的鈣鹽，磷酸鉀鹽，Tris緩沖液，醋酸， 磷酸，檸檬酸鹽或硼酸鹽緩沖液中的至少一種。緩沖劑可以是檸檬酸鈉。緩沖劑的緩沖能 力是大約〇? 05-1. 0。緩沖劑的緩沖能力是大約0? 02-0. 2,或大約0? 01-0. 1。所需的pH水 平的范圍可以是大約3. 5-11. 5,大約3. 5-9,大約4. 5-8,或大約5. 0-7. 8。所需pH水平可 以是大約5. 5。肽試劑包括氨基酸序列KLKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T 0 4、T 0 4的N-末 端變異體、T 0 4的C-末端變異體、或T 0 4的異構體。組合物可進一步包括含水介質，其中 所述的肽試劑在所述含水介質內的濃度范圍是大約〇. 001-1，〇〇〇mg/ml。組合物可進一步包 括至少一種類固醇。
[0156] 根據另一【具體實施方式】的組合物用于對受試者皮膚組織施用，并包括含氨基酸序 列LKKTET或LKKTNT或其變異體的肽試劑，或者包括在所述組織內刺激LKKTET或LKKTNT 肽、或其保守變異體產生的刺激試劑，該組合物進一步包括季銨鹽和應用于所述受試者的 皮膚組織的外用載體。該肽試劑可包括氨基酸序列LKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T0 4、 T04的N-末端變異體或TP4的異構體。季銨鹽可包括苯扎氯銨。肽試劑的濃度可以是大 于0. 001-1，000mg/ml，所述季銨鹽在所述組合物內大約是0. 001-lwt%。該組合物可以是 溶液、凝膠、乳膏、糊劑、洗劑、噴霧劑、懸浮液、分散液、油膏，水凝膠、軟膏或泡沫制劑的形 式。該組合物可以是化妝品制劑。
[0157] 根據另一個【具體實施方式】的藥學或化妝品的組合，其包括含氨基酸序列LKKTET 或LKKTNT或其變異體的肽試劑，或者包括刺激LKKTET或LKKTNT肽、或其保守變異體產生 的刺激試劑，該組合物進一步包括季銨鹽，其中所述試劑和所述鹽可分別或一起對受試者 施用。該肽試劑可包括氨基酸序列LKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T 0 4、T 0 4的N-末端變異 體或TP 4的異構體。季銨鹽可包括苯扎氯銨。該組合可包括藥學、眼用或化妝品組合物， 其所含肽試劑的濃度可以是大于0. 001-1，〇〇〇mg/ml，其中所述季銨鹽在所述組合物內大約 是0.001-lwt%。該組合可包括眼用組合物，該眼用組合物進一步包括可眼用載體。該組合 物可包括滴眼液組合物。
[0158] 根據另一個【具體實施方式】，治療、阻止、抑制或降低組織由于對受試者施用季銨鹽 所造成的衰退、受損或損害的處理方法包括對所述受體施用所述季銨鹽以及對所述受試者 施用含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其變異體的肽試劑、或者在所述組織內刺激LKKTET 或LKKTNT肽或其保守變異體產生的刺激試劑。該試劑可在所述季銨鹽施用之前、同時或之 后對受試者施用。該試劑和所述鹽可作為組合物同時施用。該組合物可進一步包括可眼用 載體。該組合物可包括滴眼液組合物。該組合物可包括化妝品可接受的載體。該組合物可 以是溶液、凝膠、乳膏、糊劑、洗劑、噴霧劑、懸浮液、分散液、油膏，水凝膠、軟膏或泡沫制劑 的形式。肽試劑可包括氨基酸序列KLKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T 0 4、T 0 4的N-末端 變異體、TP 4的C-末端變異體或TP 4的異構體。季銨鹽可包括苯扎氯銨。包括在所述組 合物中的肽試劑的濃度可以是大約〇. 001-1，〇〇〇mg/ml，所述季銨鹽在所述組合物內大約是 0. 001-lwt%。
[0159] 根據另一個【具體實施方式】的組合物，其包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其 變異體的肽試劑、或者刺激LKKTET或LKKTNT肽或其保守變異體產生的刺激試劑、以及可 眼用載體、抗微生物作用的防腐劑、為所述組合物提供眼睛可接受滲透壓的高滲劑、舒適增 強劑、能夠調節組合物pH到所需眼用可接受pH水平的酸性或堿性pH調節劑中的至少一 種、以及基本維持上述所需pH水平的緩沖劑。該組合物可進一步包括抗氧化劑或氧隔離試 劑中的一種。抗氧化劑或氧隔離試劑可包括亞硫酸鈉、硫代亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫 酸氫鈉、硫脲、抗壞血酸、H)TA/乙二胺四乙酸二鈉、醋酸、檸檬酸、谷胱甘肽、乙酰半胱氨酸 或甲硫氨酸。抗氧化劑或氧隔離試劑在所述組合物內的濃度范圍是大約〇. 0001-1. 〇wt%。 抗微生物作用的防腐劑可包括以下中的一種：季銨化合物：苯扎氯銨、氯芐乙銨、西他氯 銨、西曲溴銨、苯度溴銨、苯佐氯銨；硫代水楊酸的烷基汞鹽：硫柳汞、硝酸苯汞、醋酸苯汞、 硼酸苯汞；對羥基苯甲酸酯類：對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯；螯合劑、乙二胺 四乙酸二鈉、葡萄糖酸鈉、丙酸鈉；醇類、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇；胍衍生物：氯己啶 (chlorohexidine)、聚亞己基縮二狐（polyhexamethylene biguanide)、山梨酸、硼酸、二氧 化氯、聚咪唑啉季銨鹽（polyquatemium)或肉豆蔻酰胺丙基二乙胺（myristamidopropyl diethylamine)。防腐劑在所述組合物內的濃度范圍是大約0.0001-5. 0% (w/v)。該組合 物可進一步包括至少一種眼用可接受穩定劑。穩定劑可包括多元醇、甘露醇、山梨醇、丙三 醇、蔗糖、氨基酸穩定劑丙氨酸（Ala)、賴氨酸（Lys)、或谷氨酸（Glu)中的至少一種。穩定 劑在所述組合物中的濃度范圍是大約〇. 〇l-l〇wt%。高滲劑包括離子化合物、堿金屬鹵代 物、堿土金屬鹵代物、CaCl2、KBr、KC1、LiCl、NaBr、NaCl、硼酸、非離子化合物、尿素、丙三 醇、山梨醇、甘露醇、丙二醇或葡萄糖右旋糖中的至少一種。該組合物的滲透壓的范圍可以 是50-1000m0smol。調節劑可包括NaOH或HC1中的至少一種。緩沖劑可包括醋酸鈉鹽、抗 壞血酸鈉鹽、硼酸鈉鹽、碳酸鈉鹽、磷酸鈉鹽、檸檬酸鈉鹽、葡萄糖酸鈉鹽、乳酸鈉鹽、丙酸鈉 鹽、碳酸鈣鹽、丙酸鈣鹽、磷酸鉀鹽、Tris緩沖液、醋酸緩沖液、磷酸緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液 或硼酸鹽緩沖液中的至少一種。所需的pH水平的范圍是大約3. 5-11. 5。緩沖劑具有的緩 沖能力是大約0. 05-1. 0。肽試劑可包括氨基酸序列KLKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T0 4、 T 0 4的N-末端變異體、T 0 4的C-末端變異體或T 0 4的異構體。該化合物進一步包括水 介質，其中所述的肽試劑在所述含水介質中的濃度范圍是〇. 001-1，〇〇〇mg/ml。該組合物可 以是溶液、凝膠、乳膏、糊劑、洗劑、噴霧劑、懸浮液、分散液、油膏，水凝膠、軟膏或泡沫制劑 的形式。該組合物可包括滴眼液組合物。肽試劑可在所述組合物中，組合物被磷脂膜、脂質 體、微球、納米顆粒或生物可降解多聚體中的至少一種所包裹，或者以肽-聚合物的結合物 形式存在。
[0160] 實施例
[0161] 胸腺素P 4 (TP 4)，是一個含43個氨基酸的分子，其促進了眼部創傷的愈合，降低 了眼部炎癥，并對角膜上皮具有抗細胞凋亡作用。在本研究中，檢測了 T 0 4對暴露于苯扎 氯銨（BAK)的培養人角膜上皮細胞的存活的作用。
[0162] 大約80%匯合的人角膜上皮細胞在用0%、0. 001%、0. 01%或0. 1%的BAK處理 15分鐘。在培養基內恢復3和24小時后，使用比色BrdU滲入分析來檢測細胞增值。使用 比色膜聯蛋白為基礎的細胞死亡分析來檢測細胞凋亡。在lmcg/ml TP 4中重復實驗，該劑 量在幾個已發表的研究中顯示有效。為進一步評估T 0 4阻止細胞凋亡的能力，角膜上皮細 胞用0.01% BAK±T 0 4處理超過5天。
[0163] 在所有使用過的BAK濃度下，與對照相比，角膜上皮細胞在3和24小時的恢復時 間的增殖被抑制了，細胞凋亡被提高了。在3和24小時的時間點，T 0 4沒有消除BAK的 有害作用；TP 4也沒有促進細胞增殖并且細胞凋亡沒有被抑制。然而，在更長的培養時間 (2-5天）時，TP 4處理顯著抑制了 BAK誘導的上皮細胞凋亡。另外，與只在培養基內培養 5天的細胞相比，T 0 4處理的細胞的細胞凋亡降低了。
[0164] BAK是在許多市售眼用溶液中使用的防腐劑，其在培養中誘導了上皮細胞的凋亡， 說明長時間的暴露對角膜健康是有害的。本文報道的研究說明T 0 4能夠克服BAK的有害 細胞凋亡前作用。因為許多含BAK的滴眼液通常在很長一段時間內使用，所以T 0 4是含此 種防腐劑的溶液的有用添加劑。
【主權項】
1. 肽試劑在制備用于治療受試者青光眼或干眼綜合癥的藥物中的應用，其中所述藥 物被配制成具有pH 6. 8-8. 1的眼用可接受的組合物，其中所述肽試劑包括氨基酸序列 LKKTET或其保守變異體，LKKTNT或其保守變異體、KLKKTET、LKKTETQ或胸腺素P 4 (T P 4)， 并且其中所述藥物含有濃度約0.0 Olmg/mL~約lOOOmg/mL的所述肽試劑，并且所述組合物 適合每日施用兩次或更多次。2. 根據權利要求1所述的應用，其中所述肽試劑包含氨基酸序列LKKTET或其保守變異 體、LKKTNT或其保守變異體。3. 根據權利要求1所述的應用，其中所述肽試劑包含氨基酸序列KLKKTET、氨基酸序列 LKKTETQ、T0 4。4. 根據權利要求1所述的應用，其中所述肽試劑是T M。5. 根據權利要求1所述的應用，其還進一步包括藥學可接受的載體，其為溶液、懸浮 液、凝膠、軟膏、局部插入物，或在脂質體、微球、納米顆粒或生物可降解內酯為基質的多聚 體中的包裹體。6. 根據權利要求1所述的應用，其中所述組合物包括含水介質。7. 根據權利要求1所述的應用，其中所述肽試劑的濃度范圍是大約0. 01mg/mL-600mg/ mL〇8. 根據權利要求1所述的應用，其中所述肽試劑的濃度范圍是大約0. lmg/mL-60mg/ mL〇9. 根據權利要求1所述的應用，其中所述肽試劑的濃度范圍是大約lmg/mL-6mg/mL。10. 根據權利要求1所述的應用，其用于治療干眼綜合征，其中所述肽試劑是T P 4。
【專利摘要】本發明涉及凍干的或可凍干形式的LKKTET和/或LKKTNT肽組合物，具體而言，本發明涉及包括肽試劑的組合物，所述肽試劑包括氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其變異體的肽試劑、或者包括刺激LKKTET或LKKTNT肽或其保守變異體產生的刺激試劑，該組合物包括氨基酸穩定劑或凍干填充劑中的至少一種，該組合物是凍干形式或能夠被凍干的形式。
【IPC分類】A61K38/08, A61P27/02, A61P27/06
【公開號】CN105106931
【申請號】CN201510532998
【發明人】大衛·克羅克福德, 阿蘭·L.·戈爾茨坦
【申請人】雷金納克斯生物制藥公司
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2006年6月19日
【公告號】CA2612405A1, CA2612410A1, CA2612522A1, EP1896050A2, EP1896050A4, EP1904080A1, EP1904080A4, EP1906986A1, EP1906986A4, US8383576, US20080214456, US20090118196, US20090131313, US20120071411, WO2006138707A1, WO2006138708A1, WO2006138708B1, WO2006138709A2, WO2006138709A3