物用截留分子量1000的透析袋透析2天，透析液為超純水，每3小時換一次水，冷凍干燥， 得自組裝納米粒（DOX-S-S-HCQ);
[0041] (2)自組裝納米粒負載吲哚菁綠（ICG/D0X-S-S-HCQ)的制備：
[0042] ①稱取6mg自組裝納米粒（DOX-S-S-HCQ)溶于0? 8ml二甲基亞砜中；
[0043] ②稱取D引噪普綠（ICG) 0? 8mg，溶于16ml超純水中，成D引噪普綠溶液；
[0044] ③攪拌下將自組裝納米粒溶液滴加到吲哚菁綠溶液中，冰浴下探頭超聲20min，得 包載吲哚菁綠（ICG)的自組裝納米粒；
[0045] (3)磷脂聚乙二醇葉酸（DSPE-PEG-FA)包裹負載吲哚菁綠的納米粒（ICG/ DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA)的制備：
[0046] 稱取磷脂聚乙二醇葉酸（DSPE-PEG-FA) 0? 9mg溶于濃度為5wt %的乙醇水溶液4ml 中，加熱到65°C至完全溶解，成磷脂聚乙二醇葉酸溶液；然后將包載吲哚菁綠（ICG)的自組 裝納米粒滴加到磷脂聚乙二醇葉酸溶液中，渦旋4min，室溫下攪拌5h，將溶液用截留分子 量3500的透析袋透析8h，每2小時換一次水，即得負載吲哚菁綠的自組裝多功能納米靶向 系統（ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA)。
[0047] 實施例3
[0048] 本發明在具體實施中，還可由以下步驟實現：
[0049] (1)合成自組裝納米粒（DOX-S-S-HCQ):
[0050] ①取作為連接臂的3, 3' -二硫代二丙酸105mg和二氯亞砜3ml置于燒瓶中，加入 15 y 1二甲基甲酰胺（DMF)，85°C攪拌回流4h，顏色由淺黃色變為橘黃色；用旋轉蒸發儀除 去多余的二氯亞砜，再加入2ml二甲基甲酰胺（DMF)，得酰氯溶液；
[0051] ②取羥基氯喹0. 5mmol溶于I. 5ml甲酰胺中，加入100 y 1三乙胺，冰浴攪拌下滴 加到酰氯溶液中，75°C油浴下反應4h，得酰氯化的羥基氯喹溶液；
[0052] ③將0. 5mmol阿霉素（DOX)溶于3ml甲酰胺中，加入100 y 1三乙胺，冰浴攪拌 下滴加入酰氯化的羥基氯喹溶液中，35°C油浴下攪拌12h，得反應物，反應物用截留分子量 1000的透析袋透析2天，透析液為超純水，每3小時換一次水，冷凍干燥，得自組裝納米粒 (DOX-S-S-HCQ)；
[0053] (2)自組裝納米粒負載吲哚菁綠（ICG/D0X-S-S-HCQ)的制備：
[0054] ①稱取8mg自組裝納米粒（DOX-S-S-HCQ)溶于Iml二甲基亞砜（DMSO)中；
[0055] ②稱取吲哚菁綠（ICG)lmg，溶于20ml超純水中，成吲哚菁綠溶液；
[0056] ③攪拌下將自組裝納米粒溶液滴加到吲哚菁綠溶液中，冰浴下探頭超聲20min，得 包載吲哚菁綠（ICG)的自組裝納米粒；
[0057] (3)磷脂聚乙二醇葉酸（DSPE-PEG-FA)包裹負載吲哚菁綠的納米粒（ICG/ DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA)的制備：
[0058] 稱取磷脂聚乙二醇葉酸（DSPE-PEG-FA) I. 2mg溶于濃度為6wt %的乙醇水溶液5ml 中，加熱到75°C至完全溶解，成磷脂聚乙二醇葉酸溶液；然后將包載吲哚菁綠（ICG)的自組 裝納米粒滴加到磷脂聚乙二醇葉酸溶液中，渦旋5min，室溫下攪拌3h，將溶液用截留分子 量3500的透析袋透析10h，每2小時換一次水，即得負載吲哚菁綠的自組裝多功能納米靶向 系統（ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA)。
[0059] 由上述可知，本發明選用3, 3' -二硫代二丙酸（或2, 2' -二硫代二乙酸等類似 物）為連接臂，連接含有氨基的阿霉素（DOX)和含有羥基的羥基氯喹（HCQ) ;D0X-S-S-HCQ 在水中可以自組裝形成納米粒，粒徑在100~200nm之間，與吲哚菁綠（ICG)混合后可以 形成包載ICG的納米粒。然后將此納米粒包載于磷脂聚乙二醇葉酸（DSPE-PEG-FA，1~ 4kDa)中：二硫鍵為還原響應型化學鍵，通過腫瘤細胞中高表達的谷胱甘肽的作用，迅速斷 裂，使得抗腫瘤藥物高效釋放；羥基氯喹具有抗腫瘤細胞自噬作用，能協同增強阿霉素的 抗腫瘤毒性；剛哚菁綠具有熒光成像和光熱治療作用；此外，在藥物表面進行磷脂聚乙二 醇葉酸（DSPE-PEG-FA，1~4kDa)修飾后，可以延長給藥系統的半衰期和提高它在血液循 環中的穩定性、改變給藥系統的生物學分布，并具有靶向性。本發明是一種兼具腫瘤靶 向，熒光成像，熱療與化療相結合，診斷與治療為一體的新型藥物體系ICG/DOX-S-S-HCQ/ DSPE-PEG-FA。并經試驗取得了非常滿意的有益技術效果，有關試驗資料如下：
[0060] 1、負載吲哚菁綠的自組裝多功能納米靶向系統（負載吲哚菁綠的自組裝多功能 納米靶向系統又稱ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA納米制劑）中DOX的含量測定：
[0061] 采用紫外分析法測定DOX的含量，以公式（1)計算樣品的載藥量，載藥量達到 36.0%,
[0062]
[0063] 2、ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA納米制劑的粒徑和電位表征：
[0064] 取適量ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA納米制劑用水稀釋至適宜濃度后，用 Nan〇-ZS90型激光納米粒度分析儀測得其粒徑和電位分別為130. 2nm和-23. 2±0. 30mv。
[0065] 3、ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA納米制劑對MCF-7細胞的增殖抑制試驗：
[0066] 按照細胞傳代的步驟將MCF-7細胞處理到單細胞懸液，計數后每孔接種5 X IO3個 細胞于96孔板上，培養箱培養（37°C，5% CO2) 24h，待細胞貼壁完全后棄去原培養基后加 藥，ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA組，DOX-S-S-HCQ組，以及DOX組，所加藥物濃度以阿霉 素（DOX)濃度呈一系列梯度用不含血清的培養基配制而成，DOX的濃度梯度依次為0, 0. 03 9, 0? 078, 0? 156, 0? 313, 0? 625, 1. 25, 2. 5, 5, 10 y g/ml，ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA 組設 有808nm激光對照組，并于加藥后一段時間照射808nm激光3min (功率2. 0)，繼續培養48h 后取出培養板，每孔加入50 yl預冷的50%三氯乙酸，終濃度為10%，靜置5min ;移至4°C 冰箱中靜置lh，取出，用超純水洗5遍，室溫空氣中干燥完全后，每孔中加入1 %乙酸配制的 SRB50 y 1，室溫下染色20min，倒掉染液，用1 %乙酸洗5遍，除去孔中未結合的染料，室溫空 氣干燥后用PH10. 5的lOmmol/lTris堿液150 y 1溶解，在空氣加熱搖床中震蕩10min，于 酶聯免疫檢測儀上測定各孔在515nm處的光吸收度值。計算抑制率（％) = (1-實驗組A/ 對照組A) X100%，由此得出上述樣品的半數抑制濃度（IC50)依次為：ICG/D0X-S-S-HCQ/ DSPE-PEG-FA 熱療組，ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA 非熱療組，DOX-S-S-HCQ 組，DOX 組分 別為 0? 5249, 1. 0132, 1. 0182, 1. 613 y g/ml。
[0067] 4、ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA 納米制劑對 MCF-7 細胞流式攝取試驗：
[0068] 將實驗分為 D0X-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA 組，DOX-S-S-HCQ 組，DOX 組，另設有空白細 胞組。取對數生長期的MCF-7細胞按照細胞傳代的步驟處理成單細胞懸液，計數之后鋪上 六孔板，每孔細胞數為3X10 5個/孔，培養箱（37°C，5%C02)中培養24h，貼壁完全后，棄去 培養基，加入用不含血清的培養基配制的藥物，分別設置〇. 5h，lh，2h，4h，6h的時間段進行 后期處理，藥液吸入對應EP管中，用PBS洗2遍，然后用0. 5ml的不含EDTA的胰酶消化處 理lmin，加入培養基lml，吸入對應的EP管，lOOOrpm/lOmin離心后，棄去上清，在沉淀中加 入2mlPBS吹打均勾，lOOOrpm/lOmin離心后，棄去上清，在沉淀中，加入0. 5mlPBS吹打均勾 后轉移到I. 5mlEP管中置于冰盒，等待流式上機檢測，測得時間點6h對MCF-7的流式攝取 量依次為：59.4% ,75.2% ,90.3%。
[0069] 5、ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA 納米制劑的藥效學試驗：
[0070] 準備10只雌性小鼠進行S-180肉瘤腹水培養，兩周后抽取腹水，用于小鼠實體 瘤的種植，當腫瘤的體積達到IOOmm 3以上時，腫瘤模型接種成功，將荷瘤小鼠隨機分為八 組，每組八只，分組情況如下：（1)空白組；（2)空白-激光組；（3) DOX組；（4) DOX-激光組； (5) DOX-S-S-HCQ 組；（6) DOX-S-S-HCQ 激光組；（7) ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA 組；（8) ICG/DOX-S-S-HCQ/DSPE-PEG-FA激光組。然后進行隔日給藥，給藥劑量按人鼠劑量換算為 4mg/kg，尾靜脈注射給藥。每天觀察小鼠的生存狀況并且稱體重量瘤體積（腫瘤體積V = AXB2/2)，然后通過相對瘤體積R = V/V。的變化（V。為給藥前一天瘤體積的大小）評價 藥物抗腫瘤活性。記錄的數據表明，給藥結束時和給藥前相比，各組瘤體積抑制率依次為 0? 02%、2. 59%、47. 36%、53. 56%、70. 23%、74. 62%、7