一種古代牛毛微痕跡熒光檢測試紙的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及文物檢測技術領域，尤其涉及一種古代牛毛微痕跡熒光檢測試紙的制備方法。
【背景技術】
[0002]牛毛及牛毛制品的主要成分是蛋白質，長期埋藏在地下環境中，受到濕、熱和微生物等因素的影響，纖維會發生不同程度的降解；出土后因環境條件的劇烈變化，進一步加速了纖維的老化。因此，在漫長的歷史進程中，當年埋入墓葬或遺址中的一些牛毛及其制品早已失去了實體面貌，降解成肽段和氨基酸，或者成為痕跡，或者化入泥土，在肉眼下已經無法辨識，且年代越早的證據越難尋覓，給牛毛類文物的鑒定和保護研究帶來了很大的困難。因此如何利用現代先進的自然科學手段，從牛毛微痕跡中提取古代牛毛的信息，具有重要的科學和文化價值。
[0003]對于出土時嚴重糟朽的牛毛類文物，普通的分析檢測技術，如傅里葉紅外光譜，拉曼光譜，X-衍射分析、質譜等，在遇到這種微痕跡類殘留物分析時，往往束手無策。國內外對于牛毛微痕跡的鑒定，大多數還停留在對纖維形態的分析上，所得出的鑒定結果也沒有十足的準確性。因此，尋找一種更為科學的手段來鑒定牛毛微痕跡是非常必要的。
【發明內容】
[0004]為了解決上述技術問題，本發明提供了一種古代牛毛微痕跡熒光檢測試紙的制備方法。利用本發明方法制備的檢測試紙對古代牛毛微痕跡進行檢測時，具有快速、準確、高靈敏性的特點。
[0005]本發明的具體技術方案為:一種古代牛毛微痕跡熒光檢測試紙的制備方法，采用以下步驟:
a.熒光標記牛毛檢測抗體的制備:采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺介導法偶聯銪標記聚苯乙烯納米球和牛毛檢測抗體，制得熒光標記牛毛檢測抗體。
[0006]b.試紙的組裝:將上述制備的熒光標記牛毛檢測抗體噴涂在玻璃纖維素膜上，然后置于36-38°C下干燥;將牛毛角蛋白抗原和山羊抗兔抗體分別劃在硝酸纖維素膜的檢測線和質控線上，并置于36-38°C下干燥;在PVC底板長1.5 cm端下側粘貼樣品墊，在PVC底板下方距離Icm處粘貼熒光標記結合墊，所述熒光標記結合墊與樣品墊重合1_，在PVC底板中間2.5 cm處粘貼上述硝酸纖維素膜，所述硝酸纖維素膜和熒光標記結合墊重合I _，在PVC底板上方2cm處粘貼吸水墊，硝酸纖維素膜和所述吸水墊重合I mm;將組裝好的板條切成條狀，制得檢測試紙，裝于塑料卡中備用。
[0007]作為優選，所述熒光標記牛毛檢測抗體的制備方法具體為:分別將銪標記聚苯乙烯納米球、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和牛毛檢測抗體加入到20 mmol/L的PBS緩沖液中；在室溫條件下攪拌反應1.5-2.5h后，將得到的產物用10 mmol/L的I3BS緩沖液洗滌，然后重新分散于含有0.05%(w/v)牛血清蛋白的40 mmo 1/L的Tris-HCl溶液中封閉未反應的羧酸鹽;最后采用離心法收集得到熒光標記牛毛檢測抗體，將抗體于4 °C下保存備用。
[0008]作為優選，所述銪標記聚苯乙烯納米球、1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺和牛毛檢測抗體的質量比為1:90:30。
[0009]作為優選，在步驟b中熒光標記牛毛檢測抗體的噴涂量為IyL/cm。
[0010]作為優選，在步驟b中牛毛角蛋白抗原的濃度為4.8mg/mL；山羊抗兔抗體的濃度為1.5mg/mL;牛毛角蛋白抗原和山羊抗兔抗體的用量為I yL/cm。
[0011]作為優選，步驟b中切成條狀后的檢測試紙的寬度為4mm。
[0012]與現有技術對比，本發明的有益效果是:
(I)免疫檢測技術是以特定抗體作為分析試劑，然后對待測物進行定量或者定性分析的一種方法。它是將免疫反應與現代的測試技術相結合而建立的一種超微量測定技術，具有靈敏度高、特異性強、快速和高效的特點。
[0013](2)在檢測過程中，可以通過延長檢測時間，來消除背景熒光造成的干擾。因此，該試紙能夠保持較高的靈敏度。另外，將熒光技術和免疫層析技術相結合，除去了繁瑣的洗滌步驟，具備操作簡單的優點。相對于膠體金免疫層析技術，檢測靈敏度比較高，并且可以進行相對準確的定量分析。
【具體實施方式】
[0014]下面結合實施例對本發明作進一步的描述。
[0015]實施例1
一種古代牛毛微痕跡熒光檢測試紙的制備方法，采用以下步驟:
a.焚光標記牛毛檢測抗體的制備:分別加入Iyg銪標記聚苯乙稀納米球、30 uL 3mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺溶液和30 uL lmg/mL牛毛檢測抗體到10 mL的20mmol/L的PBS(pH 7.4)緩沖液中；在室溫條件下攪拌反應2小時后，得到的產物用10 mmol/L的I3BS緩沖液洗滌，重新分散于含有0.05%(w/v)牛血清蛋白的40 mmol/L的Tris-HCl中封閉60 min。制備得到的焚光標記牛毛檢測抗體采用離心法收集，離心速度為15000r/min，4°C冰箱中保存備用。
[0016]b.試紙的組裝:將上述制備的熒光標記牛毛檢測抗體噴涂在玻璃纖維素膜上(噴涂量為I yL/cm)，然后置于37 °C下干燥；將濃度為4.8mg/mL的牛毛角蛋白抗原和濃度為1.5mg/mL的山羊抗兔抗體分別劃在硝酸纖維素膜的檢測線和質控線上(噴涂量為I yL/cm)，并置于37°C下干燥;在PVC底板長1.5 cm端下側粘貼樣品墊，在PVC底板下方距離Icm處粘貼焚光標記結合墊，所述焚光標記結合墊與樣品墊重合1mm，在PVC底板中間2.5 cm處粘貼上述硝酸纖維素膜，所述硝酸纖維素膜和熒光標記結合墊重合I mm，在PVC底板上方2cm處粘貼吸水墊，硝酸纖維素膜和所述吸水墊重合I mm;將組裝好的板條切成寬度為4mm的條狀，制得檢測試紙，裝于塑料卡中備用。
[0017]c.試紙的特異性檢測:取2 mg古代牛毛微痕跡樣品，研磨均勻，溶解于2mL PBS(pH 7.4)緩沖液中，攪拌均勻，I h后取一滴上清液滴在組裝好的試紙條的樣品墊上；25min后，將試紙置于波長為365nm的紫外熒光激發器下檢測，如果只有質控線顯出熒光條帶，說明樣品中含有牛毛角蛋白，該微痕跡樣品為牛毛微痕跡;如果質控線和檢測線均顯出熒光條帶，說明樣品中不含有牛毛角蛋白，該微痕跡樣品不是牛毛微痕跡。
[0018]實施例2
一種古代牛毛微痕跡熒光檢測試紙的制備方法，采用以下步驟:
a.焚光標記牛毛檢測抗體的制備:分別加入Iyg銪標記聚苯乙稀納米球、30 uL 3mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺溶液和30 uL lmg/mL牛毛檢測抗體到10 mL的20mmol/L的PBS(pH 7.4)緩沖液中；在室溫條件下攪拌反應1.5小時后，得到的產物用10mmol/L的PBS緩沖液洗滌，重新分散于含有0.05%(w/v)牛血清蛋白的40 mmol/L的Tris-H CI中封閉6 O m i η。制備得到的熒光標記牛毛檢測抗體采用離心法收集，離心速度為15000r/min，4 °C冰箱中保存備用。
[0019]b.試紙的組裝:將上述制備的熒光標記牛毛