一種蘋果中甲基硫菌靈殘留量的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及食品安全檢測領域，具體是一種蘋果中甲基硫菌靈殘留量的檢測方 法。
【背景技術】
[0002] 蘋果是最常見的水果之一。蘋果味甜，口感爽脆，且富含豐富的營養，是世界四大 水果之冠。蘋果的性味溫和，含有豐富的碳水化合物、維生素和微量元素，有糖類、有機酸、 果膠、蛋白質、鈣、磷、鉀、鐵、維生素 A、維生素 B、維生素 C和膳食纖維，另含有蘋果酸，酒石 酸，胡蘿卜素，是所有蔬果中營養價值最接近完美的一個。
[0003] 為了使蘋果在儲存期預防真菌類病害，需要對蘋果進行保鮮處理。目前雖然已有 涂膜、減壓處理、高壓處理、天然保鮮劑、生物保鮮劑等蘋果保鮮新技術的研究與報道，但受 到技術、成本等因素影響，我國對于蘋果防腐保鮮處理普遍使用的仍是化學防腐保鮮劑。蘋 果在進行保鮮時，最常用的化學防腐保鮮劑為甲基硫菌靈，又名甲基托布津，是一種廣譜性 內吸低毒殺菌劑，具有內吸、預防和治療作用。目前，針對甲基硫菌靈的檢測分析方法，已報 道的主要有高效液相色譜、氣相色譜及酶聯免疫法等。氣相色譜法或液相色譜法易受雜質 干擾，且靈敏度低;酶聯免疫方法操作過程繁瑣，且條件要求苛刻。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種蘋果中甲基硫菌靈殘留量的檢測方法，以解決上述背 景技術中提出的問題。
[0005] 為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：
[0006] 一種平果中甲基硫囷靈殘留量的檢測方法，步驟如下：
[0007] 1)標準儲備液的配制，用十萬分之一天平準確稱取甲基硫菌靈標準品10mg于燒杯 中，精確至0. lmg，加乙腈溶解并定容至10mL容量瓶中，配制成濃度為1000yg/mL的單標儲備 液，在冰箱中1°C~4°C保存；
[0008] 2)標準工作溶液的配制，準確移取lmL單標儲備液置于100mL棕色容量瓶中，用乙 腈定容至刻度，配成l〇yg/mL的標準中間液，根據需要移取適量標準中間液，用乙腈-水溶液 稀釋成2即/111]^、511〖/1111^、1〇11〖/1]1]^、2〇11〖/1111^、5〇11〖/1]1]^、10〇11〖/1]11^的標準工作溶液，各種標準溶 液密封保存于1°C~4°C冰箱中；
[0009] 3)試樣制備，取1000g帶皮蘋果樣品經四分法選取一定量的樣本，經粉碎或組織搗 碎機勻漿，獲得待測樣品，裝入樣品袋中，密封、標記、1°C~4°C冰箱中冷藏待用；
[0010] 4)樣品提取，取待測樣品，加入5~8倍量的乙醚，渦旋振蕩2~3min后再超聲提取8 ~10min，加入2~4g氯化鈉，再次禍旋4~5min，5500~6000r/min離心10~12min;再分2次 加入8~10倍量乙醚，渦旋振蕩6~7min后5500~6000r/min離心12~15min，合并有機相，并 采用平行蒸發儀進行第一次濃縮，獲得一次濃縮液；
[0011] 5)樣品洗脫，將活性炭小柱先用洗脫液進行活化，然后將一次濃縮液倒入活性炭 小柱后用洗脫液洗脫，獲得洗脫收集液，所述洗脫液為乙酸乙酯和丙酮的等體積混合液，用 量為一次濃縮液體積的10~12倍；
[0012] 6)二次濃縮及過濾，將洗脫收集液采用氮氣吹促進洗脫液揮發的方式進行第二次 濃縮，獲得二次濃縮液，二次濃縮液采用甲醇定容至2ml后，采用0.30μπι濾膜過濾，獲得濾 液，濾液供液質聯用儀測定；
[0013] 7)色譜測定；
[0014] 8)質譜測定；
[0015] 9)儀器測定，樣品進樣的程序為:試劑空白、標準工作曲線、樣品空白、樣品添加與 實際樣品，重復以上步驟；
[0016] 10)定量方法，按步驟9)進樣，用色譜工作站建立標準工作曲線，樣品采用工作曲 線定量。
[0017] 作為本發明再進一步的方案:步驟2)中，乙腈-水溶液含0.15%甲酸，乙腈-水溶液 中乙腈與水的體積比為1:1。
[0018] 作為本發明再進一步的方案：步驟8)中，甲基硫菌靈的定量離子對為343、113/ 151、074，定性離子對為343、131/118、123,3-161^電壓為76￥，碰撞電壓為18;51，掃描模式 為positive，保留時間為7.6min，離子源為電噴霧離子源，掃描方式為正負切換掃描，檢測 方式為多反應監測，毛細管溫度為350°C，蒸發溫度為300°C，電噴霧電壓為+3500(-3000)V， 鞘氣為30arb，輔助氣為lOarb，碰撞氣為氬氣。
[0019]作為本發明再進一步的方案：步驟7)中，色譜柱為HypersilG0LDC18,膜厚為1.9μ m，內徑為2.1mm X 50mm，柱溫為35 °C，進樣量為2yL，采用梯度洗脫。
[0020]作為本發明再進一步的方案:步驟7)中梯度洗脫條件如下
[0022] 。
[0023] 與現有技術相比，本發明的有益效果是:本發明通過液質聯用儀進行蘋果中甲基 硫菌靈殘留量的檢測，檢測結果準確，操作簡便、快捷，能夠滿足對市場上對蘋果中甲基硫 菌靈殘留量的檢測要求。
【具體實施方式】
[0024] 下面結合【具體實施方式】對本發明的技術方案作進一步詳細地說明。
[0025] 實施例1
[0026] -種蘋果中甲基硫菌靈殘留量的檢測方法，步驟如下：
[0027] 1)標準儲備液的配制，用十萬分之一天平準確稱取甲基硫菌靈標準品10mg于燒杯 中，精確至0. lmg，加乙腈溶解并定容至lOmL容量瓶中，配制成濃度為1000yg/mL的單標儲備 液，在冰箱中4 °C保存；
[0028] 2)標準工作溶液的配制，準確移取lmL單標儲備液置于100mL棕色容量瓶中，用乙 腈定容至刻度，配成l〇yg/mL的標準中間液，根據需要移取適量標準中間液，用乙腈-水溶液 稀釋成 2ng/mL、5ng/mL、1 Ong/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL 的標準工作溶液，其中乙腈-水溶液含〇. 15%甲酸，乙腈-水溶液中乙腈與水的體積比為1:1，各種標準溶液密封保存于4 C冰箱中；
[0029] 3)試樣制備，取lOOOg帶皮蘋果樣品經四分法選取一定量的樣本，經粉碎或組織搗 碎機勻漿，獲得待測樣品，裝入樣品袋中，密封、標記、4°C冰箱中冷藏待用；
[0030] 4)樣品提取，取待測樣品2g，加入5倍量的乙醚，渦旋振蕩2min后再超聲提取8min， 加入2g氯化鈉，再次禍旋4min，5500r/min離心10min;再分2次加入8倍量乙醚，禍旋振蕩 6min后5500r/min離心12min，合并有機相，并采用平行蒸發儀進行第一次濃縮，獲得一次濃 縮液；
[0031] 5)樣品洗脫，將活性炭小柱先用洗脫液進行活化，然后將一次濃縮液倒入活性炭 小柱后用洗脫液洗脫，獲得洗脫收集液，所述洗脫液為乙酸乙酯和丙酮的等體積混合液，用 量為一次濃縮液體積的10倍；
[0032] 6)二次濃縮及過濾，將洗脫收集液采用氮氣吹促進洗脫液揮發的方式進行第二次 濃縮，獲得二次濃縮液，二次濃縮液采用甲醇定容至2ml后，采用0.30μπι濾膜過濾，獲得濾 液，濾液供液質聯用儀測定；
[0033] 7)色譜測定，色譜柱為Hypersi 1G0LDC18，1 · 9μπι，2 · 1mm X 50mm，柱溫為35°C，進樣 量為2yL，采用梯度洗脫，梯度洗脫條件如下：
[0036] 8)質譜測定，將保鮮劑標準品溶液分別采用流動注射直接進樣，通過全掃描確定 化合物母離子，再對母離子進行二級質譜掃描，得到碎片離子，通過優化S-Lens、碰撞能量 等參數進行優化，得到二級質譜圖，獲取定量離子對、定性離子對、S-lens電壓、碰撞電壓、 掃描模式和保留時間，甲基硫菌靈的定量離子對為343、113/151、074,定性離子對為343、 131/118、123, S-lens電壓為76V，碰撞電壓為18; 51，掃描模式為positive，保留時間為 7.6min，離子源為電噴霧離子源，掃描方式為正負切換掃描，檢測方式為多反應監測，毛細 管溫度為350°C，蒸發溫度為300°C，電噴霧電壓為+3500(-3000)V，鞘氣為30arb，輔助氣為 lOarb，碰撞氣為氬氣；
[0037] 9)儀器測定，樣品進樣的程序為:試劑空白、標準工作曲線、樣品空白、樣品添加與 實際樣品，重復以上步驟；
[0038] 10)定量方法，按步驟9)進樣，用色譜工作站建立標準工作曲線，樣品采用工作曲 線定量。
[0039] 實施例2
[0040] -種蘋果中甲基硫菌靈殘留量的檢測方法，步驟如下：
[0041] 1)標準儲備液的配制，用十萬分之一天平準確稱取甲基硫菌靈標準品10mg于燒杯 中，精確至0. lmg，加乙腈溶解并定容至10mL容量瓶中，配制成濃度為1000yg/mL的單標儲備 液，在冰箱中2 °C保存；
[0042] 2)標準工作溶液的配制，準確移取lmL單標儲備液置于100mL棕色容量瓶中，用乙 腈定容至刻度，配成l〇yg/mL的標準中間液，根據需要移取適量標準中間液，用乙腈-水溶液 稀釋成 2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL 的標準工作溶液，其中乙腈-水溶液含〇. 15%甲酸，乙腈-水溶液中乙腈與水的體積比為1:1，各種標準溶液密封保存于2 C冰箱中；
[0043] 3)試樣制備，取1000g帶皮蘋果樣品經四分法選取一定量的樣本，經粉碎或組織搗 碎機勻漿，獲得待測樣品，裝入樣品袋中，密封、標記、2°C冰箱中冷藏待用；
[0044] 4)樣品提取，取待測樣品1.5g，加入8倍量的乙醚，渦旋振蕩3min后再超聲提取 10min，加入4g氯化鈉，再次禍旋5min，6000r/min離心12min;再分2次加入10倍量乙醚，禍旋 振蕩7min后6000r/min離心15min，合并有機相，并采用平