一種具有抗炎鎮痛活性的塞隆骨提取物、制備方法及中藥制劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種藥物提取物，具體地說，涉及一種具有抗炎鎮痛活性的塞隆骨提 取物、制備方法及中藥制劑。
【背景技術】
[0002] 塞隆骨為倉鼠科動物高原齡鼠（MyospalaxbaileyiThomas)去腦的干燥全架骨 骼。夏、秋兩季器械捕捉，獵獲后立即處死，剝去皮、肉、去腦，剔凈殘留筋肉，及時陰干或低 濕烘干。用時打碎，水煎或泡酒服。具有祛風散寒除濕、通絡止痛、補益肝腎的功效，可用于 風寒濕痹引起的肢體關節疼痛、腫脹、屈伸不利，肌膚麻木，腰膝酸軟。研究表明（海平.塞 隆骨抗炎作用（II).高原醫學雜志，2002, 12(1) ;8-10 ;海平.塞隆骨鎮痛作用和對腦內 單胺類神經遞質的影響.山東中醫雜志，2001，20(4) ;232-234)塞隆骨具有一定的抗炎和 鎮痛作用，但現有技術中采用的都是用塞隆骨泡水或泡酒服用，其成分復雜，效果不明顯， 因此十分有必要制備分離塞隆骨的活性部位。
[0003] 中國專利文獻CN201410472564. 5,公開日2015. 01. 14,公開了 一種從塞隆骨 中提取7-0 -羥基膽固醇的方法，包括以下步驟：用1-15%乙醇-正己烷溶解塞隆骨至 50-200mg/mL;-維液相色譜：A相正己烷，B相乙醇，洗脫方式為B相1%等度12min、5% 等度 10min、8%等度 10min、15%等度 10min、30%等度 25min、50%等度 15min、70%等度 15min、100%等度15min，根據紫外吸收光譜收集目的組分；用2-15%乙醇-正己烷溶解至 50-100mg/mL;二維液相色譜：A相正己烷，B相乙醇，5%B相等度30min洗脫，根據紫外吸收 光譜收集目的組分，即得到目的提取物。該方法得到的7-0 -羥基膽固醇純度可達到99% 以上。
[0004] 然而，目前還未見從塞隆骨中分離純化獲得具有顯著抗炎鎮痛活性成分的相關報 道。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種具有抗炎鎮痛活性的塞隆骨提 取物。
[0006] 本發明的再一的目的是提供所述的塞隆骨提取物的制備方法。
[0007] 本發明的另一的目的是提供供所述的塞隆骨提取物的用途。
[0008] 本發明的第四個目的是提供一種具有抗炎鎮痛活性的中藥制劑。
[0009] 為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：
[0010] 為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：一種塞隆骨提取物的制備方 法，包括以下步驟：
[0011] ⑴粉碎；
[0012] (2)提取：減壓蒸餾提取塞隆骨脂溶性提取部位；
[0013] (3)萃取：將步驟⑵所得脂溶性提取部位用去離子水溶解，先用石油醚萃取，水 相再用乙酸乙酯進行萃取，濃縮至干得到乙酸乙酯部分；
[0014] (4)柱分離：
[0015] 干法拌樣：在乙酸乙酯部分中加入甲醇充分溶解，再加入硅膠進行拌樣，研碎至粉 末狀；
[0016] 干法裝柱：在柱子中裝入硅膠和拌好的樣品，以乙酸乙酯：甲醇=1:1的溶劑作為 洗脫液進行洗脫，洗脫液干燥即得塞隆骨提取物。
[0017] 優選的，所述步驟（2)為在70攝氏度下用體積比為95%乙醇減壓蒸餾提取，提取 液濃縮至干，得到塞隆骨脂溶性提取部位。
[0018] 優選的，所述步驟（4)中裝入柱子的硅膠為200-300目。
[0019] 優選的，所述步驟（4)中裝入柱子的硅膠為拌后的樣品體積的40-60倍。
[0020] 優選的，所述步驟（4)中洗脫時依次以石油醚：乙酸乙酯=4:1、2:1和1:1進行 梯度洗脫。
[0021] 優選的，所述步驟（4)中通過TLC的位置和顯色確定餾分是否一致，收集餾分一致 的部分進行干燥得塞隆骨提取物。
[0022] 為實現上述第一個目的，本發明公開了由上述的制備方法制備的塞隆骨提取物。
[0023] 為實現上述第三個目的，本發明采取的技術方案是：上述塞隆骨提取物在制備抗 炎鎮痛藥物中的應用。
[0024] 為實現上述第四個目的，本發明采取的技術方案是：一種具有抗炎鎮痛活性的中 藥制劑，其由上述塞隆骨提取物或者添加藥物學常用的輔料和藥學可接受的載體制成。
[0025] 優選的，所述塞隆骨提取物的質量分數20-90%。
[0026] 其中經檢測，具有明顯抗炎鎮痛活性的部位是：石油醚：乙酸乙酯=1:1洗脫部分 (得到白色粉末狀和針狀晶體混合物）。
[0027] 本發明優點在于：本發明所獲得的塞隆骨提取物具有抗炎鎮痛活性，可以制備抗 炎鎮痛藥物，尤其是中藥制劑。該中藥制劑中的塞隆骨提取物可占制劑總質量的20-90%， 其余可添加藥物學常用的輔料和藥學可接受的載體。
【具體實施方式】
[0028] 實施例1本發明的塞隆骨提取物的制備
[0029] 一、方法步驟
[0030](1)取塞隆骨風干品進行粉碎，可以為粉碎后過120目篩。
[0031] (2)提取：在旋轉蒸發儀70攝氏度下用體積比為95%乙醇提取4次，2h/次，再將 這4次的提取液合并，減壓濃縮至干，得到塞隆骨脂溶性提取部位。（高濃度乙醇提取可避 免大極性物質被同時提出，減少分離過程中的物質干擾）。
[0032] (3)脂溶性部分的萃取：去離子水溶解，分別用石油醚和用乙酸乙酯進行萃取，每 次萃取靜置半小時，萃取4一6次，合并萃取液分別濃縮至干得到石油醚部分和乙酸乙酯部 分。具體是：先用石油醚進行萃取，目的是減少乙酸乙酯部分中的小極性雜質。石油醚萃取 的水相再用乙酸乙酯萃取，有機相即萃取液。
[0033] (4)柱分離：乙酸乙酯部分
[0034] 干法拌樣：在5g的乙酸乙酯部分中加入15ml純甲醇溶液充分溶解，再加入約15g 200-300目硅膠進行拌樣，研碎至粉末狀；
[0035] 干法裝柱：裝柱硅膠為200-300目，約干法拌樣所得粉末狀樣品的50倍
[0036] 必須保證柱子平、實、正三個原則；將拌好的樣品均勻的倒入柱子里，放一團棉花， 防止沖柱時把樣品沖起來；則以石油醚：乙酸乙酯=4:l(v/v)的溶劑開始沖柱，至淡黃色 色帶無色為止，換石油醚：乙酸乙酯=2:1的梯度繼續沖，同上，依次以石油醚：乙酸乙酯 =1:1梯度沖到色帶跑完為止，最后點板子進行合并。
[0037] 所述點板子即以硅膠板為固定相，乙酸乙酯：石油醚=1:1. 5(體積比）為流動相， 顯示劑為5%硫酸乙醇溶液，以色譜板上至下第二個點（最大的點）顯色為紫色點的部分進 行合并。
[0038] 點板子的目的是合并洗脫液中餾分相同的部分。
[0039]二、結果
[0040] 其中經檢測，具有明顯抗炎鎮痛活性的部位是：石油醚：乙酸乙酯=1:1洗脫部 分（得到白色粉末狀和針狀晶體混合物），本發明所得塞隆骨脂溶性部分部分的純化產物 稱之為SLG-e。
[0041] 本發明所得的塞隆骨提取物可以制備抗炎鎮痛藥物，尤其是中藥制劑。該中藥制 劑中的塞隆骨提取物可占制劑總質量的20-90%，其余可添加藥物學常用的輔料和藥學可 接受的載體。
[0042] 三、實驗
[0043] 1.本發明的塞隆骨提取物SLG-e對以二甲苯所致的小鼠耳腫脹急性炎癥模型的 影響
[0044] 1. 1實驗動物
[0045] 昆明種小鼠，雌性，6-8周齡，體重20 - 25g，分為5組，每組10只。購自青海省實 驗動物中心。
[0046] 1.2受試藥物及實驗材料：；
[0047] 二甲苯，塞隆骨脂溶性部分部分純化產物SLG-e
[0048] 1. 3實驗方法
[0049] 小鼠隨機分組，連續給藥一周，每鼠于右耳廓均勻涂10-50iil二甲苯，左耳作對 照。2小時后脫椎處死，剪下小鼠耳廓，用9mm的穿孔器將耳廓圓片取下，稱重。
[0050] 1. 4結果
[0051] 表1 :塞隆骨提取物對二甲苯所致的小鼠耳腫脹的抑制作用
[0052]
[0053] *p〈0. 05, **p〈0. 01，***p〈0.OOlvsModel
[0054]SLG-e能明顯抑制（P〈0. 05,P〈0. 01)二甲苯所致的小鼠急性炎癥反應，表現出很 好的量效關系。
[0055] 2.SLG-e對蛋清致大鼠足腫脹的影響
[0056] 2. 1實驗動物
[0057]SD大鼠，雌雄性兼備，6-8周齡，體重120 - 150g，分為5組，每組10只。購自青海 省實驗動物中心。
[0058] 2. 2受試藥物及實驗材料：
[0059] 塞隆骨提取物（SLG-e)，新鮮雞蛋清。自制大鼠足腫脹測定儀。
[0060] 2. 3實驗方法
[0061] 選用健康SD大鼠50只，雌雄各半，體重150 士 30g，隨機分為5組，分別為空白對 照組、陽性對照組和SLG-e高、中、低劑量組，按照表2所列劑量與途徑給藥。空白對照組灌 胃等容積的生理鹽水，每日給藥1次，連續給藥7d實驗前于每只大鼠左后足踩關節處做標 記，用外徑千分尺測定大鼠左后足厚度。末次給藥30min后于大鼠左后足拓皮下