一種蘇木素伊紅混合染色液的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種蘇木素伊紅混合后進行一步法染色的樣 本處理類試劑及其制備、染色方法。
【背景技術(shù)】：
[0002] 蘇木素 (Hematoxyl in)和伊紅(Eosin，又稱曙紅)聯(lián)合染色簡稱HE染色，是病理學(xué) 常規(guī)制片中最基本的染色方法，應(yīng)用極其廣泛。在病理診斷、教學(xué)和科研工作中，常用HE染 色對正常組織和病變組織進行形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察。對于確定或鑒別病變組織、細胞中出現(xiàn)的某 些異常物質(zhì)與特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶組織化學(xué)方法、免疫組織化學(xué)方法 等也均是在觀察HE染色組織切片的基礎(chǔ)上進行的。在HE染色的組織切片中，細胞核呈藍色， 細胞漿呈紅色，二者形成鮮明的對比，易于觀察分析。
[0003] 蘇木精是從原產(chǎn)中南美的洋蘇木中提取出來的淺黃褐色的結(jié)晶，是一種堿性染色 劑，它在被氧化后生成蘇木素，同媒染劑(常用的是三價的鋁或鹽鐵)一起使用，能夠使細胞 核染色。蘇木素的分子式為C6Hl4〇6,具體結(jié)構(gòu)式如下：
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[0005] 傳統(tǒng)的經(jīng)典蘇木素伊紅染色液有Harris蘇木素染色液、Mayer蘇木素染色液、Core 蘇木素染色液Carazz i蘇木素染色液、改良Li 11 ie-Mayer蘇木素染色液等，大多需要經(jīng)過蘇 木素染色、鹽酸乙醇分化、返藍、水洗、伊紅染色等系列步驟，其操作復(fù)雜、耗時長，另外存在 染料沉淀和假性藍色染色的問題。
[0006] 伊紅(eosin)又稱曙紅，屬于人工合成的酸性染料，伊紅最適宜與蘇木素配合染色 以顯示正?；虿±斫M織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，分為水溶性伊紅Y和醇溶性伊紅Y以及伊紅B等，主要使 細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。
[0007] 水溶性伊紅的結(jié)構(gòu)式為：
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[0011] 伊紅染色液在水中可解離為帶負電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷結(jié)合，從 而使細胞質(zhì)染成深淺不一的紅色，目前國內(nèi)采用的伊紅染色液主要為水溶性伊紅的水溶液 和醇溶性伊紅的95%乙醇溶液。上述伊紅染色液均加有乙酸作為促染劑以加強染色強度， 而乙酸會弱化染色色彩層次感，同時在后續(xù)的處理過程中需要清洗酸性物質(zhì)，否則易造成 切片易褪色。
[0012] 目前常規(guī)HE染色液，蘇木素染色易產(chǎn)生染料沉淀、假性藍色染色，而伊紅染色易出 現(xiàn)色彩層次不清、需要清洗酸性物質(zhì)。非常重要的是，科研工作者往往要求染色效果好即 可，不太在意操作復(fù)雜和耗時長的問題，但是對于大量染色操作的臨床檢驗人員來說，操作 復(fù)雜和耗時長的問題就急需要解決了。
【發(fā)明內(nèi)容】
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[0013] 為了解決傳統(tǒng)蘇木素伊紅染色操作復(fù)雜、耗時長、假性藍色、層次不清問題，本發(fā) 明"一種蘇木素伊紅混合染色液"旨在提供一種蘇木素和伊紅混合在一起，只需對細胞、組 織等樣本染色一次，既能使蘇木素上色亦可使伊紅上色的新型染色液。本發(fā)明提供了所述 蘇木素伊紅混合染色液的制備方法和染色方法，所述的可用于染色樣本的類型有石蠟切 片、冰凍切片、血液涂片、培養(yǎng)細胞以及體液涂片(如宮頸粘液涂片、腦脊液涂片等)等。
[0014] -種蘇木素伊紅混合染色液，其特征是所述的每1000ml蘇木素伊紅混合染色液中 包括如下組分:蘇木素3-10g;氧化劑0.2-23g;媒染劑5-100g;伊紅l-10g;醇50-500ml;弱酸 3_60g;防腐劑0. l-5g;其余為水。
[0015] 進一步地，所述的蘇木素與所述氧化劑的質(zhì)量比小于2.5。
[0016] 進一步地，所述的醇占所述蘇木素伊紅混合染色液的體積比例小于0.5。
[0017] -種蘇木素伊紅混合染色液，所述的氧化劑為氧化汞、碘酸鈉、碘酸鉀、高碘酸鈉、 高碘酸鉀、高錳酸鉀、過氧化氫、次氯酸鈉、次氯酸鈣的一種或多種的混合物。進一步地，每 1000ml所述蘇木素伊紅復(fù)合染色液中，所述的氧化汞優(yōu)選0.4-4g，最優(yōu)選2.3g;所述的碘酸 鈉優(yōu)選〇. l_2g，最優(yōu)選0.25g;所述的碘酸鈉優(yōu)選0. l-2g，最優(yōu)選0.26g;所述的高碘酸鈉優(yōu) 選0.1-0.5g，最優(yōu)選0.24g;所述的高碘酸鉀優(yōu)選0.1-0.5g，最優(yōu)選0.25g;所述的高錳酸鉀 優(yōu)選0.2-2g，最優(yōu)選0.95g;所述的過氧化氫優(yōu)選4-22g，最優(yōu)選1 lg;所述的次氯酸鈉優(yōu)選3-20g，最優(yōu)選9.5g;所述次氯酸媽優(yōu)選3-20g，最優(yōu)選10g。
[0018] -種蘇木素伊紅混合染色液，所述的氧化汞與所述的蘇木素的質(zhì)量比應(yīng)小于 0.51;所述的碘酸鈉與所述的蘇木素的質(zhì)量比應(yīng)小于0.21;所述的高碘酸鈉與所述的蘇木 素的質(zhì)量比應(yīng)小于0.05;所述的高碘酸鉀應(yīng)與所述的蘇木素的質(zhì)量比應(yīng)小于0.05;所述的 高錳酸鉀與所述的蘇木素的質(zhì)量比應(yīng)小于0.19;所述的過氧化氫與所述的蘇木素的質(zhì)量比 應(yīng)小于2.25;所述的次氯酸鈉與所述的蘇木素的質(zhì)量比應(yīng)小于2;所述的次氯酸鈣與所述的 蘇木素的質(zhì)量比應(yīng)小于2。
[0019] -種蘇木素伊紅混合染色液，所述的媒染劑為硫酸鋁鉀、硫酸鋁銨、硝酸鋁、氯化 鋁、硫酸鋁的一種或多種的混合物。進一步地，每l〇〇〇ml所述的蘇木素伊紅復(fù)合染色液中， 所述的硫酸鋁鉀優(yōu)選26.5g，所述的硫酸鋁銨29.6g，所述的硝酸鋁優(yōu)選24.4g，所述的氯化 鋁優(yōu)選14.9g;所述的硫酸鋁優(yōu)選18.6g。
[0020] -種蘇木素伊紅混合染色液，所述的伊紅為水溶性伊紅Y、醇溶性伊紅Y、焰紅B的 一種或多種的混合物。優(yōu)選水溶性伊紅Yl-10g、醇溶性伊紅Yl-10g、焰紅B0.2_2g三種聯(lián)合 使用。
[0021] 一種蘇木素伊紅混合染色液，所述的醇為乙醇、甲醇、乙二醇、丙三醇、異丙醇中的 一種或多種的混合物。優(yōu)選乙醇、丙三醇兩種聯(lián)合使用。
[0022] 一種蘇木素伊紅混合染色液，所述的弱酸為冰乙酸、檸檬酸、水楊酸的一種或多種 的混合物。進一步地，每1 〇〇〇ml蘇木素伊紅混合染色液中，所述的冰乙酸優(yōu)選5.6-33.3g，最 優(yōu)選10.6g;所述的梓檬酸優(yōu)選0.54-3.2g，最優(yōu)選lg;所述的水楊酸優(yōu)選0.16-lg，最優(yōu)選 0 · 32g〇
[0023] -種蘇木素伊紅混合染色液，所述的防腐劑為疊氮鈉、甲醛、氯仿的的一種或多種 的混合物。進一步地，每l〇〇〇ml蘇木素伊紅混合染色液中，所述的疊氮鈉優(yōu)選0.1-2g，最優(yōu) 選0.2g;所述的甲醛優(yōu)選0.5-5g，最優(yōu)選lg;所述的氯仿優(yōu)選0.5-5g，最優(yōu)選lg。
[0024] -種蘇木素伊紅混合染色液，所述的水為蒸餾水或去離子水中的一種。
[0025]優(yōu)選的用于石蠟切片染色的蘇木素伊紅混合染色液，每1000ml包括如下組分：蘇 木素5g，醇溶性伊紅1.0g，無水乙醇250ml，硫酸鋁鉀50g，丙三醇150ml，碘酸鈉0.4g，水溶性 伊紅5g，焰紅0.5g，冰乙酸18ml，甲醛0. lg，其余為去離子水，共計1000ml。
[0026] 優(yōu)選的用于冰凍切片染色的蘇木素伊紅混合染色液，每1000ml包括如下組分：蘇 木素3.5g，醇溶性伊紅1.0g，無水乙醇250ml，硫酸鋁鉀30g，丙三醇150ml，碘酸鈉0.3g，水溶 性伊紅3g，焰紅0.4g，冰乙酸14ml，甲醛0. lg，其余為去離子水，共計1000ml。
[0027] 優(yōu)選的用于細胞染色的蘇木素伊紅混合染色液，每1000ml包括如下組分:蘇木素 2.6g，醇溶性伊紅1.7g，無水乙醇250ml，硫酸鋁鉀25g，丙三醇150ml，碘酸鈉0.22g，水溶性 伊紅0.5g，焰紅0.2g，冰乙酸10ml，甲醛0. lg，其余為去離子水，共計1000ml。
[0028] 本發(fā)明"一種蘇木素伊紅混合染色液"的制備方法，包括如下步驟：
[0029] 配制醇溶試劑:按選定的體積分數(shù)取醇并按選定的比例加入蘇木素、醇溶伊紅，充 分溶解，即獲得醇溶試劑，備用。
[0030] 配制媒染試劑:按選定的體積分數(shù)取水并按選定的比例加入媒染劑，充分溶解，即 獲得媒染試劑，備用。
[0031] 配制混合染色液:取適量的上述配制好的醇溶試劑和配制媒染試劑，充分混勻后， 按選定的體積分數(shù)取氧化劑加入前述混合液中，取適量的水溶性伊紅、焰紅B、弱酸、防腐劑 加入，補去離子水至1000ml，充分混勻，過濾，即得蘇木素伊紅混合染色液。
[0032] 需要說明的是，在所述的蘇木素伊紅混合染色液的制備過程