一種法匹拉韋中有關物質的hplc測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種法匹拉韋及含法匹拉韋的相關制劑的有關物質檢測方法，屬于藥 物分析檢測領域。
【背景技術】
[0002] 法匹拉韋是一種流感治療藥物，與很多抗流感藥物具有不同的作用機制。達菲等 藥物是通過阻止增殖的病毒鉆到細胞外，以防止感染加重；而法匹拉韋是通過阻礙細胞內 的基因復制，從而遏制病毒本身增殖。由于流感病毒和埃博拉病毒類似，都是RNA病毒，所 以法匹拉韋有可能阻礙埃博拉病毒在細胞內增殖，從而遏制感染。由于法匹拉韋在合成過 程中有可能引入殘留原料及其它有關物質，在儲藏過程中還有可能產生降解產物，本發明 對法匹拉韋進行純度分析，采用普通的色譜柱（C18色譜柱）快速準確地測定法匹拉韋有關 物質，保證了法匹拉韋的質量可控，在合成和制劑過程的質量控制方面具有重要的現實意 義。目前尚未檢索到法匹拉韋有關物質的HPLC測定方法。本發明法匹拉韋及含法匹拉韋 的相關制劑的有關物質檢測方法，可快速準確的檢測出法匹拉韋的雜質及降解產物情況， 操作簡捷，靈敏度高，可較好地控制產品質量。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的在于提供一種采用二極管陣列檢測器對法匹拉韋及含法匹拉韋的 相關制劑進行有關物質檢查的測定方法。
[0004] 本發明法匹拉韋中有關物質檢查方法的實現包括以下步驟：
[0005] (1)色譜條件：檢測器采用二極管陣列檢測器，柱溫30°C，流速1.0 ml/min ;色譜條 件的流動相由乙腈（流動相A)-磷酸鹽溶液（流動相B)組成；其中磷酸鹽溶液（流動相 B)，濃度范圍0· 005~0· 015mol/L，調整pH范圍6. 0~8. 0,其最佳濃度為0· 01mol/L，最佳 PH值約為7. 0 ;理論塔板數按法匹拉韋峰計算不低于3000。
[0006] (2)供試品溶液的制備：取法匹拉韋或含法匹拉韋的相關制劑適量，加流動相配 制成0. 2mg/ml溶液，作為供試品溶液。
[0007] (3)對照溶液的制備：量取上述（2)供試品溶液適量，加流動相稀釋成每1ml中約 含2 μ g溶液，作為對照溶液。
[0008] (4)測定方法：取對照溶液10 μ 1注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色 譜峰高約為滿量程的20%，再取供試品溶液10 μ 1注入液相色譜儀，記錄色譜圖至法匹拉 韋主峰保留時間的5倍，供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，量取各雜質峰面積的和，不得大 于對照溶液中主峰的峰面積（見圖1、圖2)。
[0009] 本發明一種法匹拉韋中有關物質的HPLC測定方法，上述（2)中供試品溶液的制 備：為滿足供試品溶液檢測濃度的需要，取法匹拉韋適量，用流動相配制成濃度為每1ml含 0. 2mg溶液，作為供試品溶液。再分別用流動相稀釋成一系列不同濃度的溶液，分別進樣 10 μ 1，使之產生主峰為基線噪音3倍的信號。經試驗，最小檢知量為0. 2ng(S/N彡3)，若以 有關物質檢查時的濃度0. 2mg/ml計算，其檢出限度為0. 1%。
[0010] 本發明一種法匹拉韋中有關物質的HPLC測定方法，上述（3)中對照溶液的制備： 精密量取上述供試品溶液lml，置入100mL量瓶，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照溶 液。當該對照溶液濃度范圍在1~10 μ g/ml內時，峰面積與濃度呈良好的線性關系，其線 性相關系數為0. 9996 (見圖3)。
[0011] 本發明一種法匹拉韋中有關物質的HPLC測定方法，其有關物質檢測HPLC色譜圖 中，如有雜質峰出現，量取各雜質峰面積的和，應不得大于對照溶液的主峰面積（1% )。
[0012] 本發明一種法匹拉韋中有關物質的HPLC測定方法，適用于各種需要進行有關物 質檢測的法匹拉韋及含法匹拉韋的相關制劑，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、注射液、控釋和緩控 釋以及各種法匹拉韋的復方制劑。
[0013] 本發明與已有技術相比的積極效果在于：
[0014] 1.本發明使用二極管陣列檢測器對本品進行有關物質檢測，建立了一種快速直觀 的評價色譜峰純度的有效方法：可直觀地判斷色譜峰的純度，并判斷存在干擾峰的位置，能 夠獲得"在流"的全部光譜信息，快速得到色譜組分的吸收光譜，二極管陣列檢測器較一般 的紫外-可見檢測器，優點在于不僅能依靠色譜的保留時間進行定性，而且能根據其提供 的光譜信息進行定性，大大提高了定性的可信度，并有效提高了其檢測靈敏度。
[0015] 2.本發明一種法匹拉韋中有關物質的HPLC測定方法，可快速準確地檢測出法匹 拉韋的雜質及降解產物情況，可較好地控制產品質量。
[0016] 3.本發明適用于各種劑型的法匹拉韋及含法匹拉韋的相關制劑，如片劑、膠囊劑、 顆粒劑、注射液、控釋和緩控釋以及各種法匹拉韋的復方制劑。。
[0017] 4.本發明檢測方法準確，操作簡捷，重現性好，靈敏度高，可以充分滿足有關物質 檢查與分解產物測定的要求，較好地控制樣品中的特殊雜質，保證產品質量，在工作中實用 性強。
【附圖說明】
[0018] 圖1對照溶液的HPLC圖譜
[0019] 圖2供試品溶液的HPLC圖譜
[0020] 圖3法匹拉韋雜質限度線性關系圖
【具體實施方式】
[0021] 實施例1
[0022] 1色譜條件與系統適用性試驗
[0023] I. 1色譜條件的選擇
[0024] 儀器：島津：LC-20AT，SPD-M20A，SIL-20A，D⑶-20A5,其最佳柱溫 30 °C，流速 1.0 ml/min。液相色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（250mmX 4. 6mm，5 μ m)，參照相 關文獻并結合試驗具體情況，先后選用甲醇-水、乙腈_水、甲醇_乙腈 -水、甲醇_乙腈-磷 酸鹽溶液等多種條件，最終確定流動相由乙腈（流動相A)-磷酸鹽溶液（流動相B)組成， 其中磷酸鹽溶液（流動相B)，濃度范圍0· 005~0· 015mmol/L，調整pH范圍6. O~8. 0,其 最佳濃度為〇. Olmol/L，最佳pH值約為7. 0,按表1進行梯度洗脫。進樣量10 μ 1。
[0025] 表1梯度洗脫程序
[0026]
[0027] 在該色譜條件下，法匹拉韋主峰保留時間適中，峰形較好。
[0028] 1. 2靈敏度測定
[0029] 取法匹拉韋對照品適量，用流動相配制成濃度為每1ml含0. 2mg溶液，再分別用 流動相稀釋成一系列不同濃度的溶液，分別進樣10 μ 1，使之產生主峰為基線噪音三倍的信 號。經試驗，最小檢知量為0. 2ng(S/N多3)，若以有關物質檢查時的濃度0. 2mg/ml計算，其 檢出限度為〇. 1%。結果表明，該法靈敏度高，可充分滿足有關物質檢查測定的要求。
[0030] 1. 3溶液穩定性
[0031] 取同一份供試品溶液，分別于0,2,6，10,24h分別進樣測定，其主峰峰面積及有關 物質測定結果在24h內基本穩定。
[0032] 以上試驗結果表明，此方法簡便靈敏，重現性好，可較好地對樣品中法匹拉韋的質 量進行較好地檢測。
[0033] 2供試品溶液的制備：
[0034] 取法匹拉韋或含法匹拉韋的相關制劑適量，加流動相配制成0. 2mg/ml溶液，作為 供試品溶液。
[0035] 3對照溶液的制備：
[0036] 量取上述（2)供試品溶液適量，加流動相稀釋成每1ml中約含2 μ g溶液，作為對 照溶液。
[0037] 4法匹拉韋及含法匹拉韋的相關制劑有關物質的檢測：
[0038] 取對照溶液10 μ 1注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰高約為滿 量程的20%，再取供試品溶液10 μ 1注入液相色譜儀，記錄色譜圖至法匹拉韋