能夠測定廣泛濃度范圍的生物物質濃度的免疫層析條狀傳感器的制造方法
【技術領域】
[0001 ]本專利申請針對2013年11月12日向韓國專利廳提出的韓國特許申請第KRl0-2013-0136906號主張優先權，上述專利申請的公開事項插入于本說明書中作為參考。
[0002]本發明涉及能夠測定廣泛濃度范圍的生物物質濃度的免疫層析條狀傳感器(Lateral Flow Assay Strip Sensor)及使用該免疫層析條狀傳感器測定廣泛濃度范圍的生物物質的濃度的方法。
【背景技術】
[0003]C反應蛋白(C-reactive protein，CRP)作為眾所周知的急性炎癥的生物標記，以正五聚蛋白(pentraxin)的形態由5個反復結構形成，若受到白細胞介素-1及白細胞介素-6的刺激，則在肝臟中進行合成。過去數十年間，進行了如下研究(I?9):通過測定在血漿中的C反應蛋白的水平，來將其利用于預測心肌梗塞、癌癥、心血管疾病、糖尿病的危險程度，或用于抗生素治療指南。在健康的正常成人中，C反應蛋白的數值為平均0.8yg/mL，但若發生炎癥反應，則其數值增加到100mg/L以上。通常，在輕度炎癥或病毒感染的情況下，C反應蛋白的數值為10?50yg/mL，在活動性炎癥或細菌感染的情況下，C反應蛋白的數值為50?200yg/mL，在重度炎癥或損傷的情況下，C反應蛋白的濃度大于200yg/mL。食品藥品監督管理局(FDA)勸告如下:在20?500yg/mL的濃度范圍的情況下，對炎癥中的C反應蛋白進行測定，并且，對作為心血管疾病的具有可靠性的生物標記且潛在性危險預測子的高靈敏度C反應蛋白(high sensitivity CRP，hs_CRP)進行測定。在這種測定中所需的濃度范圍為I?10yg/mLo
[0004]在急性炎癥或第一次診療的情況下，為了迅速的診斷或人體體液內C反應蛋白水平的連續的監控，需要測定范圍的充足性、迅速性、準確性、簡便性及低費用定量測定等(10?11)。通常，作為迅速的定量性C反應蛋白分析，普遍利用具有聚苯乙烯珠的免疫比濁(Immunoturbidimetrie)法或免疫散射比池(Imunonephelometry)法、金納米粒子凝聚(agglomerat1n)分析法等。并且，最近，導入廣泛濃度范圍的C反應蛋白測試，從而擴張到能夠測定廣泛的濃度。例如，DIAgam XS Card1 NanoGold C反應蛋白法的情況下，使用由DIAgam laboratory(法國里爾(LiIIe,France))提供的試劑來可實現0.42?265yg/mL的范圍為止的測定。就DIAgam試劑而言，經過稀釋試樣的步驟，并使用奧林巴斯(Olympus )AU640生化分析儀，來測定0.1?160yg/mL的濃度范圍的全濃度范圍。這些方法使用自動化的分析儀來提供準確的測定值，但為了進行分析工序，需要昂貴的設備和熟練的人力。作為用于克服這種局限點的方案，提出利用適合現場顯示系統的低費用、短的分析時間及簡單的操作技術檢測C反應蛋白的方法。作為迅速且高靈敏度的即時檢驗(point of care test，P0CT)技術中之一，微流控芯片(microfluidic chip)作為用于測定C反應蛋白的工具廣泛地得到研究。在由格威斯(Gervais)等進行的研究中(12)，微流控芯片對濃度為1ng/mL的C反應蛋白可檢測3分鐘，在14分鐘內，可檢測濃度為Ing/mL以下的C反應蛋白。在由喬斯森(Jonsson)等進行的研究中(13)，側方流動聚合物芯片具有102的動態范圍，并擁有2.6ng/mL的檢測局限。并且，根據由格威斯等進行的報告(12)，在0.01?1.0yg/mL范圍下，若C反應蛋白濃度增加，則在C反應蛋白濃度中，熒光信號強度減少。如在上述研究結果中所示，微流控芯片非常迅速且在低濃度下可實現測定，但在高濃度的C反應蛋白測定、批量生產及相對費用方面具有局限性(14-15)。為了克服這種局限性，開發了用于C反應蛋白分析的垂直流動分析法(vertical flow assay,VFA)(16)。在這種研究中，在I分鐘內，使用了比側方流動分析法(lateral flow assay，LFA)條狀生物傳感器更寬的動態范圍，但未覆蓋更寬的范圍的C反應蛋白。
[0005]側方流動分析法條狀生物傳感器用于迅速、低費用且一步免疫分析法中之一(17)。基于C反應蛋白測試條的幾種類型的側方流動分析儀在商業上可購買，但在夾心免疫分析法中，由于呈現基于分析物的非常高的濃度的假陰性結果的鉤狀效應(hook effect)，存在無法在人血清內覆蓋C反應蛋白濃度范圍的缺點(18?19)。因這種理由，大部分的商業用側方流動分析法條狀傳感器使用于高靈敏度C反應蛋白(hsCRP)或心臟C反應蛋白(cCRP)的診斷。但是，在由萊昂(Leung)等進行的研究中(20)，在作為指示器使用金納米粒子(AuNPs)的“數字式”分析法或“條碼式”分析法中提供，在15分鐘內，在測試中對紅色線的數量進行計數，從而檢測低濃度的C反應蛋白，來預測初期心血管疾病(CVD)危險度或細菌及病毒感染的半定量(sem1-quant i tat i ve)側方流動分析法。這種側方流動分析法傳感器的測定目的根據各個疾病而不同，但使用多線測定法來檢測了相同的C反應蛋白。需要開發用于可覆蓋廣泛濃度范圍O?500mg/L的C反應蛋白分析的一步免疫傳感器。并且，側方流動分析法生物傳感器具有用于評價使用便利性、商業接近簡易性及制造費用等迅速的診斷傳感器或即時檢驗的質量的重要的因素(21)。
[0006]本說明書全文中，參照了多篇論文及專利文獻，并表示了其引用。所引用的論文及專利文獻的公開內容全部插入于本說明書作為參照，從而更加明確說明本發明所屬技術領域的水平及本發明的內容。
[0007]現有技術文獻
[0008]非專利文獻
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