一種中藥制劑的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種中藥制劑的檢測方法，屬于中藥技術領域。
【背景技術】
[0002] 丹膝顆粒由丹參、牛膝、天麻、牡丹皮等12味中藥組成。傳統醫學認為其具有養陰 平肝，媳風通絡，清熱除煩的功效，用于中風病中經絡恢復期癒血阻絡兼腎虛證，癥見半身 不遂，口舌歪斜，舌強語蹇，偏身麻木，頭暈目眩，腰膝酸軟等，效果較好。目前該制劑的質 量控制標準尚不完善且部分鑒別操作繁瑣，無法簡便有效地定性定量檢測中藥制劑有效成 分。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的是提供一種丹膝顆粒的檢測方法，利用該檢測方法，可簡便有效地 定性定量檢測中藥制劑有效成分，確保對藥品質量有效控制。
[0004] 為實現上述目的，本發明采用W下技術方案：
[0005] -種中藥制劑丹膝顆粒的檢測方法，其特征在于包括；利用TLC法對其中牛膝、丹 參、檐子、淫羊蕾和決明子進行定性鑒別W及用HPLC法對其中的丹酪酸B和天麻素的含量 進行測定。
[0006] 所述的牛膝、丹參、檐子、淫羊蕾和決明子的定性鑒別包括如下步驟：
[0007] A.牛膝的TLC法鑒別：取丹膝顆粒20g，研細，加己醇30~80血，加熱回流0. 5~ 2小時，濾過，濾液蒸干，加水15mL使溶解，用水飽和的正了醇振搖提取3次，每次15mU合 并正了醇液，用正了醇飽和的水洗涂3次，每次15ml，合并水洗液，備用；正了醇液蒸干，殘 渣加己醇5mL使溶解，加入中性氧化鉛柱（100~200目，lOg，直徑1. 5cm)，先用己酸己醋 40mL洗脫，己酸己醋液備用；再用己醇30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶 解，作為供試品溶液；另取晚皮醬麗對照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作為對照品 溶液；照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5~ 15化，分別點于同一硅膠G薄層板上，W己酸己醋-己醇（4 : 1)為展開劑，展開，取出，瞭 干，噴W 5%香草醒硫酸溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色 譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0008] B.丹參的TLC法鑒別：取A項下的備用己酸己醋液，蒸干，殘渣加己酸己醋1血使 溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材Ig，加己酸己醋30mU超聲處理30分鐘，濾過，濾 液蒸干，殘渣加己酸己醋ImL使溶解，作為對照藥材溶液；再取丹參麗IIA對照品，加己酸己 醋制成每ImL含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附 錄VIB)試驗，吸取上述立種溶液各5 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，W環己焼-己酸己 醋-甲酸（12 : 3 : 0.切為展開劑，展開，取出，瞭干；供試品色譜中，在與對照藥材色譜 和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0009] C.檐子的TLC法鑒別：取A項下的備用水洗液，蒸干，殘渣加己醇2mL使溶解，作 為供試品溶液；另取檐子對照藥材0. 5g，加己醇30mU超聲處理10~40分鐘，濾過，濾液蒸 干，殘渣加己醇2mL使溶解，作為對照藥材溶液；再取檐子巧對照品，加己醇制成每1ml含 Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄VI B)試驗，吸 取上述Η種溶液各1~5uL分別點于同一硅膠G薄層板上，W己酸己醋-己醇（4 : 1)為 展開劑，展開，取出，瞭干，噴W 5%香草醒硫酸溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品 色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0010] 化淫羊蕾的TLC法鑒別：取丹膝顆粒16g，研細，加甲醇30血，超聲處理30分鐘， 濾過，濾液蒸干，殘渣加己醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊蕾對照藥材Ig，加甲醇 3〇111以超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加己醇2ml使溶解，制成對照藥材溶液；再取 淫羊蕾巧對照品，加甲醇制成每ImL含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（《中 國藥典》2010版一部附錄VI B)試驗，吸取上述Η種溶液各3~10 μ以分別點于同一硅膠G 薄層板上，W己酸己醋-了麗-甲醇-水（10 : 1 : 1 : 1)為展開劑，展開，取出，瞭干，噴 氯化鉛試液，置紫外光燈（365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品 色譜相應的位置上，顯相同顏色的英光斑點；
[0011] E.決明子的TLC法鑒別：取丹膝顆粒lOg，研細，加己酸己醋30ml，鹽酸1ml，加熱 回流20~40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加己酸己醋2ml使溶解，作為供試品溶液；另取決 明子對照藥材0. 2g，加己酸己醋30ml，鹽酸1ml，加熱回流20~40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘 渣加己酸己醋2ml使溶解，制成對照藥材溶液；再取大黃酪對照品、大黃素對照品，加甲醇 制成每1ml各含Img的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一 部附錄VI B)試驗，吸取上述Η種溶液各5~10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，W環己 焼-己酸己醋-甲酸（12 : 3 : 0.15)為展開劑，展開，取出，瞭干，置紫外光燈（365nm)下 檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同的澄黃色英光 斑點，置氨蒸氣中熏后，斑點變為紅色。
[0012] 上述對牛膝、丹參、檐子、淫羊蕾和決明子的定性鑒別可進一步優選為如下步驟：
[0013] A.牛膝的TLC法鑒別：取丹膝顆粒20g，研細，加己醇50血，加熱回流1小時，濾過， 濾液蒸干，加水15mL使溶解，用水飽和的正了醇振搖提取3次，每次15mU合并正了醇液，用 正了醇飽和的水洗涂3次，每次15ml，合并水洗液，備用；正了醇液蒸干，殘渣加己醇5血使 溶解，加入中性氧化鉛柱（100~200目，lOg，直徑1. 5cm)，先用己酸己醋40血洗脫，己酸 己醋液備用；再用己醇30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶 液；另取晚皮醬麗對照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜 法（《中國藥典》2010版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各10 μ以分別點于同一娃 膠G薄層板上，W己酸己醋-己醇（4 : 1)為展開劑，展開，取出，瞭干，噴W5%香草醒硫酸 溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相 同顏色的斑點；
[0014] B.丹參的TLC法鑒別；取鑒別A項下的備用己酸己醋液，蒸干，殘渣加己酸己醋 ImL使溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材Ig，加己酸己醋30mU超聲處理30分鐘， 濾過，濾液蒸干，殘渣加己酸己醋ImL使溶解，作為對照藥材溶液；再取丹參麗IIA對照品， 加己酸己醋制成每ImL含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（《中國藥典》2010 版一部附錄VI B)試驗，吸取上述Η種溶液各5 μ以分別點于同一硅膠G薄層板上，W環己 焼-己酸己醋-甲酸（12 : 3 : 0.15)為展開劑，展開，取出，瞭干；供試品色譜中，在與對 照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0015] C.檐子的TLC法鑒別；取鑒別A項下的備用水洗液，蒸干，殘渣加己醇2mL使溶解， 作為供試品溶液；另取檐子對照藥材0. 5g，加己醇30mU超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干， 殘渣加己醇2mL使溶解，作為對照藥材溶液；再取檐子巧對照品，加己醇制成每1ml含Img 的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄VI B)試驗，吸取上 述Η種溶液各2uL分別點于同一硅膠G薄層板上，W己酸己醋-己醇（4 : 1)為展開劑， 展開，取出，瞭干，噴W 5%香草醒硫酸溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中， 在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0016] 化淫羊蕾的TLC法鑒別：取丹膝顆粒16g，研細，加甲醇30血，超聲處理30分鐘， 濾過，濾液蒸干，殘渣加己醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊蕾對照藥材Ig，加甲醇 3〇1^，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加己醇2ml使溶解，制成對照藥材溶液；再取 淫羊蕾巧對照品，加甲醇制成每ImL含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（《中 國藥典》2010版一部附錄VI B)試驗，吸取上述Η種溶液各5 μ以分別點于同一硅膠G薄層 板上，W己酸己醋-了麗-甲醇-水（10 : 1 : 1 : 1)為展開劑，展開，取出，瞭干，噴 氯化鉛試液，置紫外光燈（365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜 相應的位置上，顯相同顏色的英光斑點；
[0017] E.決明子的TLC法鑒別：取丹膝顆粒lOg，研細，加己酸己醋30ml，鹽酸1ml，加熱 回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加己酸己醋2ml使溶解，作為供試品溶液；另取決明子 對照藥材0. 2g，加己酸己醋30ml，鹽酸1ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加己酸 己醋2ml使溶解，制成對照藥材溶液；再取大黃酪對照品、大黃素對照品，加甲醇制成每1ml 各含Img的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄VI B) 試驗，吸取上述Η種溶液各5~10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，W環己焼-己酸己 醋-甲酸（12 : 3 : 0.巧）為展開劑，展開，取出，瞭干，置紫外光燈（365nm)下檢視；供試 品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同的澄黃色英光斑點，置氨 蒸氣中熏后，斑點變為紅色。
[0018] 所述的丹酪酸B的含量測定，照高效液相色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VI D試驗，步驟如下：
[0019] (1)色譜條件：用十八烷基娃焼鍵合硅膠為填充劑；流動相為甲醇-己臘-甲 酸-水（30:10:1:59)，等度洗脫；流速；0. 8~1. 2血.min 1 ;檢測器為UV，檢測波長；280~ 290皿，優選值為283~288皿，更優選為286皿；柱溫30~40°C ;進樣量5~20 μ L ;理論 板數按丹酪酸Β計不低于3000 ;
[0020] (2)對照品溶液的制備；取丹酪酸Β對照品適量，精密稱定，加75%甲醇制成每 1血含40 μ g的溶液，即得；
[0021] (3)供試品溶液的制備；取丹膝顆粒粉末約0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精 密加入提取溶劑50mU塞密，稱定重量，用一定方法提取適當時間，放冷，再稱定重量，用 相應提取溶劑補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，用0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，即得； 其中所述的丹膝顆粒粉末為粗粉；所述的提取溶劑可W為己醇、甲醇、20%甲醇、50%甲醇 或75%甲醇中的任一一種，優選為75%甲醇，所述的提取方法可W為超聲提取法、回流提 取法、閃式提取法或索式提取法中的任一一種，優選回流提取法；所述的提取適當時間為 30 ~90min，優選為 60min〇
[0022] 本發明中用HPLC法測定所述丹膝顆粒中丹酪酸B含量，規定所述丹膝顆粒中丹酪 酸B含量不得低于3. 60mg/g。
[0023] 所述的天麻素的含量測定，照高效液相色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VI D 試驗，步驟如下：
[0024] (1)色譜條件：用十八烷基娃焼鍵合硅膠為填充劑；流動相為己臘-0. 05%磯酸 (3:97)，等度洗脫；流速；0. 8~1. 2血.min 1 ;檢測波長；210~230皿，優選為220皿；柱溫 30~4(TC ;進樣量5~20 μ L。理論板數按天麻素計不低于5000 ;
[002引 似對照品溶液的制備；取天麻素對照品適量，精密稱定，加水制成每ImL含50 μ g 的溶液，即得；
[0026] (3)供試品溶液的制備；取本品粉末約2. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加 入提取溶劑50mU塞密，稱定重量，用一定方法提取適當時間，放冷，再稱定重量，用相應提 取溶劑補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25mU蒸干，殘渣加60 %~80 %己醇 2血使溶解，加在中性氧化鉛（100~200目，lOg，內徑為1~1.5cm)上，用60 %~80 % 己醇lOOmL洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加水溶解，并轉移至5mL量瓶中，加水至 刻度，搖勻，濾過，取續濾液，用0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，即得供試品溶液；其中所述的丹 膝顆粒粉末為粗粉；所述的提取溶劑為己醇、甲醇、30%甲醇、50%甲醇或70%甲醇中的任 一一種，優選為甲醇；所述的提取方法為超聲提取法、回流提取法、閃式提取法或索式提取 法中的任一一種，優選回流提取法；所述的提取適當時間為30~90min，優選為60min。
[0027] 本發明用HPLC法測