含至少一種干細胞和/或祖細胞,所述干細胞和/或祖細胞選自 由造血干細胞、間充質干細胞、內皮祖細胞和CXCR4陽性細胞組成的組。
[0050] 26.實施方案1-25中任一項所述的組合物,其中包含骨髓細胞的所述細胞群包含 至少IO7個單核細胞。
[0051] 27.實施方案1-25中任一項所述的組合物,其中包含骨髓細胞的所述細胞群包含 不多于IO9個單核細胞。
[0052] 28.實施方案1-25中任一項所述的組合物,其中包含骨髓細胞的所述細胞群包含 至少IO4個造血干細胞。
[0053] 29.實施方案1-25中任一項所述的組合物,其中包含骨髓細胞的所述細胞群包含 至少5 X IO2個間充質干細胞。
[0054] 30.實施方案1-25中任一項所述的組合物,其中包含骨髓細胞的所述細胞群包含 至少5 X IO2個內皮祖細胞。
[0055] 31.實施方案1-25中任一項所述的組合物,其中包含骨髓細胞的所述細胞群包含 至少5X IO3個CXCR4陽性細胞。
[0056] 32.實施方案1-31中任一項所述的組合物,其中包含骨髓細胞的所述細胞群含有 至少IO7個到不多于10 9個單核細胞、至少10 4個造血干細胞、至少5 X 10 2個間充質干細胞、 至少5 X IO2個內皮祖細胞和至少5 X 10 3個CXCR4陽性細胞。
[0057] 33.實施方案1-32中任一項所述的組合物,其中所述組合物在流速為2. 5mL/min 下遞送一小時后顯示出的細胞凋亡或其它細胞死亡率不超過約40%,所述遞送通過內腔尺 寸大約為〇· 36mm的導管和使用保持壓力為28. 39psi,柱塞力為4. 851bf的5mL注射器進 行。
[0058] 34.實施方案1-32中任一項所述的組合物,其中所述組合物經導管遞送,若所述 導管承受的最大剪應力不超過9101/秒,遞送一小時后顯示的細胞凋亡或其它細胞死亡率 不超過約40%。
[0059] 35. -種制備再生細胞組合物的方法,其包括:
[0060] (a)提供包含骨髓干細胞和/或祖細胞的第一細胞群;
[0061] (b)混合抗凝劑與所述第一細胞群,以便生成包含所述第一細胞群和抗凝劑的組 合物;
[0062] (c)富集包含所述細胞群和抗凝劑的所述組合物中的骨髓干細胞,以便生成包含 富集的骨髓干細胞和/或祖細胞的第二細胞群。
[0063] (d)分離包含含有富集的骨髓干細胞和/或祖細胞的所述第二細胞群中的部分; 并
[0064] (e)使用液體調節所述部分的粘度至37°C測量時不大于5. OcP,以便制備所述再 生細胞組合物。
[0065] 36.實施方案35所述的方法,其中包含骨髓干細胞和/或祖細胞的所述第一細胞 群包含從骨髓抽吸的細胞。
[0066] 37.實施方案36所述的方法,其中從骨髓抽吸的所述細胞通過抽吸針進行抽吸, 所述抽吸針的針/套管針為8-14型(gauge)。
[0067] 38.實施方案36中所述的方法,其中從骨髓抽吸的所述細胞通過抽吸針進行抽 吸,所述抽吸針的針/套管針為10-12型。
[0068] 39.實施方案36所述的方法,其中從骨髓抽吸的所述細胞通過抽吸針進行抽吸, 所述抽吸針的針/套管針為11型。
[0069] 40.實施方案35-39中任一項所述的方法,其中抽吸的所述細胞在小于20psi的負 壓下通過針/套管針進行抽吸。
[0070] 41.實施方案35-39中任一項所述的方法,其中抽吸的所述細胞在小于15psi的負 壓下通過針/套管針進行抽吸。
[0071] 42.實施方案35-39中任一項所述的方法,其中抽吸的所述細胞在小于IOpsi的負 壓下通過針/套管針進行抽吸。
[0072] 43.實施方案35-39中任一項所述的方法,其中抽吸的所述細胞在小于5psi的負 壓下通過針/套管針進行抽吸。
[0073] 44.實施方案35所述的方法,其中所述液體是自體血漿成分。
[0074] 45.實施方案35所述的方法,其中所述液體是自體血清或血漿成分,其包含液體, 從所述液體中分離出所述部分,其包括含有富集的骨髓源性干細胞和/或祖細胞的所述第 二細胞群。
[0075] 46.實施方案35所述的方法,其中在從個體中得到所述包含骨髓干細胞和/或祖 細胞的第一細胞群之前,所述抗凝劑與包含骨髓干細胞和/或祖細胞的所述第一細胞群接 觸。
[0076] 47.實施方案35所述的方法,其中在從所述個體中得到包含骨髓干細胞和/或祖 細胞的所述第一細胞群之后,所述抗凝劑與包含骨髓干細胞和/或祖細胞的所述第一細胞 群接觸。
[0077] 48.實施方案47中所述的方法,其中通過手動攪拌含有所述第一細胞群和所述抗 凝劑的容器,將所述抗凝劑與所述第一細胞群至少部分地混合。
[0078] 49.實施方案48所述的方法,其中所述攪拌包括滾動所述容器。
[0079] 50.實施方案35-49中任一項所述的方法,其中所述抗凝劑包括比伐盧定。
[0080] 51.實施方案50所述的方法,其中所述比伐盧定以lmg/mL-3mg/mL的濃度提供。
[0081] 52.實施方案50所述的方法,其中所述比伐盧定以I. 8mg/mL-2. 2mg/mL的濃度提 供。
[0082] 53.實施方案50所述的方法,其中所述比伐盧定以2. Omg/mL的濃度提供。
[0083] 54.實施方案35-49中任一項所述的方法,其中在37°C測量的所述粘度是 1.0 cP-5. OcP0
[0084] 55.實施方案35-49中任一項所述的方法,其中在37°C測量的所述粘度是 I. 8cP-3. OcP0
[0085] 56.實施方案35-49中任一項所述的方法,其中在37°C測量的所述粘度是 3. lcP-5. OcP0
[0086] 57.實施方案35-49中任一項所述的方法,其中所述液體是包含離子鹽的緩沖水 溶液。
[0087] 58.實施方案57所述的方法,其中所述緩沖水溶液包含氯化鈉。
[0088] 59.實施方案58所述的方法,其中所述再生細胞組合物中所述氯化鈉的量為 0· 9%〇
[0089] 60. -種在個體中改善缺血或與缺血相關癥狀的方法,其包括:
[0090] 識別個體,其具有缺血或與缺血相關的癥狀;
[0091] 向所述個體提供一種組合物,其包括:
[0092] (a)含有骨髓干細胞和/或干細胞祖細胞的第一細胞群,
[0093] (b)抗凝劑,以及
[0094] (C)緩沖水溶液和/或自體血清和/或自體血漿成分,
[0095] 其中,所述組合物具有的粘度在37°C測量時為不大于5. 0厘泊(cP);且
[0096] 確定缺血或與缺血相關的所述癥狀的改善,如通過在所述個體中測量或觀察血流 的增加、左心室射血分數的改善、心輸出量的改善、心臟瘢痕形成的減少、心臟重構的改善、 血管發生的增加、血管分布的增加、神經瘢痕形成的改善或免截肢(amputation-free)生 存率的增加。
[0097] 61.實施方案60所述的方法,其中得到包含骨髓干細胞的所述第一細胞群后,向 所述個體提供所述組合物不超過2小時。
[0098] 62.實施方案60所述的方法,其中得到包含骨髓干細胞和/或祖細胞的所述第一 細胞群后,向所述個體提供所述組合物不超過90分鐘。
[0099] 63.實施方案60所述的方法,其中得到含有骨髓干細胞和/或祖細胞的所述第一 細胞群后,向所述個體提供所述組合物不超過60分鐘。
[0100] 64.實施方案60-63中任一項所述的方法,其中在所述個體的缺血組織中的血流 被阻斷1-3分鐘。
[0101] 65.實施方案60-64中任一項所述的方法,其中在所述個體的缺血組織中的血流 被阻斷2分鐘。
[0102] 66.實施方案64-65中任一項所述的方法,其中所述血流被充氣囊阻斷。
[0103] 67.實施方案66所述的方法,其中所述囊被充氣以阻斷所述囊遠端至少80%的血 流。
[0104] 68.實施方案60-67中任一項所述的方法,其中所述組合物以不大于2. 5mL每分鐘 的速度提供給所述個體。
[0105] 69.實施方案60-68中任一項所述的方法,其中提供給所述個體的所述組合物不 經受超過9101/秒的最大剪應力。
[0106] 70.實施方案60-69中任一項所述的方法,其中所述組合物通過內腔尺寸約 0. 36mm的導管提供給所述個體。
[0107] 71.實施方案60-70中任一項所述的方法,其中所述組合物以每劑5mL的劑量提供 給所述個體。
[0108] 72.實施方案60-70中任一項所述的方法,其中所述組合物以不超過表2參數組1 的那些參數的一組參數條件提供。
[0109] 73.實施方案60-70中任一項所述的方法,其中所述組合物以不超過表2參數組2 的那些參數的一組參數條件提供。
[0110] 74.實施方案60-70中任一項所述的方法,其中所述組合物以不超過表2參數組3 的那些參數的一組參數條件提供。
[0111] 75.實施方案60-70中任一項所述的方法,其中所述組合物以不超過表2參數組4 的那些參數的一組參數條件提供。
[0112] 76.實施方案60-70中任一項所述的方法,其中所述組合物以不超過表2參數組5 的那些參數的一組參數條件提供。
[0113] 77.實施方案60-70中任一項所述的方法,其中所述組合物以不超過表2參數組6 的那些參數的一組參數條件提供。
[0114] 78.實施方案60-71中任一項所述的方法,其中所述組合物以單份劑量提供。
[0115] 79.實施方案60-71中任一項所述的方法,其中所述組合物以至少兩份劑量提供。
[0116] 80.實施方案60-71中任一項所述的方法,其中所述組合物以每劑5mL的四份劑量 提供。
[0117] 81.實施方案60-71中任一項所述的方法,其中所述組合物以每天單份劑量提供 多天。
[0118] 82.實施方案60-71中任一項所述的方法,其中所述組合物以每天至少兩份劑量 提供多天。
[0119] 83.實施方案60-82中任一項所述的方法,其中向所述個體提供所述組合物,接著 是在每劑提供后不超過5分鐘的休息期。
[0120] 84.實施方案60-82中任一項所述的方法,其中向所述個體提供所述組合物,接著 是在每劑提供后不超過4分鐘的休息期。
[0121] 85.實施方案60-82中任一項所述的方法,其中向所述個體提供所述組合物,接著 是在每劑提供后不超過3分鐘的休息期。
[0122] 86.實施方案60-82中任一項所述的方法,其中向所述個體提供所述組合物,接著 是在每劑提供后不超過2分鐘的休息期。
[0123] 87.實施方案60-82中任一項所述的方法,其中向所述個體提供所述組合物,接著 是在每劑提供后不超過1分鐘的休息期。
[0124] 88.實施方案83-87中任一項所述的方法,其中最后的休息期后,接著以不超過每 分鐘2. 5mL的速度提供3mL劑量的追加液,以排空任何殘留的細胞。
[0125] 89.實施方案60-86中任一項所述的方法,其中所述組合物于血管內提供。
[0126] 90.實施方案60-86中任一項所述的方法,其中所述組合物于肌內提供。
[0127] 91.實施方案60-86中任一項所述的方法,其中所述組合物于動脈內提供。
[0128] 92.實施方案60-86中任一項所述的方法,其中所述組合物于冠動脈內提供。
[0129] 93.實施方案60-92中任一項所述的方法,其中所述組合物通過使用涂有生物相 容材料的導管提供。
[0130] 94.實施方案60-93中任一項所述的方法,其中所述組合物包括實施方案1-34中 任一項的所述組合物。
[0131] 95.實施方案60-93中任一項所述的方法,其中所述組合物包括根據實施方案 38-61中的方法制得的任一再生細胞組合物。
[0132] 96.實施方案60-95中任一項所述的方法,其中所述缺血為心肌缺血。
[0133] 97.實施方案60-95中任一項所述的方法,其中所述缺血為危急的肢體缺血。
【附圖說明】
[0134] 圖1 :治療方法的圖示,在心臟導管插入操作中對于任意床旁治療達到的理想的 時間范圍。
[0135] 圖2A :輸注BMCePC 3個月后用于計算心肌體積的一部分心臟MR疊加。
[0136] 圖2B :輸注BMCePC 3個月后的左心室透壁指數(transmurality index)。
[0137] 圖2C :輸注BMCePC 24個月后用于計算心肌體積的一部分心臟MR疊加。
[0138] 圖2D :輸注BMCePC 24個月后的左心室透壁指數。
[0139] 圖3A :本研究入組受試者編號為H1IRC/CLI-STEM-002的治療前(左腿)的CT血 管造影(典型實施例),顯示出差的血管分布。
[0140] 圖3B :本研究入組受試者編號為H1IRC/CLI-STEM-002的治療12個月后(左腿) 的CT血管造影(典型實施例),與上圖3A相比顯示出改善的血管分布。
[0141] 發明詳沐
[0142] 本公開的實施方案的一些方面包括制備細胞群的方法,所述細胞群對缺血病癥 (例如:心肌缺血、肢體缺血)的轉好或改善與傳統細胞群相比顯著地提升。已形成細胞群 的特殊制劑及其使用方法,其出乎意料地改善了缺血病癥(如:與傳統方法相比,心肌缺血 后左心室射出分數(LVEF)大于4倍的改善,以及肢體缺血后免截肢生存率多于25%的