裸花紫珠提取物、二萜化合物以及藥物組合物在制備治療神經膠質瘤的藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物技術領域，具體涉及從裸花紫珠的地上部分中分離得到裸花紫珠 提取物、或二萜類化合物，以及由它們制備的藥物組合物在制備治療神經膠質瘤的藥物中 的醫藥用途。
【背景技術】
[0002] 裸花紫珠 Callicarpa nudiflora Hook.et Arn.為馬鞭草科紫珠屬植物，生于平 地至海拔1200m的山坡、路旁、谷地、溪邊或灌木林叢中，在年平均溫度15~25°C、濕度較大 的環境生長良好，國內主要分布于廣東、廣西、海南等地，在海南產于定安、儋州、澄邁、白 沙、昌江、東方、三亞、陵水、保亭、瓊中等地，其中以海南五指山的為上品；國外主要分布于 印度、中南半島、馬來半島及新加坡等。
[0003] 裸花紫珠藥用部位為地上干燥部分，是一種海南大宗性地道藥材，同時也是海南 黎族醫生常用藥材之一。裸花紫珠全年均可采收，除去雜質，曬干，枝葉有抗菌止血、消炎解 毒、散瘀消腫、驅風祛濕之功效，主治化膿性炎癥、急性傳染性肝炎、呼吸道及消化道出血、 創傷出血等癥，外用治燒、燙傷及外傷出血等。
[0004] 近年來，國內外對裸花紫珠化學成分的研究報道較少，從中分離的成分主要有黃 酮類、萜類、揮發油和酚類等。裸花紫珠中黃酮類化合物主要有木犀草素及其配糖體。裸花 紫珠所含萜類化合物主要有:環烯醚萜類化合物，二萜類化合物和三萜類化合物等。
[0005] 裸花紫珠的藥理活性有止血、抗炎、抑菌、細胞毒活性、增強免疫等。我國醫藥市場 上有裸花紫珠片、裸花紫珠栓劑等制劑，在皮膚科、婦科炎癥的治療和術后止血等方面具有 較好的治療效果。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種從裸花紫珠的干燥地上部分中分離得到的一種二萜類 化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
[0007] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0008] -種裸花紫珠提取物在制備治療神經膠質瘤的藥物中的應用，裸花紫珠提取物是 裸花紫珠的地上部分分離提取獲得，提取步驟包括：
[0009] (a)將裸花紫珠的地上部分干燥、粉碎，用乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無 醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯 萃取物和正丁醇萃取物；
[0010] (b)取正丁醇取物除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙醇洗脫8個柱體 積，收集70 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；
[0011] (c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脫， 收集洗脫液;再用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶 液等度洗脫，收集洗脫液，洗脫液減壓濃縮裸花紫珠提取物。
[0012] -種二萜化合物（I)在制備治療神經膠質瘤的藥物中的應用，二萜化合物（I)屬于 裸花紫珠提取物中的一種純物質，由裸花紫珠的地上部分分離提取獲得，它具有下述結構 式：
[0013]
[0014] 作為優選，二萜化合物(I)經過以下操作步驟獲得：
[0015] (a)將裸花紫珠的干燥地上部分粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液， 濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；
[0016] (b)步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用 70 %乙醇洗脫8個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；
[0017] (c)步驟(b)中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、 10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得至1」4個組分；
[0018] (d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；
[0019] (e)步驟（d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為 70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物 (1)〇
[0020] 作為優選，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為75%。
[0021 ]作為優選，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0022] -種藥物組合物在制備治療神經膠質瘤的藥物中的應用，其中含有治療有效量的 上述的化合物（I)和藥學上可接受的載體。
[0023] 作為優選，藥學上可接受的載體是淀粉。
[0024] 本發明在應用時，它的裸花紫珠提取物可以直接使用，或者以藥物組合物的形式 使用。二萜化合物（I)化合物用作藥物時也同理，實驗證明，二萜化合物（I)通過抑制細胞增 殖及誘導細胞凋亡發揮對人腦惡性膠質母細胞瘤U251細胞的抑制作用。因此，具有二萜化 合物（I)成分的裸花紫珠提取物以及藥物組合物也具有同樣的抑制作用。裸花紫珠提取物 相比純物質二萜化合物(I)，其對人體的副作用要相對減少，因此更加有利于與載體制備成 治療神經膠質瘤的藥物，在治療膠質瘤的臨床藥物提供一種新的選擇。
【附圖說明】
[0025] 圖1為化合物(I)結構式；
[0026] 圖2為化合物(I)計算E⑶和實驗E⑶圖；
[0027]圖3為化合物（I)處理后U251細胞洞凋亡率的變化。
【具體實施方式】
[0028]下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0029] 主要材料、試劑來源及儀器類型：
[0030]乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學試劑有限 公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0031 ]實施例1: 一種裸花紫珠提取物在制備治療神經膠質瘤的藥物中的應用，
[0032]裸花紫珠提取物是裸花紫珠的地上部分分離提取獲得，提取步驟包括：
[0033] (a)將裸花紫珠的地上部分干燥、粉碎，用乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無 醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯 萃取物和正丁醇萃取物；
[0034] (b)取正丁醇取物除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙醇洗脫8個柱體 積，收集70 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；
[0035] (c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脫， 收集洗脫液;再用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶 液等度洗脫，收集洗脫液，洗脫液減壓濃縮裸花紫珠提取物。
[0036]其中，用二氯甲烷-甲醇體積比為40:1以下的梯度，多次依次洗脫。如依次采用40: 1、30:1、20:1、10:1的梯度進行四次洗脫。
[0037]實施例2:二萜化合物（I)在制備治療神經膠質瘤的藥物中的應用，二萜化合物（I) 的分離制備及結構確證如下：
[0038] (a)裸花紫珠的干燥地上部分（10kg)粉碎，用75 %乙醇熱回流提取(25L X 3次），合 并提取液，濃縮至無醇味(6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯(6L X 3次)和水飽和的正 丁醇(6LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(377g)和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用70% 乙醇洗脫8個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物（129g);(c)步驟 (b)中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個柱體積）、20:1 (8個 柱體積）、10:1(8個柱體積)和5:1(10個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分； (d)步驟（c)中組分4(24g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1(8個柱體積）、5:1 (10個柱體積)和2:1(8個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得至1」3個組分；（e)步驟(d)中組 分2 (15g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度 洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I) (42mg)。
[0039] 結構確證:冊431]\^顯示[]\1+他]+為111/2 449.1608，結合核磁特征可得分子式為 C24H26〇7，不