一種脂必妥片中桔霉素的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明提供一種桔霉素的檢測方法，具體的說是一種脂必妥片中桔霉素的檢測方 法;屬于化學檢測技術領域。
【背景技術】
[0002] 桔霉素(citrinin)是1931年首次從青霉菌Penicillium citrinum中分離得到。其 分子式為C13H14O5，分子量為250.25。桔霉素有一定的腎毒性和肝毒性，能致畸、引發腫瘤及 誘發突變。而紅曲是中國傳統藥材，是用特有的紅曲霉菌在大米中培養發酵而成。因某些紅 曲霉菌株能產生具有抑制膽固醇生物合成的他汀類物質，因而中藥紅曲被開發為降血脂的 脂必妥片和保健食品。在1995年法國學者Blanc等首次發現了紅曲產品中含有桔霉素后，國 外已將桔霉素作為食品污染的嚴格控制指標。而在中國，中國藥典尚未將桔霉素作為含紅 曲中成藥的控制指標。
[0003] 對于脂必妥片一一脂必妥片有文獻記載用RP-HPLC法測定其桔霉素含量，而在食 品、保健食品中也有桔霉素的檢測方法:薄層層析法、熒光分光光度法、高效液相色譜法等。
【發明內容】
[0004] 針對上述不足，本發明的目的是提供一種靈敏度高，分析時間短的脂必妥片中桔 霉素的檢測方法桔霉素的方法。
[0005] 為解決上述技術問題，本發明提供的技術方案如下：
[0006] -種脂必妥片中桔霉素的檢測方法，所述的檢測方法包括下述步驟：1)制備標準 溶液；：1)制備標準溶液;2)取脂必妥片0.5g粉碎，置10ml錐形瓶中，加3ml 1%磷酸-甲醇溶 液，60°C加熱回流60min，冷卻，過濾，濾液轉移至25ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻后過 濾，以lml/min流速通過分別以3ml乙醇和3ml水活化的HLB固相萃取柱，用5ml水淋洗，棄去， 再用5ml乙醇洗脫收集洗脫液，洗脫液于40°C下氮吹至近干，精密加入lml乙醇溶解，用0.22 μπι有機濾膜過濾，即得待測樣品，將待測樣品上Agi 1 ent 1295-6550C三重四級桿液相質譜聯 用儀檢測。
[0007] 進一步的，上述的一種脂必妥片中桔霉素的檢測方法，所述的制備標準溶液包括 下述步驟：
[0008] 1)標準溶液的制備
[0009] 標準儲備液:精密稱取標準物質5mg，置5ml容量瓶中，加乙醇溶解并至刻度，使成 濃度為lmg/ml;
[0010] 標準稀釋液:精密吸取標準溶液〇.2ml，置50ml的容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，使 成濃度為2μg/mll;
[0011] 標準工作曲線：取標準稀釋液液適量加乙醇，分別配制成濃度為0.01、2、5、5、 20ng/ml標準工作液。
[0012] 進一步的上述的一種脂必妥片中桔霉素的檢測方法，所述的液相色譜與質譜條件 色譜柱：Agilent poroshell 120EC-C18,3.0X50mm 2.7micron，1.8ym;流動相A為0.2%磷 酸，流動相B為甲醇，采用梯度洗脫程序如下：0_3min，A、75-5%，B、25-95 % ; 3-5.5min，A、 5%，B、95% ;5.5.-5.6min，A、75%，B、25% ;流速0.2ml/min;柱溫40°C;進樣量2μ1;電噴霧 源ESI，正離子方式，選擇多反應監測MRM，載氣溫度：150°C，載氣流量：15L/min，霧化器壓 力40psi，鞘氣溫度300 °C，鞘氣流量：12L/min，毛細管電壓3500V，定性定量離子:母離子m/z =251.2，子離子m/z233.2和m/z 205.2，碰撞能量分別為5V和20V。
[0013]本文建立了含紅曲脂必妥片的桔霉素液相色譜-串聯質譜測定，本方法在6min內 完成了對該物質的分析測定，在保證定性定量準確的情況下，實現了高靈敏的分析，并在提 取過程中減少了甲苯等有毒試劑的使用，具有高效、環保等特點，可為脂必妥片中的桔霉素 監測提供技術支撐。
【附圖說明】
[0014]圖1是2μg/ml桔霉素標準溶液多反應監測圖。
[0015] 圖2是空白樣品的多反應監測圖。
【具體實施方式】
[0016] 下面結合【具體實施方式】，對本發明的權利要求做進一步的詳細說明，但不構成對 本發明的任何限制，任何在本發明權利要求保護范圍所做的有限次的修改，仍在本發明的 權利要求保護范圍之內。
[0017] 實施例！
[0018] 1 材料
[0019] 1.1儀器
[0020] Agi lent 1295-6550C三重四級桿液相質譜聯用儀（美國Agilent )、HLB-SPE柱 (60mg/3ml，上海安譜科學儀器有限公司）、Agilent ZORBAX Eclipse Plus(2.1X50mm，1.8 μπι;美國Agi 1 ent)、XA20OTU電子天平(德國梅特勒托利多公司）、超聲波清洗器。
[0021] 1.2脂必妥片與試劑
[0022] 脂必妥片3批，均來源于市場銷售樣品。
[0023] 桔霉素（批號：518-75-2-150403,標準品購于Pribolab，純度>98%)，乙醇和甲醇 均為色譜純，其它試劑均為分析純，實驗用水為經ELGA PURELAB ClassicUVF凈化系統過濾 的去離子水。
[0024] 本發明所涉及到的百分濃度，沒有特別說明的，液體均為體積濃度，溶質為固體的 指質量濃度。
[0025] 2方法與結果
[0026] 2.1標準溶液的制備
[0027] 2.1.1標準儲備液:精密稱取標準物質5mg，置5ml容量瓶中，加乙醇溶解并至刻度， 使成濃度為lmg/ml。
[0028] 2.1.2標準稀釋液:精密吸取標準溶液0.2ml，置50ml的容量瓶中，加乙醇稀釋至刻 度，使成濃度為2μg/ml，檢測結果見見圖1。
[0029] 2.1.3標準工作曲線：取標準稀釋液液適量加乙醇，分別配制成濃度為0.01、2、5、 5、20ng/ml標準工作液。
[0030] 2.2樣品前處理
[0031] 測方法包括下述步驟：1)制備標準溶液；：1)制備標準溶液;2)取脂必妥片0.5g粉 碎，置10ml錐形瓶中，加3ml 1 %磷酸-甲醇溶液，60°C加熱回流60min，冷卻，過濾，濾液轉移 至25ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻后過濾，待用。
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