純化的多糖水提液濃縮液加入乙醇溶液，使乙醇終濃度達到80%v/ v，所得沉淀干燥，即得到黃刺果實多糖BDP共計I. 355g。
[0035] 實施例3 :黃刺果實多糖的制備
[0036] 1)黃刺果實脫脂：取成熟的黃刺（即直穗小檗）的果實400g烘干，粉碎后過篩； 取黃刺果實與石油醚混合，超聲后再回流提取，離心除去提取液，殘渣過濾，揮干石油醚，得 已除脂黃刺果實殘渣；
[0037] 2)黃刺果實除單糖：已除脂黃刺果實殘渣與乙醇混合，所述乙醇濃度為70~85% v/V，超聲提取，離心除去提取液，殘渣過濾后揮干乙醇，得已除單糖黃刺果實殘渣；
[0038] 3)黃刺粗多糖提取：將步驟2)所得已除單糖黃刺果實殘渣與純水混合，回流提 取，離心得到提取液，殘渣過濾后棄去；提取液濃縮得到粗多糖提取液；
[0039] 4)黃刺粗多糖的純化：粗多糖提取液中依次采用H2O2,進行脫色、Savege法除去蛋 白質，再透析除去3500Da以下小分子物質，得到純化的多糖水提液；
[0040] 5)黃刺果實多糖的制備：將步驟4)所得的已純化的多糖水提液濃縮液加入乙醇 溶液，使乙醇終濃度達到70%v/v，所得沉淀用20mL無水乙醇洗滌3次，其洗滌后的沉淀物 進行噴霧干燥，使得物料水分含量降至10%以下，得到黃刺果實多糖BDP共計I. 67g。
[0041] 對本發明方法制備的黃刺果實多糖進行蒽酮-硫酸法測定，其中多糖含量為93% ±2w/w〇
[0042] 實施例4黃刺果實多糖體外抗腫瘤實驗
[0043] (1)實驗藥物：黃刺果實多糖，為本發明制備所得，即為白色粉末固體。設定的濃 度為 521yg/mL，256yg/mL，128yg/mL，64yg/mL，32yg/mL，16yg/mL，8yg/mL(本發明 黃刺果實多糖劑量或濃度均以多糖質量計算）；
[0044] (2)試劑與儀器：DMEM培養基、二甲基亞砜DMS0、青霉素、鏈霉素（美國Sigma公 司）、小牛血清（FCS)(美國Hyclone，SouthLogan，UT)、3-(4,5_ 二甲基-2-噻唑基）-2， 5-二苯基-2H-四氮唑基（MTT)(美國Amresco0793) ;C02恒溫培養箱；Bi〇-Rad680型酶 標儀，美國伯樂公司；對數生長期的五種細胞人胃癌細胞BGC-823、乳腺癌細胞MCF-7和 MDA-MB-231、肝癌細胞IfepG2和SMMC-7721 (上海生命科學研究院細胞資源中心）。
[0045] (3)實驗過程：取五種對數生長期的細胞按1*105細胞密度接種于96孔板中， 培養過夜，更換無血清培養基；將制備所得的黃刺果實多糖稀釋至不同濃度（521yg/mL， 256yg/mL，128yg/mL，64yg/mL，32yg/mL，16yg/mL，8yg/mL);加入過夜培養的細胞中， 同時設立空白對照組；震搖混合均勻，置于37°C5%濃度的C02恒溫培養箱中培養，48小時 后，每孔添加MTT(5mg/mL) 20yL，置于37°C5 %濃度的0)2恒溫培養箱中繼續培養4小時， 棄上清（培養液），每孔加入100yL的DMS0,樣品震搖15min，用酶標儀于570nm處測定吸 光值（OD);實驗重復三次。細胞抑制率（CellVability) (%) = (0D對照組-OD實驗組）/ (OD對照組-OD空白組）X100% ?
[0046] (4)體外抗腫瘤實驗結果
[0047] 表1黃刺果實多糖成分對胃癌細胞、肝癌細胞、乳腺癌細胞的抑制率（％ )
[0048]
[0049] 由表1可知，本發明黃刺果實多糖不同濃度作用于三類腫瘤細胞48小時后，其腫 瘤細胞的生長均受到不同程度的抑制，并且，隨著黃刺果實多糖濃度的增加，細胞生長抑制 率也逐漸增加，呈現出較好的量效關系，尤其是對肝癌細胞的抑制率在512yg/mL時均達 到40%以上。因此，黃刺果實多糖對處于對數生長期的五種細胞人胃癌細胞BGC-823、乳腺 癌細胞MCF-7和MDA-MB-231、肝癌細胞H印G2和SMMC-7721均有較好的抗腫瘤活性，尤其適 合對抗肝癌細胞。
【主權項】
1. 黃刺果實多糖在制備抗腫瘤的食品、藥品或保健品中的用途。2. 根據權利要求1所述的用途，其特征在于：所述腫瘤為良性或惡性腫瘤。3. 根據權利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述腫瘤為胃癌、肝癌或乳腺癌。4. 根據權利要求1~3任意一項所述的用途，其特征在于：所述腫瘤為肝癌。5. 根據權利要求1~4任意一項所述的用途，其特征在于：所述黃刺果實多糖為小檗 科植物直穗小檗Berberis dasystachya Maxim.果實的提取物，提取物中多糖含量為60~ 95% w/w〇6. 根據權利要求5所述的黃刺果實多糖，其特征在于：提取物中多糖含量為80~95% w/w，進一步為 90 ~95% w/w。7. 根據權利要求1~6任意一項所述的用途，其特征在于：所述黃刺果實多糖是以黃 刺果實為原料，由水提醇沉法制備得到；進一步地，所述水提醇沉法具體操作如下：將黃刺 果實脫脂、去單糖后，加水提取，水提液脫色、除蛋白、透析除小分子后，加入乙醇至乙醇終 濃度達到60~85% v/v，靜置，待沉淀完全，取沉淀，干燥，即得到黃刺果實多糖；更進一步 地，透析除去的小分子分子量在3500Da以下。8. 根據權利要求7所述的用途，其特征在于：脫脂具體操作如下：將黃刺果實粉碎后， 過篩，采用石油醚或乙醚為提取溶劑，提取后的殘渣過濾，揮干溶劑，得已脫脂黃刺果實殘 渣；去單糖的具體操作如下：所得已脫脂黃刺果實殘渣，以70~85% v/v乙醇提取，提取后 的殘渣揮干溶劑，即得已除單糖黃刺果實殘渣；優選的乙醇濃度為80% v/v。9. 根據權利要求7所述的用途，其特征在于：透析除小分子后加入乙醇至含醇量至 70 ~80% v/v，優選為 75±2% v/v。
【專利摘要】本發明提供了黃刺果實多糖在制備抗腫瘤的食品、藥品或保健品中的用途。經體外抗腫瘤實驗證明，黃刺果實多糖對處于對數生長期的人胃癌細胞、乳腺癌細胞、肝癌細胞均有較好的抗腫瘤活性，尤其對肝癌細胞的抑制活性極為顯著，可將黃刺果實多糖應用于抗腫瘤的食品、保健品或藥物。
【IPC分類】A61P35/00, A23L1/09, A61P1/16, A61K31/715
【公開號】CN105030811
【申請號】CN201510323183
【發明人】索有瑞, 韓麗娟, 楊芳, 楊永晶
【申請人】中國科學院西北高原生物研究所
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年6月9日