008] 作為優選，所述腎損傷為順銷所致腎損傷。
[0009] 凱林內醋獲取途徑既可W從含有該成分的天然物質如弟活中提取，也可W利用化 學合成方法加W人工合成，如文獻《順式凱林內醋合成方法的改進》（尤文春等，中國現代應 用藥學，2010年第27卷第12期），作為優選，本發明所述凱林內醋從弟活中提取獲得，更進 一步優選地，采取W下方法獲得：
[0010] 步驟1、粉碎弟活根莖，加入乙醇溶液提取，提取液過濾、濃縮后加鹽酸調節抑為 2,加熱回流并濃縮蒸干獲得粗提物；
[0011] 步驟2、粗提物加入乙醇溶液復溶，通過大孔樹脂柱吸附，依次水洗脫4個柱體積， 40 %乙醇洗脫3個柱體積，60 %乙醇洗脫6個柱體積，收集60 %乙醇洗脫液，除去溶劑，濃縮 至浸膏，然后加入乙酸乙醋溶解、過濾，濾液除去溶劑，濃縮、干燥，獲得弟活提取物；
[0012] 步驟3、弟活提取物加甲醇溶解后，加入等量的粗硅膠中攬拌均勻，烘干后倒入到 含4~5倍量的200-300目硅膠柱中；石油酸平衡D-101柱子W后，利用石油酸-乙酸乙醋 50:1、20:1、10:1各洗脫4個柱體積，收集10:1洗脫部位濃縮蒸干，加甲醇溶解后，離屯、，取 上清液，利用高壓制備液相色譜進行制備分離，獲得凱林內醋。
[0013] 其中，步驟1所述弟活根莖與乙醇溶液的體積質量比優選為lg:6-10血。
[0014] 高壓制備液相色譜條件優選如下：
[0015] 安捷倫1260型制備色譜儀，色譜柱為化jiC18 (250X50mm);流動相為乙臘-水； 檢測波長為310nm;洗脫程序為0~60min，乙臘30%，水70% ;流速為30mL'min1;柱溫為 30 °C。
[0016] 步驟2所述粗提物加入乙醇溶液復溶優選為粗提物加入弟活根莖總重1倍量的 40%乙醇溶液溶解。
[0017] 述大孔樹脂柱優選為D-101型大孔樹脂柱。
[001引所述大孔樹脂柱重量優選為弟活根莖總重的2倍。
[0019] 步驟1所述乙醇溶液的體積百分濃度優選為70%。
[0020] 順式凱林內醋W及反式凱林內醋在對順銷所致HK-2細胞腎損傷模型的試驗中均 表現出對正常HK-2細胞的安全性W及對腎損傷細胞的保護作用。因此，本發明提供凱林內 醋在制備腎損傷保護藥物中的應用。
[0021] 由W上技術方案可知，本發明提供了凱林內醋在保護腎損傷細胞中的應用，從而 為臨床上防止腎損傷提供多一種安全有效的用藥選擇。凱林內醋在安全劑量內能夠有效地 保護腎損傷細胞，可進一步開發為腎損傷保護藥物，具有廣泛的應用前景。
【附圖說明】
[0022] 圖1所示為弟活提取物高壓制備液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0023] 本發明公開了凱林內醋的應用，本領域技術人員可W借鑒本文內容，適當改進工 藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易 見的，它們都被視為包括在本發明。本發明所述產品和制備方法W及應用已經通過較佳實 施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
【發明內容】
、精神和范圍內對本文所述的方法 和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。
[0024] W下就本發明所提供的凱林內醋的應用做進一步說明。
[002引實施例1:凱林內醋的提取分離
[0026] 將弟活根莖粉碎成粗粉，按體積/質量加入6~10倍的70%乙醇溶液提取兩次， 每次1. 5小時，合并過濾液，濃縮至無醇味后加水至藥材重量的1倍；濃縮液加入濃鹽酸調 節抑至2,加熱回流0. 5個小時，濃縮蒸干，加入藥材重量1倍量的40%乙醇溶液使其完全 溶解。水解液通過2倍藥材重量的D-101大孔樹脂柱（徑高比為1:8)吸附后，水洗脫4個 柱體積，40 %乙醇洗脫3個柱體積，60 %乙醇洗脫6個柱體積。60 %乙醇洗脫液合并，回收溶 劑，濃縮至浸膏。浸膏加入乙酸乙醋溶液，使其溶解完全，濾過，回收溶劑，濃縮至浸膏，60°C 真空干燥，粉碎即得弟活提取物。
[0027] 弟活提取物加適量甲醇溶解后，加入等量的粗硅膠（80-100目）中攬拌均勻，烘干 后倒入到含4~5倍量的硅膠（200-300目）柱中。石油酸平衡D-101柱子W后，利用石油 酸-乙酸乙醋50:1、20:1、10:1各洗脫4個柱體積，收集10:1部位濃縮蒸干。石油酸-乙 酸乙醋10:1洗脫部位加甲醇溶解后，離屯、，取上清液，利用高壓制備液相進行制備，收集凱 林內醋色譜峰，濃縮干燥后獲得凱林內醋。
[002引高壓制備液相色譜條件：安捷倫1260型制備色譜儀，色譜柱為化ji C18(250X50mm);流動相為乙臘（A)-水度）；檢測波長為310皿；洗脫程序為0~60min， A30%，B70% ;流速為 30血?min1;柱溫為 30°C。
[0029] 凱林內醋鑒定結果如下：
[0030] (-)-反式凱林內醋：1h匪R(400MHz,CD3OD) 5 :6. 25(1H，d,J= 9.甜z，H-3)，7.88(lH，d，J= 9.甜z，H-4)，7. 46(lH，d，J=8.細z，H-5)，6. 80(lH，d，J= 8.細z, H-6)，3. 74 (IH,d,J= 4. 3Hz, H-3' )，4. 92 (IHd,J= 4. 3Hz, H-4' )，1. 38 (3H, s, -C H3)，1.45(3H，s，-CH3)c"C NMR(100MHz，CD3〇D) 5 :163. 5(C-2)，112. 7(C-3)，146. 4(C-4)，129 .9 (C-巧，113. 8 (C-6)，156. 0 (C-7)，115. 9 (C-的，158. 0 (C-9)，112. 2 (C-10)，79. 9 (C-2' )，66. l(C-3' )，75.0(C-4' )，23. 2(C-5' )