快速檢測番鴨細小病毒的試紙條的制作方法
【技術領域】
[0001] 本實用新型涉及免疫化學檢測技術領域。更具體地說，本實用新型涉及一種快速 檢測番鴨細小病毒的試紙條。
【背景技術】
[0002] 番鴨細小病毒病（MuscovyduckparvovirusDiseaseJDH))，是由番鴨細小病毒 (Muscovyduckparvovirus，MDPV)引起的，以腹瀉、喘氣和軟腳為主要臨診癥狀的一種急 性、敗血性傳染病，該病主要發生于3周齡以內的番鴨，故又稱三周病，其主要臨床癥狀是 呼吸困難、厭食、腹瀉、脫水及迅速消瘦。由于該病傳播快，發病率、死亡率都很高，給番鴨養 殖造成重要經濟損失。
[0003] 番鴨細小病毒病最早于20世紀80年代中后期出現于我國福建和法國西部 Brittany地區，現已廣泛分布。由于MDPV屬細小病毒，對環境抵抗力強，65°C加熱30min對 其滴度無影響，對乙醚等有機溶劑不敏感，對胰酶和PH3穩定，難于從環境中消除，極大影 響了我國養鴨業的健康發展。
[0004] 及時、快速診斷MDro，是有效控制MDro的前提。目前MDro的診斷主要有常規實 驗室檢測和分子生物學兩大類方法。常規方法主要有病毒分離鑒定和MDPV抗體的血清學 檢測，包括瓊脂免疫擴散試驗（AGP)、血清中和實驗、ELISA等方法。分子生物學方法主要有 PCR和核酸探針技術等。MDPV的病毒分離培養、AGP、IFA、ELISA、PCR和核酸探針等檢測技 術操作復雜，需要昂貴的儀器設備、過程較長、耗時費力，需要特定儀器設備和專業技術人 員操作，很難在基層普及，不能滿足生產一線或疫病現場的快速診斷需要。技術非常重要而 迫切。
[0005]鑒于以上描述，亟待有一種快速檢測禽番鴨細小病毒感染設備及技術的產生。 【實用新型內容】
[0006] 本實用新型的一個目的是提供一種快速檢測番鴨細小病毒的試紙條，并提供至少 后面將說明的優點。
[0007] 本實用新型還有一個目的是提供一種結果顯示直觀、準確、快速檢測MDPV的試紙 條，與其他檢測方法相比，該試紙條特異性強、靈敏度高、操作簡便、結果顯示快速，檢測成 本低廉。
[0008] 為了實現根據本實用新型的這些目的和其它優點，本實用新型提供了一種快速檢 測番鴨細小病毒的試紙條，包括：
[0009] 支撐層、吸附纖維層、金標抗體纖維層、纖維素膜層及吸水層，其中吸附纖維層、金 標抗體纖維層、纖維素膜層及吸水層順次搭接粘貼在支撐層上；
[0010] 番鴨細小病毒試紙的檢測印跡線，其為包被的抗番鴨細小病毒的單克隆抗體或多 克隆抗體的檢測印跡線且設置在所述纖維素膜層上；
[0011] 番鴨細小病毒試紙的對照印跡線，其為包被的羊抗鼠免疫球蛋白G或兔抗鼠免疫 球蛋白G的對照印跡線且設置在所述纖維素膜層上，且與所述番鴨細小病毒試紙的檢測印 跡線定距間隔排列；
[0012] 其中，所述金標抗體纖維層上附著有與所述檢測印跡線對應的以膠體金標記的抗 番鴨細小病毒單克隆抗體或多克隆抗體。
[0013] 優選的是，其中，在所述吸附纖維層、金標抗體纖維層及吸水層上端面分別敷設保 護膜，且在所述吸附纖維層上端面保護膜上設置樣品標記線，所述樣品標記線與所述吸附 纖維層和所述金標抗體纖維層交界處的水平距離為0. 3~0. 7cm。
[0014] 優選的是，其中，所述番鴨細小病毒試紙的檢測印跡線設置在所述纖維素膜層且 靠近所述金標抗體纖維層的一端。
[0015] 優選的是，其中，所述番鴨細小病毒試紙的檢測印跡線與所述羊抗鼠免疫 球蛋白G或兔抗鼠免疫球蛋白G的對照印跡線的排列組合為"II"、"http://"、"++"、
'I中任一種。
[0016] 優選的是，其中，所述纖維素膜層由硝酸纖維素、纖維素、羧化纖維素或聚偏二氟 乙稀制成。
[0017] 優選的是，其中，所述吸附纖維層由玻璃棉、尼龍纖維或聚酯纖維制成。
[0018] 優選的是，其中，所述支撐層由不吸水的硬質塑膠片或硬紙條制成。
[0019] 優選的是，其中，所述吸水層由吸水紙制成。
[0020] 優選的是，其中，所述金標抗體纖維層由玻璃棉、尼龍纖維或聚酯纖維制成。
[0021] 本實用新型至少包括以下有益效果：
[0022] (1)檢測特異性強，敏感性高。本實用新型提供的試紙條以膠體金印跡線高親和力 的特異性單抗/多抗為基礎制備而成，金標抗體中金顆粒與抗體分子之間無共價鍵形成， 二者通過異性電荷間的范德華力相結合，膠體金標對單抗/多抗的特異性和親和力影響很 小，且具有較高的印跡線率。本實用新型的試紙條具有較高的特異性和敏感性，可檢測到 2ng的相應病毒的蛋白。
[0023] (2)操作簡便，快速。本實用新型的試紙條在使用時無需附加任何其它儀器和試 劑，只要將其測試端插入待檢樣品液中30秒左右，5分鐘左右即可判定檢測結果。
[0024] (3)結果顯示直觀、準確。本實用新型的試紙條以顯示棕紅色的檢測印跡線和對照 印跡線作為檢測的陽性和陰性印跡線，即在纖維素膜上顯示兩條棕紅色印跡線，表示在被 檢測樣品中有病毒檢出，結果為陽性；在纖維素膜上只顯示一條棕紅色對照印跡線C，表示 在被檢測樣品液中未檢出病毒，結果為陰性。結果判定直觀、準確，簡單明了，不易出現假陰 性和假陽性誤判。
[0025] (4)減少投資和檢測成本。本實用新型的試紙條在使用時，不需另配其它儀器、設 備和試劑，節省大量儀器、設備和附加試劑費用；專業和非專業人士均可隨時隨地進行現場 檢測，無需支付專家診斷檢查費或送樣品去診斷室的路費，節省檢測成本，檢測費用低。
[0026] (5)應用范圍廣，便于普遍推廣應用。本實用新型提供的試紙條操作簡單，成"一 步式"或"傻瓜式"，而且方便攜帶和保存，能滿足不同層次人員的需要，包括專業化驗、海關 檢疫、衛生防疫、質量監測、畜產品加工、集約化養殖到個體養殖等，具有廣闊的市場前景和 較好的經濟、社會效益。
[0027] (6)本實用新型根據ELISA的基本原理，用免疫層析試紙檢測病毒，利用微孔濾膜 的滲濾濃縮和毛細管作用，將抗原-抗體反應由ELISA的傳統液相環境轉到固相濾膜上快 速進行，并采用膠體金印跡線代替酶印跡線，憑肉眼直接觀察膠體金的顯色狀況，即時獲得 檢測結果，因此該方法比ELISA等血清學方法更為簡便、快速。
【附圖說明】
[0028] 圖1為本實用新型的剖面示意圖；
[0029] 圖2為本實用新型的俯視示意圖。
【具體實施方式】
[0030] 下面結合附圖對本實用新型做進一步的詳細說明，以令本領域技術人員參照說明 書文字能夠據以實施。
[0031]〈實施例1>
[0032] 圖中1為以塑膠薄片條制成的支撐層，2為以玻璃棉制成的吸附纖維層，3為附著 有膠體金標記的抗番鴨細小病毒單克隆抗體的玻璃棉制成的金標抗體纖維層，4為硝酸纖 維素膜制成的纖維素膜層，5為由吸水紙制成的吸水層，將編號2、3、4、5各層依次粘貼在支 撐層1上，彼此拼接的交界處纖維互相交叉滲透。在纖維素膜層4上，以抗番鴨細小病毒多 克隆抗體免疫球蛋白G溶液標記檢測印跡線6,代號T，以羊抗鼠免疫球蛋白G或兔抗鼠免 疫球蛋白G溶液標記對照印跡線7,代號C;檢測印跡線與對照印跡線的排列形式為" | | "。 如圖2所示，8-1為覆蓋在吸附纖維層2和金標抗體纖維層3上面的測試端的白色保護膜， 在吸附纖維層2和金標抗體纖維層3交界處對應的白色保護膜上偏向于吸附纖維層2 -側 0. 5cm處印有樣品標記線9,樣品標記線的右端印有箭頭及MAX字樣，位于手柄端的