乙酰基澳澤蘭素在制備抗腫瘤藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于化工領域及醫藥領域，涉及乙酰基澳澤蘭素在制備抗腫瘤藥物中的應 用。
【背景技術】
[0002] 腫瘤是機體在各種致癌因素作用下，局部組織的某一個細胞在基因水平上失去對 其生長的正常調控，導致其克隆性異常增生而形成的異常病變。我國的腫瘤病例數相當龐 大，有資料顯示占全世界病例數的55%。
[0003] 良性腫瘤對機體的影響較小，主要表現為局部壓迫和阻塞癥狀。惡性腫瘤由于分 化不成熟、生長較快，浸潤破壞器官的結構和功能，并可發生轉移，因而對機體影響嚴重。惡 性腫瘤除可引起與上述良性腫瘤相似的局部壓迫和阻塞癥狀外，還可有發熱、頑固性疼痛， 晚期可出現嚴重消瘦、乏力、貧血和全身衰竭的狀態。
[0004] 中醫認為，癌癥的起因首先是人體內陰陽平衡，組織細胞在不同的致癌因素長期 作用下，細胞突變而引起的。其實癌組織也是人體的一部分，只有在人本陰陽平衡失調，五 行生克乘侮發生變化的前提下，人體的免疫監控系統才會對其失去監控，任其發展。中草藥 能夠以調理氣血、調整陰陽平衡、維持正常生命體征而保命；以培補正氣、產生抗體，清理〃 毒源〃而治本。因而，中草藥提取物成為治療腫瘤一個重要方向。
[0005] 乙酰基澳澤蘭素是甜葉菊的提取物。甜葉菊，是一種多年生菊科草本植物，葉片中 含有菊糖苷，其甜度為蔗糖的150~300倍，是一種低熱量、高甜度的天然甜味劑，是食品及 藥品工業的原料之一。國外已用來代替糖精做低熱食品，不但無副作用，而且能治療某些疾 病，如治糖尿病，調節血壓、軟化血管、降低血脂、降血糖、抑菌止血、鎮痛、減肥養顏、養陰生 津、幫助消化，促進胰腺、脾胃功能和清熱解毒。對肥胖癥、心臟病、小兒蟲齒等也有療效，并 有促進新陳代謝，強健身體的作用。
[0006] 乙酰基澳澤蘭素屬于天然產物，生物利用度高、性質比較穩定，具有臨床使用價 值。隨著人們對其的化學和生物學研究的深入，其分子作用機制將逐步明確，這將進一步 推動此類化合物的化學結構修飾和構效關系研究，并有助于提高甜葉菊的藥用價值。
【發明內容】
[0007] 本發明的目的是提供乙酰基澳澤蘭素的新的藥物用途。
[0008] -方面，本發明提供了乙酰基澳澤蘭素在制備抗腫瘤藥物中的應用。其中，乙酰基 澳澤蘭的英文全稱為acetyl-austroinulin，其結構如式I所示。
[0009]
[0010] 所述的抗腫瘤藥物可以是抗肝癌藥物，抗前列腺癌藥物、抗宮頸癌藥物，也可以是 抗血癌藥物。
[0011] 實驗結果表明，乙酰基澳澤蘭素能夠抑制多種癌細胞生長。其中部分的IC5tl達到 了微摩〇mol/L或者IiM)級。
[0012] 該抗腫瘤藥物可以為針劑或者片劑。
[0013] 另一方面，本發明提供了一種抑制體外腫瘤細胞增殖的方法，即將乙酰基澳澤蘭 素加入腫瘤細胞的培養液中。
[0014] 所述的腫瘤細胞可以是肝癌細胞、血癌細胞、宮頸癌細胞、乳腺癌細胞或者胰腺癌 細胞。在本發明的優選例中，上述方法中，所述的腫瘤細胞可以是肝癌細胞、胃癌細胞或者 血癌細胞。
[0015] 更好的，所述的腫瘤細胞是口(：-3、？4從：-1、1(562、邪(：或者他1&。
[0016] 加入乙酰基澳澤蘭素的終濃度為I-IOOyM。例如，l-5iiM，I-IOiiM，2-12iiM， 2-20iiM，2-30iiM，2-60iiM，14-28iiM，15-30iiM，10-50iiM，5-60iiM，等等。
[0017] 另一方面，本發明提供了一種抗腫瘤藥物，所述的抗腫瘤藥物的活性成分是乙酰 基澳澤蘭素。
[0018] 在本發明的優選例中，上述抗腫瘤藥針對的腫瘤是肝癌細胞、胃癌細胞、宮頸癌細 胞或者白血病細胞。
[0019] 本發明提供了乙酰基澳澤蘭素在制備抗腫瘤藥物中的應用。乙酰基澳澤蘭素是天 然產物，能夠明顯抑制腫瘤細胞的增殖。本發明的小分子化合物作為新的抗腫瘤藥物或者 其輔助成分進行開發，抑瘤效果明顯，綠色環保，將為治療和治愈腫瘤提供了一種新的途徑 和手段。
【具體實施方式】
[0020] 實驗方法：
[0021] 1??細胞復蘇
[0022] 1)從液氮罐中取出凍存管，直接投入37°C溫水中，并不時搖動令其盡快融化。
[0023] 2)從37°C水浴中取出凍存管，用吸管吸出細胞懸液，注入離心管并加入10倍以上 培養液，混合后低速離心，棄上清，再重復用培養液洗一次。
[0024] 3)用培養液適當稀釋后，接種培養瓶，放在37°C培養箱靜置培養，次日更換培養 液，繼續培養。培養至一定濃度時進行傳代。PANC-I細胞培養在含10%Gibico胎牛血清的 DMEM高糖培養基中，SW620人結腸癌細胞培養在Leibovitz'sL-15培液，添加10%胎牛血 清；1(562、邪(：、06￥、1?^-7、？(：-3等細胞培養在含10%胎牛血清的1640培養基中，51(-11印1、 HeLa、H印G2、等細胞培養在含10%胎牛血清的DMEM高糖培養基中，培養基中含lOOU/ml青 霉素和IOOyg/ml鏈霉素。
[0025] 2??細胞傳代培養
[0026] 每天觀察細胞生長的情況，當細胞在培養瓶中長至約90%匯合時傳代，約每隔 2-4天傳代一次。一瓶傳代成三瓶，或一個25cm2傳代于一個75cm2的培養瓶中。方法：
[0027] 1)用IX磷酸緩沖液洗滌細胞一次。
[0028] 2)加入2_3ml胰酶消化液消化，置于37°C培養箱中數分鐘。用手拍打細胞培養瓶， 使細胞分離。
[0029] 3)用含10-15%的Gibico胎牛血清的合適培養基終止胰酶消化。將細胞分裝于 新的培養瓶中，繼續培養。
[0030] 懸浮細胞傳代時，直接收集于離心管中離心，棄舊培養基。一般一瓶傳代成三瓶的 比例分裝于新的培養瓶中，加入新鮮培養基繼續培養。
[0031] 3??細胞凍存
[0032] 1)取培養至對數生長期的細胞胰蛋白酶消化，收集于離心管中并計數，離心。
[0033] 2)棄除胰蛋白酶及舊的培養液，加入配置好的凍存培養液（含10%DMS0,40% DMEM和50%Gibico胎牛血清），凍存液中細胞的最終濃度為0. 5-1X10Vml。用吸管輕輕 吹打使細胞均勻，然后分裝入無菌凍存管中，每管加1-1. 5ml。
[0034] 3)將凍存管放入凍存盒置_80°C速凍，5小時后移入液氮罐中保存。
[0035] 4??藥物準備：
[0036] 乙酰基澳澤蘭素溶于DMSO(二甲基亞砜），配制成IOOmM或50mM的母液備用。
[0037] 乙酰基澳澤蘭素可從成都瑞