氮（NO)測定試劑盒說明書測定雞血清中NO含量。
[0076] 5、試驗(yàn)結(jié)果 (1)試驗(yàn)組1~4淋巴細(xì)胞增殖明顯大于病毒對(duì)照組，表明本發(fā)明中藥成分組方制劑能 夠促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的特異性免疫功能，而間接發(fā)揮抗NDV的作用。
[0077] (2)試驗(yàn)組1~4干擾素含量不同程度的高于病毒對(duì)照組，表明本發(fā)明中藥成分組 方制劑能夠促進(jìn)干擾素的分泌，提高機(jī)體非特異性免疫應(yīng)答能力，進(jìn)而發(fā)揮抗病毒作用。
[0078] (3)本發(fā)明中藥成分組方制劑可不同程度的提高NDV感染雞血清中GSH-PX、SOD活 力，而對(duì)增強(qiáng)CAT活力的作用不強(qiáng)，也能使血清中MDA、NO含量下降，低于病毒對(duì)照組，表明 本發(fā)明中藥成分組方制劑可有效清除機(jī)體內(nèi)的自由基，進(jìn)而提高雞的抗氧化能力。
[0079] 五、本發(fā)明中藥成分組方制劑抗NDV作用結(jié)果研究 1、病毒液的配制 用PBS將病毒液配制成100ELD50備用。
[0080] 2、試驗(yàn)動(dòng)物的分組和處理 將210只健康且體重接近的21日齡SPF雛雞隨機(jī)分成7組，即病毒對(duì)照組、病毒唑?qū)?照組、對(duì)比例對(duì)照組和4個(gè)本發(fā)明中藥成分組方制劑，即試驗(yàn)組1~4。對(duì)各組雛雞肌肉注 射新城疫病毒稀釋液100ELD50 0.1 mL/只，攻毒后8h，對(duì)試驗(yàn)組1~4雛雞分別灌服實(shí)施 例1~4中藥成分組方制劑，0. 5mL/只，一天2次，連續(xù)3d，而對(duì)比例對(duì)照組灌服相同劑量 的對(duì)比例1中藥成分組方制劑，病毒對(duì)照組灌服相同劑量的生理鹽水，病毒唑?qū)φ战M灌服 相同劑量的病毒挫。
[0081] 分別于攻毒前1天（D0)、攻毒后1天（D1)、3天（D3)、4天（D4)和5天（D5)天，每 組隨機(jī)抽取5只，心臟采血，分離血清，分裝后標(biāo)記以備用。
[0082] (1)測定雛雞的免疫器官指數(shù) 同時(shí)，將病死雞稱重后剖殺，分別采集脾臟和法氏囊，并稱重、記錄數(shù)據(jù)。計(jì)算免疫器官 指數(shù)的方法為：脾臟指數(shù)=脾臟重量g/體重kg ;法氏囊指數(shù)=法氏囊重量g/體重kg。
[0083] (2)動(dòng)物發(fā)病率和病死率的統(tǒng)計(jì) 從攻毒后第二天開始，每天觀察并記錄每組雛雞的發(fā)病數(shù)及死亡數(shù)，計(jì)算每組雛雞的 發(fā)病率及病死率，直至試驗(yàn)結(jié)束。發(fā)病率=發(fā)病數(shù)/雛雞總數(shù)X 100% ;病死率=死亡數(shù)/發(fā) 病雛雞總數(shù)X 100%。
[0084] 3雞血清中干擾素的測定 (I) ELISA檢測雞血清中α -干擾素（IFN- α )方法 根據(jù)ELISA試劑盒說明書測定雞血清中α -干擾素含量。
[0085] (2) ELISA檢測雞血清中γ -干擾素（IFN- γ )方法 根據(jù)ELISA試劑盒說明書測定雞血清中IFN-γ的含量。
[0086] 4試驗(yàn)結(jié)果 (1)本發(fā)明中藥成分組方制劑對(duì)NDV感染雛雞脾臟指數(shù)的影響 表5脾臟指數(shù)（g/kg)
注：同列數(shù)據(jù)上標(biāo)含有不同的小寫字母表示差異顯著（P〈〇. 05)，含有相同的小寫字母 表示差異不顯著（P>〇. 05)下表同。
[0087] 由表5可知，攻毒后4天，試驗(yàn)組顯著高于病毒對(duì)照組（P〈0. 05)，而與病毒唑組差 異不顯著（P>〇. 05)。
[0088] (2)本發(fā)明中藥成分組方制劑對(duì)NDV感染雛雞法氏囊指數(shù)的影響 表6法氏囊指數(shù)（g/kg)
..................?.................. 義...........................又 ...........：：............................i 由表6可知，攻毒后3天和4天，試驗(yàn)組顯著高于病毒對(duì)照組（P〈0. 05)，且試驗(yàn)組脾臟 指數(shù)高于病毒唑組。
[0089] (3)試驗(yàn)動(dòng)物的發(fā)病率 表7雞發(fā)病率(％)
由表7叫知，攻毐后3大，谷試驗(yàn)組雞的友病率M者低t病毐對(duì)照組，與對(duì)比例對(duì)照組 和病毒唑?qū)φ战M也差異顯著。
[0090] (4 )試驗(yàn)動(dòng)物的病死率 表8雞的病死率（％)
由表8可知，攻毒后2天，病毒對(duì)照組有雛雞的死亡。攻毒后，各試驗(yàn)組雞的病死率均 小于病毒對(duì)照組，且各個(gè)試驗(yàn)組之間，試驗(yàn)組1~4的病死率較低。
[0091] (5)本發(fā)明中藥成分組方制劑對(duì)NDV感染雞血清中α -干擾素含量的影響 表9雞血清中α -干擾素含量（pg/mL)
由表9可知，攻毒后3天和4天，試驗(yàn)組1~4顯著高于病毒對(duì)照組（K0. 05)，且顯著 高于對(duì)比例對(duì)照組和病毒唑組（K0. 05)。
[0092] (6)本發(fā)明中藥成分組方制劑對(duì)NDV感染雞血清中γ-干擾素含量的影響 表10雞血清中γ-干擾素含量（pg/mL)
由表10可知，攻毒后3天和4天，試驗(yàn)組1~4均顯著高于病毒對(duì)照組（K0. 05)，且高 于對(duì)比例對(duì)照組和病毒唑組。
[0093] 結(jié)果證明，本發(fā)明中藥成分組方制劑可降低NDV感染雛雞的病死率，通過促進(jìn)免 疫器官發(fā)育及其干擾素的分泌，而增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，提高機(jī)體的抗病毒功能。
[0094] 六、臨床應(yīng)用例： 濟(jì)南某養(yǎng)殖場，飼養(yǎng)的海蘭褐蛋雞，230日時(shí)突發(fā)呼吸道癥狀，3天后出現(xiàn)零星死亡，產(chǎn) 蛋率由91%下降到60%，經(jīng)解剖診斷為非典型新城疫。從中選取蛋雞1400只，隨機(jī)分為7 個(gè)處理組，分別以實(shí)施例1所制藥物、實(shí)施例2所制藥物、實(shí)施例3所制藥物、實(shí)施例4所 制藥物、對(duì)比例1所制藥物、恩諾沙星+利巴韋林、阿莫西林+金剛乙胺進(jìn)行治療，藥物添加 量為15kg/t基礎(chǔ)日糧；連續(xù)給藥7天，觀察各組臨床癥狀，統(tǒng)計(jì)死亡率、治愈率，產(chǎn)蛋率等指 標(biāo)，結(jié)果見表11。
[0095] 表11蛋雞治療結(jié)果
試驗(yàn)結(jié)果見表1，結(jié)果表明本發(fā)明中藥成分組方制劑對(duì)雞非典型性新城疫有良好的治 療效果，一般5~7天后可治愈，治愈率可達(dá)到87%以上，治愈后不復(fù)發(fā)；7天后采食量恢復(fù) 正常，半個(gè)月后產(chǎn)蛋率較發(fā)病時(shí)可提高30%以上。
[0096] 2、濟(jì)南某養(yǎng)殖場，飼養(yǎng)的53日齡狄高紅羽肉雞發(fā)病，部分雞呼吸困難，張口伸頸， 時(shí)有喘鳴音或咯咯聲，雞只精神萎靡，食欲減退或廢絕，離群呆立，羽毛松亂，縮頸閉眼，嗉 囊內(nèi)充滿酸臭、混濁的液體，下痢，糞便呈黃綠色或黃白色，且伴有神經(jīng)癥狀。剖檢可見，病 死雞喉頭和氣管粘膜充血、出血，有粘液；腺胃腫脹、腺胃乳頭出血、潰瘍；腺胃與肌胃交界 處粘膜腫脹、有條狀出血和（或）潰瘍，每天死亡幾十只。通過臨床和實(shí)驗(yàn)室診斷判定為 雞新城疫。選3500只病雞隨機(jī)分為7組，分別以實(shí)施例1所制藥物、實(shí)施例2所制藥物、 實(shí)施例3所制藥物、實(shí)施例4所制藥物、對(duì)比例1所制藥物、恩諾沙星+利巴韋林、阿莫西林 +金剛乙胺進(jìn)行治療，用藥5天后，觀察各組臨床癥狀，統(tǒng)計(jì)死亡率、治愈率，結(jié)果如表12 : 表12肉雞治療的結(jié)果
最后所應(yīng)說明的是，本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，上述實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技 術(shù)方案而非限制，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這 些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種抗新城疫病毒中藥成分組方制劑，其特征在于：所述的中藥成分重量份組成為 板藍(lán)根生物堿6~9份、黃苳苷8~12份、梔子苷1~3份、莪術(shù)醇2~3份和紅花戒2~ 3份。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥成分組方制劑，其特征在于：所述的中藥成分重量份組 成優(yōu)選板藍(lán)根生物堿8份、黃芩苷10份、梔子苷1份、莪術(shù)醇2份和紅花甙2份。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥成分組方制劑，其特征在于：還包括生理鹽水，中藥成分 在生理鹽水中濃度為47. 5g/L。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥成分組方制劑，其特征在于：還包括1~2重量份的卵 磷脂。5. -種權(quán)利要求1抗新城疫病毒中藥成分組方制劑的制備方法，其特征在于，包括以 下步驟： 1) 按配方量分別稱取各固體原料，混合均勻，加入去離子水，使其充分溶解，然后加入 原料質(zhì)量〇. 1%的活性炭，攪拌l〇min，過濾，濾液干燥得固體，超微粉碎，60C〇- y射線福照 殺菌lOmin，即得粉劑； 2) 步驟1)粉劑用生理鹽水溶解，使粉劑中包含的中藥成分在生理鹽水中濃度為 47. 5g/L，即得液體制劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：步驟1)所述的過濾，選用孔徑3~ 5 ym的微孔濾膜。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：步驟1)所述的干燥，為真空冷凍干 燥。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：制劑劑型為粉劑或液體制劑。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種抗新城疫病毒中藥成分組方制劑，所述的中藥成分重量份組成為板藍(lán)根生物堿6～9份、黃芩苷8～12份、梔子苷1～3份、莪術(shù)醇2～3份和紅花甙2～3份，還可包括1～2重量份的卵磷脂及生理鹽水。本發(fā)明中藥成分組方制劑使用提取的純中藥成分組方，較直接使用中藥原料相比，能夠提高療效，減少副作用和毒性，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，不易產(chǎn)生耐藥性；抗菌抗病毒藥物與活血化瘀藥物配合使用，以及添加軟磷脂，可以增強(qiáng)營養(yǎng)物質(zhì)及中藥成分的吸收性，提高生物利用度。
【IPC分類】A61K36/315, A61K31/35, A61K31/7034, A61K31/7048, A61P31/14, A61K36/195
【公開號(hào)】CN105012365
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510454243
【發(fā)明人】蘭鄒然, 黃兵, 李燕榮, 田夫林, 張?jiān)? 黨安坤, 李云崗, 胡莉萍, 王貴升
【申請(qǐng)人】山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心
【公開日】2015年11月4日
【申請(qǐng)日】2015年7月29日